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甘肃产不同品种藏药绿绒蒿的质量评价方法研究
邵 晶1，2，郭 玫1，2* ，樊 秦1，2，程 芳1
(1. 甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000;2. 甘肃省高校中(藏)药化学与质量研究省级重点实验室，甘肃 兰
州 730000 )
摘要 目的:建立藏药绿绒蒿中槲皮素 HPLC含量测定及 TLC鉴别方法，评价甘肃产不同品种绿绒蒿质量;同
时以快速鉴别为目的初步研究绿绒蒿药材可见-紫外光谱特征。方法:采用 HPLC法测定水解物中总槲皮素含量，
TLC法进行鉴别;采用分光光度法测定绿绒蒿药材不同溶剂提取物可见-紫外光谱。结果:酸水解条件:盐酸-80%
甲醇(8∶ 25)90℃水浴水解 1. 5 h。色谱条件:色谱柱:Hypersil-Keystone-C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ;流动相:甲醇-
水(50∶ 50) ;检测波长:360 nm;流速:1. 0 mL /min;柱温:35℃;槲皮素进样量在 0. 01μg ～ 0. 12μg范围内与峰面积呈
良好线性关系(r = 0. 9997) ;平均回收率 98. 83%，RSD = 1. 69%(n = 9)。甘肃产全缘绿绒蒿、五脉绿绒蒿中总槲皮
素含量分别为 0. 1135 mg /g和 0. 0842 mg /g。结论:本实验确定的酸水解条件、槲皮素 HPLC 含量测定方法及 TLC
鉴别方法简便易行，结果可靠，为评价甘肃绿绒蒿药材质量提供参考;同时对其不同溶剂提取物可见-紫外光谱特
征的研究将为药材的快速鉴别提供参考。
关键词 绿绒蒿;槲皮素;酸水解;HPLC;TLC;可见-紫外光谱
中图分类号:R282. 5 /R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2011)11-1678-04
Study on Quality Control Methods for Different Varieties of Meconopsis of Gansu
SHAO Jing1，2，GUO Mei1，2，FAN Qin1，2，CHENG Fang1
(1. Gansu University of Traditional Medicine，Lanzhou 730000，China;2. Key Laboratory of Chemistry and Quality for Traditional Chi-
nese Medicines of the College of Gansu Province，Gansu College of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730000，China)
Abstract Objective:To establish the quantitative determination method and TLC identification of Meconopsis and study the Vis-
UV spectrum character for fast identification. Methods:Meconopsis were identified by TLC，and the content of quercetin was deter-
mined by HPLC. Results:The acid hydrolyze condition was HCl-80%MeOH(8∶ 25)90 ℃ calefaction by water for 1. 5 hour. The con-
dition of HPLC :Hypersil-Keystone-C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)column，MeOH-Water(50∶ 50)as mobile phase，detection wave-
length at 360nm，flow rate at 1. 0 mL /min，column temperature at 35 ℃，quercetin showed a good linear relationship at a range of 0. 01
～ 0. 12μg，r = 0. 9997. The average recovery was 98. 83%，and RSD was 1. 69%(n = 9). The contents of quercetin in Meconopsis inte-
grifolia and Meconopsis quintuplinervia of Gansu were 0. 1135 mg /g and 0. 0842 mg /g respectively. Conclusion:The method is simple，
accurate and specific. It can be used for the quality control and fast identification of Meconopsis.
