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2.8　显色稳定性实验　精密吸取人参皂苷 Rb1 对
照品溶液 0.5 mL ,按 2.4项下显色方法显色后 ,分别
在 0 ,0.5 ,1 , 1.5和 2 h 测定吸光度 ,结果表明在 2 h
内测定结果较稳定 , RSD为 0.56%。
2.9　加样回收率实验[ 4] 　精密称取昆仑雪菊粉末
0.5 mg 6份 ,分别精密加入人参皂苷 Rb1 溶液 0.2
mL ,按 2.1项下供试品溶液的制备方法和 2.4项下
的显色方法操作 ,测定吸光度 ,计算回收率 ,平均回收
率为 103.82%, RSD为 3.97%。
2.10　样品含量测定　精密吸取样品液 0.01 mL ,按
2.4项下的显色方法显色 ,在 314 nm 处测定其吸光
度 ,以人参皂苷 Rb1 为对照品计算得昆仑雪菊总皂
苷的含量为 8.36%,含量均以干燥品计。
3　讨论
用紫外分光光度法测定总皂苷的含量常利用皂
苷与芳香醛-硫酸或高氯酸的显色反应进行比色定
量。目前较常用的方法有高氯酸法 、香草醛-冰醋酸-
高氯酸法[ 5-6] 和茴香醛-浓硫酸法 。本实验中采用高
氯酸法 ,最大波长明显 ,反应相对稳定。
皂苷与高氯酸的显色反应非常灵敏 ,保证实验操
作过程的平行性是关键。在本实验中 ,加入高氯酸显
色后 ,采用旋涡混匀再水浴的方式 ,避免振幅不匀 、管
壁黏附等人为操作误差而影响实验的结果。另外 ,各
样品的反应时间应严格一致 ,水浴后以冰水混合物快
速及时冷却。
本文所采用高氯酸显色测定昆仑雪菊总皂苷含
量的方法 ,快速 、方便 ,结果准确 ,灵敏度高 ,重复性
好 ,可为维吾尔药昆仑雪菊药材及其制剂的质量控制
提供参考依据。
参考文献:
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(收稿日期:2010-10-26)
HPLC法测定不同产地虎耳草中没食
子酸 、原儿茶酸和虎耳草素的含量
张　丽1 ,冯　锋1＊ ,柳文媛2(1.中国药科大学天然药物化
学教研室 , 江苏 南京 210009;2.中国药科大学药物分析教研
室 , 江苏 南京 210009)
摘要:目的　建立虎耳草中没食子酸 、原儿茶酸和虎耳草素的
含量测定方法。方法　采用 Lich rospher C18色谱柱(150 mm
×4.6 mm , 5 μm), 甲醇-1 g · L-1磷酸溶液为流动相 ,采用梯
度洗脱程序 , 检测波长为 270 nm , 流速 1 m L ·min-1。 结果
没食子酸 、原儿茶酸和虎耳草素分别在 1.08～ 16.20 , 1.03～
15.45 和 10.00～ 150.00 mg · L-1质量浓度范围内呈良好的线
性关系;平均回收率分别为 100.59%, 98.72%和 103.94%,
RSD分别为2.23%, 8.96%和 1.89%。不同产地样品中 3种主
要成分的含量差异较大。结论　该方法操作简便, 结果准确 ,
重复性好 ,为虎耳草的进一步开发利用及质量控制提供依据。
关键词:虎耳草;高效液相色谱法;没食子酸;原儿茶酸;虎耳
草素
doi:10.3969/ j.issn.1004-2407.2011.02.006
中图分类号:R927.2　　　文献标志码:A　　　
文章编号:1004-2407(2011)02-0088-03
作者简介:张丽 , 女 , 硕士研究生
＊通信作者:冯锋 , 男 , 教授 ,硕士生导师
　　虎耳草为虎耳草科虎耳草属植物虎耳草
(Sax i fraga stoloni fera(L.)Meeb.)的全草 ,又名
金丝荷叶 、耳朵红 、老虎草 、烂耳草 、石荷叶等 ,主要分
布于华东 、中南 、西南南部各省区 ,河南和陕西的部分
地区均有分布;民间以其全草入药 ,具有祛风 、清热 、
凉血 、解毒等功效 ,传统用于治疗风疹 、湿疹 、中耳炎 、
