全 文 ： 2010, Vol. 31, No. 23 食品科学 ※基础研究18
新疆粉绿铁线莲不同部位总黄酮的抗氧化活性
古丽巴哈尔·阿巴拜克力
(新疆师范大学生命科学学院，新疆 乌鲁木齐 830054)
摘 要：采用有机溶剂提取新疆粉绿铁线莲植物总黄酮，测定总黄酮提取液的还原力、抗氧化能力。以VC作对照，
不同部位还原力强弱为：VC＞粉绿铁线莲叶＞粉绿铁线莲花＞粉绿铁线莲果实＞粉绿铁线莲茎。对于羟自由基和
超氧阴离子自由基的清除能力粉绿铁线莲叶优于其他 3个部位，对于DPPH自由基的清除率大小依次为粉绿铁线莲
果实 ＞粉绿铁线莲花＞粉绿铁线莲叶＞粉绿铁线莲茎。因此，粉绿铁线莲总黄酮具有一定的抗氧化能力，值得深
入研究其生理功能以开发相应的功能产品。
关键词：粉绿铁线莲；总黄酮；还原力；抗氧化
Antioxidant Activity of Total Flavonoids from Different Organs of Clematis glauca Willd. in Xinjiang
Gulibahaer ABABAIKELI
(College of Life Science, Xinjiang Normal University, Urumqi 830054, China)
Abstract ：The organic solvent extraction of different organs of Clematis glauca Willd. in Xinjiang was performed for obtaining
total flavonoids, and the extract obtained was tested for its reducing power and its abilities to scavenge hydroxyl, superoxide
anion and DPPH free radicals using VC as the control. The order of reducing power of different organs of Clematis glauca Willd
and VC from strong to weak was VC ＞ leaf ＞ flower ＞ fruit ＞ stem. The leaves of Clematis glauca Willd. was superior to the
other three organs of the plant in hydroxyl and superoxide anion free radical scavenging capacities. As for the ability to scavenge
DPPH free radicals, the four organs of the plant were ranked as follows: fruit ＞ flower ＞ leaf ＞ stem. In a word, the total
falavonoids from Clematis glauca Willd. have some antioxidant activity and thus, deserve to be developed as functional products
based on in-depth studies of their physiological functions.
Key words：Clematis glauca Willd.；total flavonoid；reducing power；antioxidant activity
中图分类号：Q946.8 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)23-0018-04
收稿日期：2010-08-18
基金项目：新疆濒危物种保护生物学重点实验室资助项目
作者简介：古丽巴哈尔·阿巴拜克力( 1 9 6 9 —)，女，副教授，硕士，研究方向为植物有效成分分析。
E-mail：gvlbahar.a@163.com
粉绿铁线莲(Clematis glauca Willd.)藤本，生于山
地灌丛，海拔 1700～2500米，平原河漫滩城郊田间及
荒地。分布于我国新疆、青海、甘肃、陕西、山西。
国外在蒙古、西伯利亚及中亚地区也有分布。全草可
以入药，可祛风湿，主治慢性风湿性关节炎，关节疼痛；
熬膏外敷可以治疗疮；枝叶水煎外洗，可止瘙痒症[ 1]。
自由基是具有不成对电子的原子或分子，其性质不
稳定，大多富于反应活性。近年来，研究自由基及其
抑制剂、清除剂和动力学机制逐渐成为化学及医学中的
一个新的研究方向，受到人们越来越大的关注，并取
得不少研究成果[ 2- 3]。目前，国内外有关于粉绿铁线莲
的报道不多，多集中在其挥发油、黄酮类化合物提取
方面[4]，本实验研究新疆地产药用植物粉绿铁线莲不同
部位中黄酮类化合物的抗氧化活性，旨在为开发和利用
其有效成分提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
粉绿铁线莲采自新疆乌鲁木齐县永丰乡农田田埂等地。
芦丁对照品、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙
醚、无水乙醇、三氯化铁、过氧化氢、硫酸亚铁、
水杨酸、铁氰化钾、三氯乙酸、邻苯三酚、三羟甲
基氨基甲烷、盐酸、DPPH(1,1二苯基苦味酰基苯肼)、
VC 等均为分析纯。
1.2 仪器与设备
粉碎机、2800UV-VIS扫描型紫外可见分光光度计
. . ..
