全 文 ：藏药五脉绿绒蒿中多糖含量的测定
丁　莉 ,李锦萍 ,马妍萍
(青海师范大学 生命与地理科学学院 ,青海 西宁　810008)
摘　要:利用 80%乙醇溶液沉淀样品中的多糖 ,再用碱性二阶铜试剂选择性的沉淀具有葡聚糖结构的多糖 ,采用苯酚-硫酸
比色法进行多糖含量分析.结果表明:方法在 10～ 200ug/ml 范围呈良好的线性关系 ,其相关系数为 0.9986 ,平均回收率为
93.2%.本法简便 、准确、重现性良好.
关键词:藏药;五脉绿绒蒿;多糖;含量测定
中图分类号:O629　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1001-7542(2007)01-0074-02
五脉绿绒蒿(Meconopsis Quintupinenia Regels)属罂粟科植物 ,分布于我国西藏 、陕西 、甘肃 、青海 、四川
等地 ,其干燥全药是传统的藏药 ,有清热解毒 、镇痛 ,消炎利尿的功效[ 1] .其花入药 ,具有镇痛息风 、定喘 ,
用于治疗肝炎 ,胆囊炎 ,肺炎 ,肺结核 ,胃溃疡 ,小儿惊风咳喘等[ 1] ,表现出广阔的应用前景.有关五脉绿
绒蒿化学成分的报道仅限于生物碱和简单的呋喃衍生物[ 2] .本文采用苯酚-硫酸比色法和分光光度法 ,
从该植物中分离并测定了多糖化合物的含量 ,提供一条测定五脉绿绒蒿中多糖的含量方法.
1　仪器 、试剂与材料
1.1　仪器与试剂　80%乙醇溶液(v/v);10%氢氧化钠溶液(w/v);硫酸溶液(100mL/L).铜储备液:称取
0.6g CuSO4·5H2O , 6.0g柠檬酸钠 ,加水溶解后定容至 200mL.铜试剂溶液:取水 50mL ,加入 50mL 铜储备
液 ,混匀后加入 12.5g 固体无水硫酸钠并使之溶解.洗涤液:取水 50mL ,加入 10mL铜储备液 ,10mL氢氧
化钠溶液 ,混匀(临用现配).苯酚溶液(60g/L):称取苯酚 6.0g ,加水溶解并定容至 100mL(冰箱中保存).
葡聚糖标准储备液:精确称取分子量 50000 ,干燥至恒重的葡聚糖 0.5000g ,加水溶解 ,并定容至 100mL
(冰箱中保存),此溶液每毫升含 5.00mg葡聚糖 ,用时取适量稀释至每毫升含葡聚糖 0.100mg ,为标准使
用液.
1.2　样品液的制备
1.2.1　样品提取　称取五脉绿绒蒿全草 2.0g ,加水 40mL ,于沸水浴中加热 2h ,冷却至室温后用水定容
至50.0mL ,过滤 ,弃去初滤液 ,收集余下滤液供沉淀多糖.
1.2.2　沉淀多糖　精密吸取 2.0mL上述的滤液 ,置于 10.0mL离心管中 ,加入无水乙醇 8.0mL ,搅拌均
匀后以 3000r/min离心5min ,弃去上清夜 ,沉淀用 10mL80%乙醇溶液洗涤后离心 ,如此操作 2次.用 2mL
水溶解沉淀 ,混匀.
1.2.3　沉淀葡聚糖　在 1.2.2项溶液中加入10%氢氧化钠溶液2.0mL ,加2.0mL铜试剂溶液 ,于沸水浴
中煮沸2min ,冷却后以 3000r/min离心 5min ,弃清液 ,沉淀用洗涤液洗涤 ,离心后弃去上清液 ,重复 2次.
1.2.4　溶解定量　将 1.2.3中的沉淀用硫酸溶液(100mL/L),试沉淀物的量决定溶解定容量.
2　方法[ 3 ,4 , 5]
2.1　标准曲线绘制　分别吸取葡聚糖标准使用液 0;0.3;0.6;0.9;1.2;1.5;2.0mL(相当于葡聚糖 0;
0.03;0.06;0.09;0.12;0.15;0.20mg),精确补水至 2.0mL ,加入 1.0mL 苯酚溶液 ,10.0mL浓硫酸 ,混匀 ,于
沸水浴中煮沸 5min ,取出冷却后静置 15min ,用分光光度计在 485nm波长处以试剂空白溶液为参比 ,1cm
收稿日期:2006-09-12
作者简介:丁莉(1967-),女(汉族),江苏金坛人 ,副教授.