丹毒 、咳嗽 、吐血 、痔疮等疾病[ 1] 。近年来将虎耳草制
成注射剂用于治疗增生性疾病[ 2-3] ,如老年性前列腺
增生 、乳腺小叶增生等 ,均取得较好的疗效。虎耳草
含量较高的成分主要有虎耳草素 、有机酸类 、黄酮
类[ 4-5] 。最近研究表明 ,虎耳草主要活性成分没食子
酸 、原儿茶酸等有机酸类 ,具有一定的抗雄性激素作
用 ,影响前列腺内的二氢睾丸酮 ,来调控前列腺细胞
的生长与细胞凋亡[ 6] ,在治疗前列腺增生方面疗效显
著 。虎耳草主要的提取方法有醇提法 、水提法和超声
提取法[ 7] 。目前已知虎耳草素的含量测定方法有分
光光度法 、薄层扫描色谱法 、高效液相色谱法[ 8] 。我
们在研究过程中采用了乙醇 、体积分数 70%乙醇 、体
积分数 50%乙醇 、碱水和水几种不同溶剂 ,用浸渍 、
回流2种提取方法 ,发现采用体积分数 70%乙醇回流
提取的方法效率较高 ,用高效液相色谱法测定虎耳草
中虎耳草素的含量较方便。为了有效控制不同产地虎
耳草的质量 ,笔者建立了梯度洗脱高效液相色谱法同
时测定不同产地虎耳草药材中没食子酸 、原儿茶酸和
88 西北药学杂志　2011 年 4 月　第 26 卷　第 2 期
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虎耳草素的含量 ,为虎耳草的进一步研究提供依据 。
1　仪器与试药
1.1　仪器　岛津 LC-2010C 液相色谱 、Class-VP 色
谱工作站 。
1.2　试药　虎耳草药材分别购自安徽凤娇 、安徽亳
州华荣堂 、湖北三义公司 、湖北何平 、江苏南通等地 ,
共收集 5批样品 ,经中国药科大学中药鉴定教研室鉴
定为虎耳草科植物虎耳草的干燥全草;对照品:虎耳
草素 、原儿茶酸 、没食子酸(均由中国药科大学天然药
化教研室提供 ,质量分数大于 99%);甲醇(江苏汉邦
科技有限公司 ,特级纯);磷酸(南京化学试剂一厂 ,分
析纯);纯净水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　Lichro spher C18色谱柱(150 mm ×
4.6 mm , 5μm);甲醇-1 g ·L-1磷酸溶液为流动相 ,
采用梯度洗脱程序 ,见表 1;柱温:25 ℃;检测波长:
270 nm ;流速:1 mL ·min-1 ;进样量:10 μL。此色谱
条件下 ,虎耳草中没食子酸 、原儿茶酸和虎耳草素的
保留时间分别为 3.76 ,6.35和 7.96 min ,理论板数
均不低于 3 000 。色谱峰达到较好分离效果 ,见图 1。
表 1　流动相梯度洗脱程序
时间/min 1 g· L -1磷酸水溶液体积分数/ % 甲醇体积分数/ %
0 85 15
6 75 25
12 55 45
20 45 55
25 85 15
图 1　虎耳草 HPLC图谱
A.没食子酸 、原儿茶酸与虎耳草素对照品;B.虎耳草样品
1.没食子酸;2.原儿茶酸;3.虎耳草素
2.2　供试品溶液的制备　虎耳草药材粉碎后 ,称取
样品粉末约 2.0 g ,精密称定;置于 100 mL 圆底烧瓶
中 ,加入 40 mL 体积分数 70%的甲醇 ,冷凝热回流提
取 2 h;提取完毕 ,滤过 ,用 40 mL 水反复洗涤药渣 8
次 ,合并滤液 ,再用水将滤液定容于 100 mL 量瓶中 ,
进样前 ,用 0.45 μm 滤膜过滤 。
2.3　对照品溶液及标准曲线的制备　准确称取没食
子酸 、原儿茶酸和虎耳草素对照品适量 ,置于量瓶中 ,
加甲醇使其质量浓度分别为 0.108 ,0.103和 1 g·L-1
的储备液;移取一定量的储备液 , 加甲醇分别配制成
含 1.08 ,2.16 ,5.40 ,10.80和 16.20 mg ·L-1没食子酸
对照品溶液 ,含 1.03 ,2.06 ,5.15 ,10.3和 15.45 mg ·L-1
原儿茶 酸对照品溶液 ,含 10.00 ,20.00 ,50.00 ,100.00和