19※基础研究 食品科学 2010, Vol. 31, No. 23
上海尤尼柯仪器有限公司；PL-IC电子天平 上海梅特
勒 -托利多仪器有限公司；DHG-9141A型电热恒温干燥
箱、SHZ-D循环水式真空泵、HH-S电热恒温水浴锅、
RE-52A旋转蒸发器。
1.3 黄酮的测定
1.3.1 试剂制备
体积分数 4%过氧化氢水溶液、pH6.8磷酸缓冲液、
pH8.2 Tris-HCl缓冲液[5]。
1.3.2 对照品溶液的制备[6]
准确称取芦丁对照品(120℃干燥至恒质量)0.0200g，
加 30% 乙醇溶解，定容到 100mL 容量瓶中，摇匀。
1.3.3 标准曲线的绘制
准确吸取 0.200mg/mL的芦丁对照品溶液 0.0、1.0、
2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分别置于 25mL容量瓶
中，各加 5g/100mL亚硝酸钠水溶液 1.0mL，混匀，放
置 6min；加 10g/100mL硝酸铝水溶液 1.0mL，混匀，放
置 6min；加 4g/100mL氢氧化钠 10mL，再加 30%乙醇
至刻度，摇匀，放置 15min。按照分光光度法在 510nm
波长处，以试剂空白作参比测定吸光度。以吸光度为
纵坐标，芦丁浓度为横坐标，绘制标准曲线。
1.3.4 粉绿铁线莲不同部位中总黄酮的提取[7-8]
铁线莲样品不同部位样品自然风干，然后粉碎成
末。分别准确称取一定量的不同部位粉末，置于索氏
提取器中，乙醚于 45℃水浴回流脱脂。直到醚层无色
为止，弃醚层，挥干乙醚，按料液比 1:40的比例用 70%
乙醇于 70℃水浴中连续提取 2h，趁热过滤。同样的方
法提取两次，合并两次提取液。用 70%乙醇洗涤样品
粉末(10mL× 2)，过滤，将提取液和洗液合并，浓缩
提取液。用 30%乙醇定容于 100mL容量瓶中，备用。
1.3.5 测定方法
分别量取不同部位样品液 0.4mL，于 25mL容量瓶
中，按照标准曲线制备项中的方法进行操作，于 510nm
波长处测定吸光度。
1.3.6 总黄酮含量计算公式
总黄酮含量 /(mg/mL)=稀释倍数× c
式中：c为测定样品液中芦丁的含量 /(mg/mL)；稀释
倍数 =100mL/0.4mL=62.5；重复测定 4次，取其平均值。
1.4 还原力的测定
分别准确吸取 2.0mL不同质量浓度的不同部位样品
液、VC溶液，加入 0.2mol/L pH6.8磷酸缓冲液 2.0mL，
1%铁氰化钾 2.0mL，50℃水浴 20min后急速冷却，加
入 10g/100mL三氯乙酸水溶液 2.0mL，于 3000r/min离心
10min，取上清液 5.0mL，加蒸馏水 4.0mL、0.1%三氯
化铁 1.0mL，混合 10min后以蒸馏水作参比于 700nm波
长处测定吸光度。
1.5 抗氧化性能测定
1.5.1 测定粉绿铁线莲不同部位总黄酮对羟自由基的清
除率[9]

A0－(Ax－Ax0)
·OH清除率 /%=———————× 100 (1)

A0
式中：A 0 为空白对照溶液吸光度；A x 为样品液吸
光度；A x0 不加 H 2O 2 样品液的本底吸光度。
1.5.2 测定不同部位总黄酮对超氧阴离子自由基的清除率[10]

A空－A样
O2·清除率 /%=—————× 100 (2)

A空
式中：A 空为空白管吸光度；A 样为样品液吸光度。
1.5.3 测定不同部位总黄酮对DPPH自由基的清除率[11]

AI－AJ
DPPH自由基清除率/%=(1－ ————)×100 (3)

Ac
式中：Ac为2.0mL(0.04mg/mL)DPPH＋2.0mL 95%乙
醇溶液的吸光度；AI为 2.0mL(0.04mg/mL)DPPH＋ 2.0mL
样品液的 吸光度；AJ为2.0mL(0.04mg/mL)样品＋ 2.0mL95%
乙醇溶液的吸光度。
2 结果与分析
2.1 标准曲线回归方程的建立
用最小二乘法经线性回归，得回归方程：y = 0.0968x－
0.0224，相关系数 R2 = 0.9996，表明芦丁浓度与吸光度
有良好的线性关系。
2.2 粉绿铁线莲不同部位总黄酮的含量测定结果