2007年
第1期 　　　 　　　　　
青海师范大学学报(自然科学版)
Journal of Qinghai Normal University(Natural Science)　　 　　　　　　
2007
No.1
DOI :10.16229/j.cnki.issn1001-7542.2007.01.021
比色皿测定吸光度 ,以葡聚糖浓度为横坐标 ,吸光度为纵坐标 ,作回归处理.
2.2　样品液含量计算　按标准曲线制备项方法测定 ,从回归方程中求出供试液中葡聚糖含量 ,按下式
计算样品中糖含量:糖含量(%)=C×D×fW%,式中 C为回归方程所测糖浓度(μg/mL),D=10×100 mL
为供试液的稀释倍数 , f为换算因子 ,W为供试品重量(g).
3　结果及分析
3.1　标准曲线　得回归方程 Y=0.31×10-2X+0.0236 , R=99.86%,表明葡萄糖浓度在 10 ～ 200μg/mL
范围内与吸光度呈较好的线性关系.结果见附图:
3.2　精密度　准称 6份同一标准样品液 ,按上述方
法测定 ,测得 RSD为 0.31%,表明进样精密度良好.
3.3　回收率测定　依上述方法进行了加标实验 ,测
得结果93.2%,说明该方法具有一定的可行性.
3.4　重现性实验　按“2.1”项方法制备供试品 ,各取
20μl进样 RSD为 2.51%,表明重现性较好.
3.5　样品含量测定结果　测得含糖量为 5.06%.
3.6　讨论
我们采用 85%乙醇预提取的目的是除去五脉绿
绒蒿中的单糖 、低聚糖 、苷类 、生物碱类和其它醇溶
性成分等的干扰且切实可行 ,因为多糖在 80%乙醇溶液中沉淀 ,与单糖和低聚糖及甙类物质分离[ 6] .实
际应用苯酚-硫酸法的过程中 ,特别注意:苯酚-硫酸试剂一定要现配现用;反应液要充分混匀 ,反应时
间 、温度的控制也要求较严 ,否则将影响实验结果.沉淀用水溶解后再用碱性二阶铜试剂选择性地从其
它高分子物质中沉淀出具有葡聚糖结构的多糖 ,苯酚-硫酸可与其中的多糖起显色反应 ,生成橙黄色化
合物 ,可于 485nm 处比色定量.多糖具有许多生理活性和保健功能[ 6] ,植物来源的多糖类化合物由于独
特的功效和低毒性倍受亲睐 ,在临床应用和保健品开发上将有广阔的前景.
参考文献:
[ 1] 　中国科学院西北高原生物研究所.藏药志[M].1991.9.364.
[ 2] 　王明安.藏药五脉绿绒蒿化学成分的研究(I)[ J] .兰州大学学报 , 1991, 27(4):80.
[ 3] 　苗明三 ,李振国.现代实用中药控制技术[ M] .北京:人民卫生出版社 , 2000 ,482.
[ 4] 　段昌令 ,乔善义 ,王乃利 ,等.枸杞子活性多糖的测定[ J] .药学学报 , 2001 , 36(3):196-199.
[ 5] 　王桂有.含丹参葡萄糖注射液中葡萄糖含量测定方法研究[ J] .现代中药研究与实践 , 2003 , 17(5):44-45.
[ 6] 　赵国华.活性多糖的研究进展[ J] .食品与发酵工业 , 2002.
Determination of the Polysaccharides Content of a Tibeban Medicine
in Meconopsis Quintupinenia Regels
DINGLi , LI Jin-ping ,MA Yan-ping
(Department of Life and Geography Sciences , Qinghai Normal University , Xining 810008 ,China)
Abstract:Using first many sugar that 80%ether aqua precipitate sample inside , trying with alkaline two more
rank copper a precipitayes to have the sugar of optionally structural and many sugar.The polysaccharide s content
was determined by the colorimetric with sulfuric acid and phenol.Results show that the method was liner at the rang
of 10 ～ 200ug/mL , the related coefficient to be 0.9986 , the average was 93.2%.The method was simple , accurate
and reproducible.
Key words:Tibeban medicine;Meconopsis Quintupinenia RegelsPolysaccharides;Content determination
75第 1期　　　　　　　丁莉 ,李锦萍 ,马妍萍:藏药五脉绿绒蒿中多糖含量的测定