150.00 mg ·L-1虎耳草素对照品溶液;分别精密吸
取 10μL 对照品溶液进样 ,以对照品溶液质量浓度
(mg ·L -1)为横坐标 ,峰面积为纵坐标绘制标准曲线 ,
得没食子酸标准曲线回归方程为:Y =32 031X+718.1 ,
r=0.999 5 ,线性范围为 1.08 ～ 16.20 mg ·L-1 ,原儿
茶酸标准曲线回归方程为:Y =26 598X-1 720 , r=
0.998 4 ,线性范围为 1.03 ～ 15.45 mg ·L-1 , 虎耳草
素标准曲线回归方程为:Y =12 727X +29 172 , r =
0.999 5 ,线性范围为 10.00 ～ 150.00 mg ·L-1 。
2.4　精密度实验　取同一批虎耳草药材 ,按 2.2 方
法制备得供试品溶液 , 按 2.1项下色谱条件重复进
样 6次 ,没食子酸 、原儿茶酸和虎耳草素的 RSD分别
为 1.94%,4.12%和 2.00%(n =6),表明仪器精密
度较好 。
2.5　稳定性实验　取同一批虎耳草药材 ,按 2.2 项
下方法制备溶液 , 放置 0 , 2 , 4 ,6 和 8 h分别进样 10
μL 测定 。结果表明 ,供试品溶液在 8 h 内基本稳定 。
没食子酸 、原儿茶酸和虎耳草素的峰面积 RSD 分别
为 2.17%,1.73%和 1.46%,表明样品在制备供试品
溶液后至少 8 h内稳定 。
2.6　重复性实验　取同一批虎耳草药材 , 按2.2项下
供试品溶液制备方法平行制备 5 份 ,按2.1色谱条件测
定。结果没食子酸平均含量为 0.025%,RSD为2.51%;
原儿茶酸平均含量为 0.011%, RSD为 6.38%;虎耳
草素平均含量为 0.404%, RSD为 2.27%,表明本测
定方法的重复性良好 。
2.7　加样回收率实验　准确称取已知含量的湖北何
平虎耳草样品适量 ,加入定量的没食子酸 、原儿茶酸
和虎耳草素对照品溶液 ,依法提取和测定 ,计算平均
回收率 。没食子酸 、原儿茶酸和虎耳草素的加样回收
率分别为 100.59% , 98.72%和 103.94%。
2.8　样品测定　取不同产地的虎耳草药材 ,按 2.2项
下方法操作 ,测定其中没食子酸、原儿茶酸和虎耳草素
含量 ,结果见表 2 , 所测样品没食子酸含量为 0.025%～
0.055%,平均为 0.040%(n =5);原儿茶酸含量为
0.011%～ 0.059%,平均为 0.027%(n =5);虎耳草
素含量为 0.207%～ 0.495%,平均为 0.370%(n =
5)。其中采自湖北何平的样品所含没食子酸 、原儿茶
酸及虎耳草素均较高 。
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表 2　不同产地虎耳草药材含量测定结果(n=3)
药材产地 没食子酸含量/% 原儿茶酸含量/ % 虎耳草素含量/ %
安徽凤娇 0.025 0.011 0.404
安徽亳州华荣堂 0.033 0.021 0.207
湖北三义公司 0.055 0.059 0.347
湖北何平 0.049 0.032 0.495
江苏南通 0.038 0.013 0.394
3　讨论
3.1　检测波长的选择　查阅文献得知 ,没食子酸 、原
儿茶酸 、虎耳草素均在 270 nm 附近有最大吸收 ,故
选择 270 nm 为 3个成分的检测波长 。
3.2　流动相的选择　按照文献所述 ,用甲醇-1 g ·L-1
磷酸(65∶35)在 270 nm 进行检测 ,虎耳草素和其他
杂质峰未得到较好的分离 ,后改用梯度洗脱 ,最终选
用甲醇-1 g ·L-1磷酸(15∶85)为流动相进行梯度洗
脱 ,达到较好的分离效果 ,而后加大甲醇的比例 ,将药
材中极性较小的物质全部洗脱出来 ,避免再次进样的
干扰 ,兼顾了分离度和较好的出峰时间 。
3.3　供试品提取条件的考察　取供试品适量 ,分别