由表 2可知，粉绿铁线莲不同部位总黄酮含量有一
定的差别，总黄酮含量依次为粉绿铁线莲叶＞花＞果实＞
茎。不同质量浓度样品液的制备用 30%乙醇稀释即得。
2.3 粉绿铁线莲还原力测定结果
由图 1可知，可以看到 4个部位光密度都随总黄酮
质量浓度的增大逐渐增加。经 SPSS分析，粉绿铁线莲
不同部位总黄酮的还原力与质量浓度呈线性相关，其回
归方程分别为：VC：y=0.2299x+0.7333(R2 = 0.9818)；
叶：y = 0.1195x + 0.1773(R2 = 0.9051)；果实：y = 0.0518x +
部位 茎 叶 花 果实
总黄酮含量/(mg/mL) 2.766±0.0936 8.5315±0.0806 3.4535±0.3402 2.8285±0.1645
表 1 粉绿铁线莲不同部位总黄酮的含量 (x ± s，n=4)
Table 1 Total flavonoid contents of different organs of Clematis
glauca Willd. (x± s，n=4)
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0.1386(R2 = 0.8318)；花：y= 0.0842x + 0.1432(R2=0.9234)；
茎：y=0.040x+ 0.1094(R2= 0.7283)。不同部位总黄酮的
还原力都随着质量浓度浓度的增大而增强，其还原能力
大小是：VC ＞粉绿铁线莲叶＞粉绿铁线莲花＞粉绿铁
线莲果实＞粉绿铁线莲茎。光密度越大则还原力越强。
总体来看粉绿铁线莲叶的还原力要强于粉绿铁线莲果
实 、 花 、 茎 。
图 1 粉绿铁线莲不同抗氧化剂的还原力
Fig.1 Concentration dependent curves of reducing power of different
organs of Clematis glauca Willd. and VC
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
VC
茎
叶
O
D
70
0n
m
质量浓度 /(μg/mL)
200 400 600 800 1000
花
果实
2.4 粉绿铁线莲对·OH 清除率的测定结果
图 2 粉绿铁线莲清除·OH 活性的量效关系
Fig.2 Concentration dependent curves of hydroxyl free radical scavenging
capacity of different organs of Clematis glauca Willd. and VC
100
80
60
40
20
0
VC
茎
叶
清
除
率
/%
质量浓度 /(μg/mL)
200 400 600 800 1000
花
果实
由图 2可知，各样品对清除·OH 均有较好的量效
关系。在 200～1000μg/mL范围内经 SPSS分析，粉绿
铁线莲不同部位样品液及VC的曲线方程分别为：VC：
y=13.173x+23.439(R2=0.9932)；叶：y=5.06x+10.01(R2=
0.8836)；果实：y=4.670x+9.294(R2=0.8750)；花：y=
4.226x+7.634(R2=0.9646)；茎：y= 3. 774x + 6. 366(R 2=
0.9797)。样品液质量浓度 200μg/mL时茎、叶、果实
总黄酮对·OH 的清除率较接近。叶样品液质量浓度在
600～1000μg/mL时总黄酮对·OH的清除效率较高。
果实样品液总黄酮对·OH的清除率在样品质量浓
度 200～400μg/mL时随质量浓度的变化增加明显，随后
增加幅度不明显。茎、花等样品液总黄酮对·O H 的
清除率样品液在质量浓度200～1000μg/mL随质量浓度的
增大变化不明显。比较各个部位对·OH 清除能力的最
高值大小为： VC＞粉绿铁线莲叶＞粉绿铁线莲果实＞
粉绿铁线莲花＞粉绿铁线莲茎。
2.5 粉绿铁线莲对 O 2·清除作用的测定结果
由图 3 可知，各样品对 O 2·的清除作用都随质量
浓度的增大而有不同程度的增强，经 SPSS分析，粉绿