Key words Meconopsis;Quercetin;Acid hydrolyze;HPLC;TLC;Vis-UV
收稿日期:2011-04-15
基金项目:甘肃省中医药管理局基金项目(GZK-2008-31)
作者简介:邵晶(1978-) ，女，硕士，讲师，主要从事中药及其制剂的研究与开发。
* 通讯作者:郭玫，Te:0931-8765394，E-mai:cn221@ 163. com。
绿绒蒿为藏族习用药材，具有清热、镇咳、平喘、
利尿、消炎、止痛等功效。藏医主要用其治疗肝炎、
肺炎、胆囊炎、肺结核、胃溃疡等症〔1，2〕。绿绒蒿收
载于《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药》第
一册，基源复杂，其中五脉绿绒蒿Meconopsis quintup-
linervia Rege. 、全缘绿绒蒿 Meconopsis integrifolia
(Maxim. )Franch为其主流品种，药用部位为干燥全
草。主要分布于青海、西藏、甘肃等地区。绿绒蒿中
的黄酮苷类化合物主要是以槲皮素为母核的，其游
离槲皮素含量很低〔3，4〕。本文探讨了绿绒蒿中槲皮
素苷的酸水解条件，建立了 HPLC 法测定其总槲皮
素含量的方法及其薄层色谱鉴别方法，简便易行，结
果可靠，为评价绿绒蒿药材的质量提供参考;同时对
其不同溶剂提取物的可见-紫外光谱特征进行了研
究，将为绿绒蒿药材的快速鉴别提供参考。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Agilent 1100 型高效液相色谱仪;Agi-
lent ChemStation 色谱工作站;UV － 2401PC 紫外分
光光度计(日本岛津) ;BS110S 型塞多利斯电子分
析天平(北京塞多利斯天平有限公司) ;KQ-250TD
超声波清洗仪(上海必能信超声有限公司) ;HH-S
数显恒温水浴锅(金坛市正基仪器有限公司) ;ZK-
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DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2011.11.015
82B型真空干燥箱(上海市试验仪器总厂)。
1. 2 材料 槲皮素对照品(由中国药品生物制品
鉴定所提供，批号:100081-200404) ;全缘绿绒蒿
Meconopsis integrifolia(Maxim. )Franch 药材采自甘
肃临洮，五脉绿绒蒿 Meconopsis quintuplinervia Rege.
药材采自甘肃甘南;分别经甘肃中医学院晋玲副教
授鉴定为正品。甲醇(色谱纯) ;水为重蒸水;其余
试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 甘肃产五脉绿绒蒿、全缘绿绒蒿中槲皮素
HPLC含量测定方法研究〔4〕
2. 1. 1 色谱条件:色谱柱:Hypersil-Keystone-C18
(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ;流动相:甲醇-水(50 ∶
50) ;流速:1. 0 mL /min;检测波长:360 nm;柱温:
35 ℃;进样量:10 μL;理论塔板数按槲皮素峰面积
计算均不低于 2 500。
2. 1. 2 对照品溶液的制备:精密称取120 ℃干燥 4
h 的槲皮素对照品 0. 1 mg，置 10 mL 量瓶中，加
80%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2. 1. 3 供试品溶液的制备:取样品粉末(过三号
筛)2. 0 g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入 80%
甲醇 50 mL，密塞，称定重量，加热回流 1 h，冷却后
再次称定重量，用 80%甲醇补足减失的重量，摇匀，
