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藏药多刺绿绒蒿提取物体外抗流感病毒作用的初步研究



全 文 :《保健食品检验与评价技术规范》(2003 年版)规定缓解体
力疲劳功能评价中负重游泳实验结果必须为阳性。本实验在
小鼠游泳实验时未给小鼠负重,主要基于如下考虑:本实验为
初步筛选实验,且实验用小鼠数量大,减少小鼠负重步骤,可较
快速地完成筛选实验。对数剂量设计法可在最大的受试物
剂量范围内进行剂量设置,但因其以等指数为变化梯度,每个
剂量之间的变化梯度较大,因此筛选出的剂量范围也相对较粗
糙,为获得更为准备的剂量范围,需在现有有效剂量范围基础
上再进行实验。由于本实验只是通过小鼠游泳实验初步筛选
蔓菁水提取物、蔓菁水提取物、红景天水提取物、余甘子提取物
缓解体力疲劳保健功效有效剂量范围,本实验结果可为后期的
相关研究及产品开发提供实验依据。
通过前期单个药的有效剂量范围和后期的重复实验,均表
明 376. 20 mg(蔓菁药材)/kg的给药剂量具有较好的缓解体力
疲劳的作用,且优于阳性药红牛组。但由于受商品红牛液体浓
度的限制,本实验只能设置 2. 5 倍临床人用剂量(20. 83 ml(红
牛饮料)/kg) ,未设置其小鼠等效剂量(10 倍临床剂量———83.
32 ml(红牛饮料)/kg) )。
参考文献
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Study on the dose-effect relationship of the anti-fatigue effects in the ethnomedicine of Brassica rapa
Wang Zhang,Zhang Yi,Zhou Lin,Yang Yongdong,Wang Yu,Yang Yang,Kuang Tingting
(College of Ethnomedicine of Chengdu University of TCM,Chengdu 611137)
Objective:To preliminary study the dose-effect relationship of the anti-fatigue effects in the ethnomedicine of Brassica rapa. Methods:
The logarithmic dose design method of the dose-effect relationship was applied by setting different dosages of the water extracts of Brassica ra-
pa (WEB) ,and the water extracts' influences on the mice swimming time were detected at room temperature. Results:The WEB 376. 20 ~
37619. 86 mg (crude drug)/ kg / dose had significant anti-fatigue effect (P < 0. 05). The mice giving WEB 376. 20 mg (crude drug)/
kg /dose had the longest swimming time,which was significantly better than the positive Red Bull group (P < 0. 05). Conclusion:The
WEB had significant anti-fatigue effects in a certain dose range,but the dose-effect relationship is not the proportional relationship.
Key words Brassica rapa(蔓菁) ;anti-fatigue effect;dose-effect relationship
藏药多刺绿绒蒿提取物体外抗流感病毒作用的初步研究
*
李长山1,王聚乐2,普 珍2,卓 玛1,袁瑞英2,杜宝中1**
(1西藏大学医学院病原生物学教研室,拉萨 850002;2西藏大学医学院药学系,拉萨 850002)
摘 要 目的:研究藏药多刺绿绒蒿提取物体外抗流感病毒的作用;方法:制备了全草醇提取物;采用常规试管凝集实验方
法,测试该提取物体外抗流感病毒活性;结果:发现该药液在 1:4 稀释度时(12. 5mg /ml,按生药量计算) ,对体外甲型流感病毒有抑
制作用。结论:多刺绿绒蒿提取液对流感病毒有一定的抗病毒活性,值得继续追踪研究。
关键词 藏药;多刺绿绒蒿;流感病毒;体外抗病毒实验
绿绒蒿为罂粟科(Papaveraceae)第二大属———绿绒蒿属 (Meconopsis Vig.)植物的总称,是著名的高山花卉植物。全属
031 中药药理与临床 2012;28(5)