铁线莲不同部位样品液及VC的曲线方程分别为：VC：
y=12.878x－ 1.158(R2=0.9888)；叶：y=6.654x－ 0.50(R2=
0.7091)；果实：y=5.992x+5.63(R 2=0.9827)；花：y=
3.424x+0.42(R2=0.9961)；茎：y=6.779x－ 5.905(R2=
0.9884)。VC对O2·的清除率随质量浓度的增加显著增
强，茎样品液总黄酮对 O 2·的清除率随着样品液质量
浓度增加而缓慢增长。果实样品液质量浓度200～600μg/mL
时清除率上升较快，在 600～800μg/mL时清除率变化不
明显，超过 800μg/mL后清除率变化明显。花样品液
在浓度 200～1000μg/mL时清除率变化较缓慢。叶样品液
对该自由基清除率随着质量浓度变化在 200～800μg/mL时
增加不明显，但超过 800μg/mL后增加明显。各部分
对 O2·的清除能力的最高值大小为：VC＞粉绿铁线莲
叶＞粉绿铁线莲果实＞粉绿铁线莲茎＞粉绿铁线莲花。
2.6 粉绿铁线莲对DPPH自由基清除率的测定结果
100
80
60
40
20
0
茎
花
叶
清
除
率
/%
质量浓度 /(μg/mL)
200 400 600 800 1000
果实
VC
图 4 粉绿铁线莲清除 DPPH自由基活性的量效关系
Fig.4 Concentration dependent curves of DPPH free radical scaveng-
ing capacity of different organs of Clematis glauca Willd. and VC
由图 4可知，经 SPSS分析，粉绿铁线莲不同部位
样品液及VC的曲线方程分别为：VC：y=12.606x+22.606
(R2=0.9268)；叶：y=2.519x+10.477(R2=0.9961)；果实：
图 3 粉绿铁线莲清除 O 2·活性的量效关系
Fig.3 Concentration dependent curves of superoxide anion free radical
scavenging capacity of different organs of Clematis glauca Willd. and VC
70
60
50
40
30
20
10
0
茎
花
叶
清
除
率
/%
质量浓度 /(μg/mL)
200 400 600 800 1000
果实
VC
21※基础研究 食品科学 2010, Vol. 31, No. 23
y=1.672x+20.36(R2=0.9272)；花：y=1.453x+17.803(R2=
0.95.3)；茎：y=1.935x+9.617(R2=0.9373)。不同部位自
由基清除率随着样品液质量浓度增加而增加但不明显，
样品液质量浓度 200μg/mL时茎和叶的DPPH自由基清除
能力相近，样品液质量浓度 600μg/mL时茎、花、叶、
果实对DPPH自由基清除能力相近。但可以明显的看出
果实和花对 D PPH 自由基清除能力大于茎和叶的清除
率。总的来看，不同部位对DPPH自由基清除能力的大
小顺序为：VC ＞粉绿铁线莲果实 ＞粉绿铁线莲花＞粉
绿铁线莲叶＞粉绿铁线莲茎。
3 结 论
粉绿铁线莲不同部位总黄酮具有较强的还原力，随
着样品质量浓度的增加，还原力也增加，5种待测样品
的还原力强弱为：VC＞粉绿铁线莲叶＞粉绿铁线莲花＞
粉绿铁线果实＞粉绿铁线莲茎。
实验证明，粉绿铁线莲不同部位总黄酮具有很强
的清除自由基的能力。在高质量浓度时(1000μg/mL)叶
对·O H 的清除率高于其他 3 个部位，而茎、叶、花
相差不大；在 1000μg/mL是叶对 O2·清除率也明显高
于其他 3个部位，而其他 3个部位的清除能能力依次为
果实＞茎＞花；对DPPH自由基的清除率为粉绿铁线莲
果实＞花＞叶＞茎。
总体看来，粉绿铁线莲总黄酮具有很强的还原能力
和自由基清除活性，通过本研究可知粉绿铁线莲具有较
好的医学价值。
参 考 文 献 ：
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