滤过。精密量取续滤液 25 mL，精密加入盐酸 8mL，
置 90℃水浴中加热水解 1. 5 h，取出，迅速冷却，转移
至 50 mL量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，过微
孔滤膜(0. 45μm) ，取续滤液作为供试品溶液。
2. 1. 4 线性关系考察:分别精密吸取上述对照品
溶液(0. 01 mg /mL)1、2、4、6、8、10、12 μL，注入高效
液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定。以峰面积
为横坐标，浓度为纵坐标，计算回归方程为:Y =
2. 1054 × 10 －7 + 1. 1727 × 10 －5(r = 0. 9997)。结果
显示槲皮素进样量在 0. 01 ～ 0. 12 μg 范围内与峰面
积呈良好线性关系。
2. 1. 5 精密度试验:精密吸取槲皮素对照品溶液
10 μL 注入高效液相色谱仪中，重复进样 5 次，按
“2. 1. 1”项色谱条件测定峰面积，计算 RSD =
0. 67%(n = 5) ，结果显示其精密度良好。
2. 1. 6 重现性试验:取同一样品 5 份，按照
“2. 1. 3”项下供试品溶液的制备方法进行制备，分
别精密吸取 10 μL 注入高效液相色谱仪中，按
“2. 1. 1”项色谱条件测定峰面积，计算 RSD =
2. 12%(n = 5) ，表明本试验方法重现性较好。
2. 1. 7 稳定性试验:取同一供试品溶液，分别在
0、1、2、3、4、5h 精密吸取 10 μL 注入高效液相色谱
仪中，按“2. 1. 1”项色谱条件测定峰面积，计算 RSD
=1. 80%，表明供试品溶液在 5 h内稳定。
2. 1. 8 加样回收率试验:精密称取已知含量的同
一样品 9 份，分别加入槲皮素对照品，按照“2. 1. 3”
项下供试品溶液的制备方法进行制备，分别精密吸
取 10 μL 注入高效液相色谱仪中，按“2. 1. 1”项色
谱条件测定峰面积，计算回收率。结果见表 1。
表 1 加样回收率测定结果(n =9)
编号 样品重 /g 样品中槲皮素含量 /mg
加入槲皮素量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
1 1. 0074 0. 1143 0. 0960 0. 2078 97. 40
2 1. 0418 0. 1182 0. 0960 0. 2113 96. 98
3 1. 0265 0. 1165 0. 0960 0. 2105 97. 92
4 1. 0157 0. 1153 0. 1200 0. 2336 98. 58
5 1. 0128 0. 1150 0. 1200 0. 2354 100. 33 98. 83 1. 69
6 1. 0098 0. 1136 0. 1200 0. 2298 96. 83
7 1. 0088 0. 1145 0. 1440 0. 2605 101. 39
8 1. 0035 0. 1139 0. 1440 0. 2586 100. 49
9 1. 0105 0. 1147 0. 1440 0. 2580 99. 51
2. 1. 9 样品含量测定:分别精密称取甘肃产五脉
绿绒蒿、全缘绿绒蒿样品各 5 份，按照“2. 1. 3”项下
供试品溶液的制备方法进行制备，分别精密吸取 10
μL注入高效液相色谱仪中，色谱图见图 1，按
“2. 1. 1”项色谱条件测定峰面积，代入回归方程计
算即得。结果显示，试验所采集到的甘肃产五脉绿
绒蒿中槲皮素的平均含量为 0. 0842 mg /g;全缘绿
绒蒿中槲皮素的平均含量为 0. 1135 mg /g。
2. 2 绿绒蒿药材中槲皮素苷酸水解条件的选择
绿绒蒿药材中游离槲皮素含量很低，大多以苷的形
式存在，因此供试品制备过程中槲皮素苷是否水解
完全，决定了其含量测定的准确性，所以水解条件的
控制尤为重要。本实验通过文献的查阅，选择采用
一定比例的盐酸-甲醇溶液进行酸水解，其主要的影