* 本研究受 2011 年西藏自治区科技厅科研项目《绒蒿属藏药抗病毒作用初步筛选的研究》的基金资助。 **通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2012.05.002
共有 49 种,除 1 种产于西欧外,其余均分布于青藏高原及其毗
邻地区。我国有 39 种,其中 7 种为该属特有种,大部分集中分
布于西藏、青海东南部、甘肃西部、四川西南部、云南东北部和西
北部等地区。西藏出产 27 种,其中 16 种为国内特有。根据文
献记载及长期临床实践显示绿绒蒿属植物具有显著的清热解
毒消炎作用,因此绿绒蒿属植物是否也具有重要的抗病毒作
用,值得我们采用现代药理学的方法进行研究[1,2]。为此,我们
采集了拉萨及林芝产多刺绿绒蒿(Meconopsis horridula Hook)植
株,对其提取物开展了体外抗流感病毒的实验,取得了初步结
果,现报告如下。
1 材料和方法
1. 1 试验药物 多刺绿绒蒿:采自拉萨及林芝,经西藏藏医学
院藏药学教授顿珠鉴定。取洗净干燥的多刺绿绒蒿,切成 1 ~
3cm小段,称取 200 克,加入 10 倍量的 90%乙醇提取两次。合
并两次滤液并浓缩冻干,用前再用注射用水配制成 50mg /ml 的
溶液。利巴韦林,100mg /ml,由四川美大康药业股份有限公司
生产,批号:120902。
1. 2 鸡胚及病毒株 鸡胚购于四川大学动物实验中心;流感病
毒 A/PK /8 /20 /H1N1 株,由中国医学科学院病毒所提供。
1. 3 方法 采用甲型流感病毒 A/PK /8 /20 /H1N1 株,接种鸡
胚后大量扩增,收集鸡胚尿囊液,测定甲型流感病毒的活性滴
度(血凝效价)。采用浓度为 50mg /ml的多刺绿绒蒿醇提取液 1
毫升,做连续对倍稀释后,从每个不同药物浓度取出 0. 25 毫升
药液,与等量的甲型流感病毒混合,放 37℃作用一小时。每一
试管中加入 5%鸡红细胞悬液 0. 25 毫升,灭菌生理盐水 0. 25 毫
升,混匀后,继续放 37℃作用一小时。根据甲型流感病毒滴度
下降的趋势,判断多刺绿绒蒿提取液在体外,是否有抑制该病
毒的作用[3,4]。
2 结果
2. 1 甲型流感病毒滴度 经鸡胚扩增后的甲型流感病毒滴度,
采用常规鸡红细胞试管凝集实验,测得甲型流感病毒滴度(血
凝效价)为 1:2560 。
2. 2 多刺绿绒蒿抗流感病毒的药效学检测:
表 1 经多刺绿绒蒿提取物作用后 A /PK /8 /20 /H1N1 的滴度
管号
绿绒蒿药液浓度(mg/ ml)
50 25 12. 5 6. 25
利巴韦林(mg/ml)
1 0. 5 0. 25 0. 125
A/PK/8 /20 /H1N1
对照
鸡红细胞
对照
1 -- -- -- + + + -- -- -- + + + + + + + --
2 -- -- -- + + + + -- -- -- + + + + + --
3 -- -- -- + + + -- -- -- + + + + + + + --
4 -- -- -- + + + -- -- -- + + + + + + --
-,无红细胞凝集:+,25%细胞凝集:+ +,50%细胞凝集:+ + +,75%细胞凝集:+ + + +,100%细胞凝

从表 1 可见,当多刺绿绒蒿药液浓度为 12. 5mg /ml时,可以
抑制流感病毒 A/PK /8 /20 /H1N1 对鸡红细胞的凝集活性。表
明多刺绿绒蒿药液在 1:4 稀释度时(12. 5mg /ml) ,对甲型流感
病毒的活性有抑制作用。
3 讨论
绿绒蒿为著名观赏植物,不仅花瓣色泽艳丽而且形态多样。
绿绒蒿和罂粟是近缘家族,由于没有蓝色的罂粟花,所以在欧洲
绿绒蒿又被称为蓝色罂粟,在西方园林中绿绒蒿是倍受宠爱
的园艺品种,为草本花坛中名贵稀有品种。不仅如此,绿绒蒿属
植物还具有很高的药用价值,在传统藏医药中有着悠久的应用
历史,为藏医传统用药,常以单味或复方入药。据《藏药志》记
载:该药具清热解毒、利尿、消炎、止痛功效,用于治疗肺炎、肝
炎、头痛、水肿、皮肤病、肝肺热症,以花入药解热效果好,并能治
血热和血旺。经文献考证,绿绒蒿属中共有 18 种 2 个变种入
药,但是迄今关于绿绒蒿属药用植物的研究,仅局限于几种药用
植物化学成分的研究,尚缺乏现代药理药效学的研究报告[5,6]。
我们根据筛选抗病毒的中草药经验得知,一般具有清热解
毒、消炎及活血化瘀功效的药物,常具有一定程度的抗病毒活
性,因此我们选用藏药多刺绿绒蒿开展了抗病毒的筛选实验。
提取出的多刺绿绒蒿药液在体外抗流感病毒的实验结果表明,
当浓度为 12. 5mg /ml的绿绒蒿醇提取液,对甲型流感病毒的活
性具有抑制作用,表明在绿绒蒿属药用植物中含有一定量抗病
毒作用的成分。在此基础上,我们可以利用现代药理学的技术,
进一步开展相关的药效学研究。
绿绒蒿属植物 94%以上品种一般生长在海拔 3000 米以上
高山灌丛和高山草甸中,有的品种甚至生长在海拔 5000 米的高
山流石滩地带,分布较为狭窄,有些品种较为稀少,由于青藏高