用水 ,乙醇 ,体积分数 30%, 50%和 70%乙醇 ,采用冷
浸 、温浸和热回流提取 ,结果表明 ,热回流提取效率最
高 ,水提取杂质较多 、虎耳草素含量较低 ,乙醇提取色
素较多 ,故选用体积分数 70%乙醇热回流提取 。
3.4　含量比较　采自湖北何平的虎耳草样品中没食
子酸 、原儿茶酸和虎耳草素含量均较高 ,同时湖北产
地的药材没食子酸和原儿茶酸含量均高于安徽产地 ,
虎耳草素含量也相对较高 。
参考文献:
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(收稿日期:2010-11-23)
糙叶五加不同部位 6 , 7-二甲氧基
香豆素的RP-HPLC法测定
戴秀珍1 ,刘向前1 , 2＊ ,冯　胜1 ,邹亲朋1(1.中南大学化
学化工学院 , 湖南 长沙 410083;2.湖南中医药大学药学院 ,
湖南 长沙 410208)
摘要:目的　建立糙叶五加不同部位中的 6 , 7-二甲氧基香豆
素的含量测定方法。方法　采用 RP-HPLC 法。色谱柱:
ODS C18柱(250 mm×4.6 mm , 5 μm);流动相:甲醇-磷酸水溶
液(pH=3.0)-乙腈-四氢呋喃(15∶77∶6∶2);检测波长:340
nm;柱温:25 ℃;流速:0.8 m L· min -1 , 进样量:10 μL。结果
糙叶五加根、茎、叶中6 ,7-二甲氧基香豆素的含量分别为 0.039 ,
0.002 和 0.466 mg · g -1 。结论　该方法准确 , 重复性好 , 可
作为糙叶五加中 6 , 7-二甲氧基香豆素的定量分析方法。
关键词:6 , 7-二甲氧基香豆素;糙叶五加;HPLC
doi:10.3969/ j.issn.1004-2407.2011.02.007
中图分类号:R927.2　　　文献标志码:A　　　
文章编号:1004-2407(2011)02-0090-03
作者简介:戴秀珍 , 女 ,在读硕士研究生
＊通信作者:刘向前 ,男 , 教授 ,硕士生导师
　　糙叶五加(Acanthopanax henry .(Oliv.)Harms),
又名亨利五加 ,是五加科五加属植物 ,是中国特有植
物[ 1] ;味辛 ,性温;具有祛风利湿 、活血舒筋 、理气止痛
功效;主治风湿痹痛 ,拘挛麻木 ,筋骨痞软 ,水肿 ,跌打
损伤 ,疝气腹痛[ 2] 。迄今未见对糙叶五加不同药用部
位 6 ,7-二甲氧基香豆素进行系统分析的报道。我们
首次采用 RP-HPLC 法对糙叶五加不同药用部位中
6 ,7-二甲氧基香豆素含量进行测定 ,以期为其开发利
用提供参考 。
1　仪器与试药
1.1　仪器　LC-10AT 型高效液相色谱仪(日本岛津
公司);SPD-10A 紫外检测器(日本岛津公司);CBM-
102自动进样器(日本岛津公司 );LC-10A T 双泵;
AUW120D高精度电子天平(日本 Shimadzu 公司);
AS3120A 超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限
公司)。
1.2　试药　6 , 7-二甲氧基香豆素(上海友思研究所 ,
20061225);甲醇 、乙腈(色谱纯);磷酸 、四氢呋喃(分析
纯 ,天津市科密欧化学试剂有限公司);水为双蒸水。
1.3　样品来源　糙叶五加于 2009年 11月采集于湖
南 ,自然阴干;经韩国庆熙大学陆昌洙教授鉴定为糙
叶五加 Acanthopana x henry i (Oliv.)Harms 的根 、
茎 、叶 ,标本存于中南大学制药工程系标本室(标本
号:ZN20091106)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件[ 3-4] 　色谱柱:ODS C18柱(250 mm×4.6
mm ,5 μm);流动相:甲醇-磷酸水溶液(pH =3.0)-
90 西北药学杂志　2011 年 4 月　第 26 卷　第 2 期