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响因素是盐酸浓度、水解时间、水解温度。经过查阅
相关文献，酸水解常用的水解温度为 80 ～ 90 ℃，为
了达到较高的水解效率，本实验将水解温度设为
90℃，并进一步采用单因素考察法对水解的酸浓度
和水解时间进行了筛选。
2. 2. 1 盐酸浓度的考察:称取全缘绿绒蒿药材粉
末(过 3 号筛)12. 0 g，置圆底烧瓶中，加入 80%甲醇
300 mL，密塞，加热回流 1 h，滤过。精密量取续滤液
25 mL共计 6 份，分别精密加入盐酸 2、4、6、8、10、12
mL，置 90 ℃水浴中加热水解 2 h，取出，迅速冷却，
转移至 50mL 量瓶中，用 80%甲醇稀释至刻度，摇
匀，过微孔滤膜(0. 45 μm) ，取续滤液作为供试品溶
液。分别精密吸取 10 μL 注入高效液相色谱仪中，
按“2. 1. 1”项色谱条件测定峰面积，计算槲皮素得
率。结果显示，盐酸-80%甲醇(8 ∶ 25)和盐酸-80%
甲醇(10∶ 25)时水解产物中槲皮素含量较高，因此
选择盐酸-80%甲醇(8∶ 25)。结果见表 2。
图 1 甘肃产不同品种绿绒蒿药材
槲皮素含量测定 HPLC图
A. 槲皮素对照品 B. 五脉绿绒蒿 C. 全缘绿绒蒿
表 2 水解盐酸浓度考察结果
盐酸-80%甲醇比例 2∶ 25 4∶ 25 6∶ 25 8∶ 25 10∶ 25 12∶ 25
样品溶液中槲皮素含量 /(μg /mL) 未检到 0. 86 1. 91 2. 24 2. 21 1. 93
2. 2. 2 水解时间的考察:称取全缘绿绒蒿药材粉
末(过 3 号筛)12. 0 g，置圆底烧瓶中，加入 80%甲醇
300 mL，密塞，加热回流 1 h，滤过。精密量取续滤液
25 mL共计 6 份，分别精密加入盐酸 8mL，置 90 ℃
水浴中分别加热水解 0. 5、1、1. 5、2、2. 5、3 h 取出，
迅速冷却，转移至 50 mL 量瓶中，用 80%甲醇稀释
至刻度，摇匀，过微孔滤膜(0. 45 μm) ，取续滤液作
为供试品溶液。分别精密吸取 10 μL注入高效液相
色谱仪中，按“2. 1. 1”项色谱条件测定峰面积，计算
槲皮素得率。结果显示，水解 1. 5h时水解产物中槲
皮素含量较高。结果见表 3。
综合“2. 2. 1”项和“2. 2. 2”项下的试验考察结
果，最终确定绿绒蒿中槲皮素苷的酸水解条件为:盐
酸-80%甲醇(8∶ 25)90 ℃水浴水解 1. 5 h。
表 3 水解时间考察结果
水解时间 0. 5 h 1h 1. 5 h 2 h 2. 5 h 3 h
样品溶液中槲皮素含量 /(μg /mL) 0. 92 1. 56 2. 25 2. 24 2. 19 2. 01
2. 3 HPLC 测定波长的选择 根据槲皮素对照品
紫外图谱的吸收特点，作者分别在 210 nm、255 nm、
360 nm处测定了样品的 HPLC 图，结果显示测定波
长为 360 nm时图形较好。因此选择 360 nm作为测
定波长。
2. 4 甘肃产不同品种绿绒蒿药材中槲皮素的 TLC
鉴别〔4〕 取甘肃产五脉绿绒蒿、全缘绿绒蒿样品粗
粉(过 3 号筛)各 2. 0 g，加 80%甲醇 50 mL，加热回
流 30 min，放冷，滤过，取续滤液 25 mL 加盐酸 8
mL，加热水解 1. 5 h，浓缩至 2 mL，加蒸馏水 5 mL，
用乙酸乙酯提取 2 次，每次 5 mL，合并乙酸乙酯液，
蒸干，残渣加甲醇 1 mL 溶解，作为供试品溶液。另
取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每 lmL含 1 mg的
溶液，作为对照品溶液。分别吸取上述供试品溶液
及对照品溶液各 5 μL，分别点于同一用 0. 5%的羧
甲基纤维素钠溶液制备的硅胶 G薄层板上，以甲苯-
乙酸乙酯-甲酸(4∶ 3∶ 1)上层溶液为展开剂，展开，取
出，晾干，喷三氯化铝试液，置紫外光灯(365 nm)下
检视。结果显示:供试品色谱中，在与对照品色谱相
应的位置上，显相同颜色的荧光斑点(见图 2)。
2. 5 甘肃产不同品种绿绒蒿药材可见-紫外光谱
特征的研究
2. 5. 1 供试品溶液的制备:取甘肃产五脉绿绒蒿
样品粗粉 5 份(过 3 号筛) ，每份约 0. 1 g，分别置于
25mL容量瓶，分别加甲醇、乙醚、氯仿、乙酸乙酯作
为溶剂，30℃下超声(150 w，20KHz)处理 20 min，滤
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图 2 五脉绿绒蒿药材槲皮素 TLC图
1、2. 五脉绿绒蒿 3、4. 全缘绿绒蒿 5. 槲皮素对照品
过，作为供试品溶液。同法分别制得甘肃产全缘绿
绒蒿的甲醇、乙醚、氯仿、乙酸乙酯提取液。
2. 5. 2 可见-紫外光谱的测定:取上述供试品溶
液，分别以相应溶剂做空白，于 800 ～ 200 nm进行扫
描，记录其可见-紫外光谱图。结果显示:甘肃产五
脉绿绒蒿、全缘绿绒蒿的甲醇提取物均在 223、298、
670 nm 处分别有最大吸收;乙醚提取物均在 237、
280、410、665 nm处分别有最大吸收;氯仿提取物均
在 252 nm、425 nm、632 nm处分别有最大吸收;乙酸
乙酯提取物在 282、406、672 nm处分别有最大吸收。
3 讨论
3. 1 本实验建立了 HPLC法测定绿绒蒿中槲皮素
含量的方法。分别对流动相、检测波长进行了筛选。
确定采用 C18色谱柱，甲醇-水(50∶ 50)为流动相，360
nm为检测波长。槲皮素进样量在 0. 01 μg ～ 0. 12
μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r = 0. 9997) ;
平均回收率 98. 83%，RSD = 1. 69%(n = 9)。甘肃
产全缘绿绒蒿、五脉绿绒蒿中总槲皮素含量分别为
0. 1135 mg /g和 0. 0842 mg /g。
3. 2 绿绒蒿中的黄酮苷类化合物主要是以槲皮素
为母核的，其游离槲皮素含量很低，因此供试品制备
过程中必须使槲皮素苷水解完全。本实验采用盐
酸-甲醇溶液进行酸水解，并对盐酸浓度、水解时间
进行了考察筛选。最终确定绿绒蒿中槲皮素苷的酸
水解条件为:盐酸-80%甲醇(8 ∶ 25)90℃水浴水解
1. 5 h。
3. 3 五脉绿绒蒿、全缘绿绒蒿中槲皮素的 TLC 鉴
别研究，分别对甲苯-乙酸乙酯-甲酸、甲苯-甲酸乙
酯-甲酸、苯-甲酸等不同比例混合的展开系统进行
了比较，结果显示甲苯-乙酸乙酯-甲酸(4∶ 3∶ 1)上层
溶液为展开剂展开效果较好，斑点清晰且分离度好，
重复性好。因此确定 TLC 鉴别方法为:0. 5% CMC-
Na溶液制备的硅胶 G 薄层板，甲苯-乙酸乙酯-甲酸
(4∶ 3∶ 1)上层溶液展开，三氯化铝溶液显色，紫外光
灯(365 nm)下检视。
3. 4 对甘肃产五脉绿绒蒿、全缘绿绒蒿不同溶剂提
取物可见-紫外光谱的研究显示，二者的共有吸收特
征为:UVλ甲醇max nm:223，298，670。UVλ乙醚max nm:237，280，
410，665。UVλ氯仿max nm:252，425，632。UVλ乙酸乙酯max nm:
282，406，672。其共有的吸收特征为绿绒蒿药材的快
速鉴别提供了科学依据。
参 考 文 献
［1］中华人民共和国卫生部药典委员会 . 中华人民共和国
卫生部药品标准·藏药［S］. 第一册 . 1995:98.
［2］冯志舟 . 绿绒蒿及其药用价值［J］. 云南林业，2004，25
(5) :24.
［3］吴海峰，潘莉，丁立生，等 . 藏药五脉绿绒蒿的化学成分
研究［J］.天然产物研究与开发，2007，(5) :811-813.
［4］陈燕，德吉，黄志芳，等 . 藏药全缘绿绒蒿的薄层色谱鉴
别与含量测定［J］，中药材，2009，32(8) :
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