原特殊的地理气候环境,使得藏药材具有部分独特的药用价值
和疗效。藏药材也是我国宝贵的丰富药材资源之一。从已有的
研究报告,国内陈恬等证实藏药紫金标对单纯疱疹病毒 I 型的
感染[7,8]有抑制作用,异叶青兰等对单纯疱疹病毒 II 型的活性
也有抑制作用[9]。我们相信通过对藏药材的筛选,有可能寻找
到数种具有高效抗病毒作用的药物成分[7 ~ 9]。这对于重要藏药
的远期开发利用以及野生资源的保护都具有重要意义。
参考文献
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病毒作用及机制研究. 兰州大学博士论文,2007 年
131中药药理与临床 2012;28(5)
Study on the inhibitory effects of tibetan medicine Meconopsis horridula Hook against influenza virus in vitro
Li Changshan1,wang jule2,Pu Zhen2,Zuo Ma1,Yuan Ruiying2,Du Baozhong1
(1 Department of Biopathology of Medical College;2 Department of Pharmacy of Medical College,Tibet University,Lasha 850002)
Objective:To investigate the antiviral effects of Tibetan medicine Meconopsis horridula hook extractive against influenza virus A
(H1N1)in vitro. Methods:Titration of the influenza virus A and the antiviral effects Against influenza virus A were evaluated by using
chicken red blood cells hemagglutination assay. Results:The antivirual effect EC50 value of the Meconopsis extractve was 12. 5mg /ml. Con-
clusion:Meconopsis horridula hook extractive showed antiviral activity against influenza virus,further research needs to focus on the mecha-
nism of the Meconopsis horridula hook extractive avtivity.
Key words Meconopsis horridula Hook ;influenza virus;antiviral effects in vitro
黄连-石菖蒲药对改善糖尿病小鼠认知功能障碍*
李佳川,顾 健,赵兴冉
(西南民族大学民族医药研究院,成都 610041)
摘 要 目的:观察黄连-石菖蒲药对水提物对四氧嘧啶复合东莨菪碱糖尿病小鼠认知障碍模型的改善作用,为探寻防治糖
尿病认知障碍的有效药物发现提供科学依据。方法:采用四氧嘧啶复合东莨菪碱建立糖尿病认知障碍小鼠模型,分别采用 Morris水
迷宫试验和 OGTT试验评价药物对认知功能和糖耐量的改善作用,测定小鼠血清 FBG、Ins 的含量及脑组织 SOD 活性、MDA 和 Aβ
的含量,并计算胰岛素敏感指数 IAI。结果:黄连-石菖蒲药对水提物在 0. 418 ~ 1. 670g /kg 剂量范围内,能明显缩短模型小鼠认知障
碍 Morris水迷宫的游出时间,改善 OGTT的异常,降低血清 FBG及脑组织 MDA、Aβ的含量,增强胰岛素敏感指数 IAI和脑组织 SOD
的活性。结论:黄连-石菖蒲药对水提物对糖尿病认知功能障碍具有明显的改善作用,其机制可能与改善糖脂代谢、抗氧化、减少脑
内 Aβ的沉淀有关,同时也提示解毒开窍的治法值得进一步研究和临床观察。
关键词 黄连-石菖蒲;糖尿病认知障碍;降血糖;抗氧化;β淀粉样蛋白
糖尿病认知障碍正成为严重危害人类健康的重大疾病,是
高血糖、高血脂、胰岛素抵抗及多种有害产物长期损伤脑络的
结果。过去 15 年持续性研究表明,糖尿病是认知障碍的独立高
危因子[1],3 型糖尿病的概念已呼之欲出[2],早期防治尤为关
键。传统中医理论认为,糖尿病认知功能障碍多因痰浊热毒积
聚,侵入脑髓,蒙蔽清窍而致认知功能下降[3],临床多以清热解
毒、豁痰开窍等为治疗原则。中药黄连清热解毒,去热毒而安心
神,为历代本草止消渴要药;石菖蒲醒神开窍,具有化湿、豁
痰、辟秽的功效,两药配伍使用,一寒一热,共凑解毒开窍之功。
本研究基于前期黄连止消渴系统研究基础上[4],进一步研究
黄连与石菖蒲药对水提物对四氧嘧啶复合东莨菪碱糖尿病认
知障碍小鼠的改善作用,为探寻防治糖尿病认知障碍有效药物
发现提供科学依据。
1 材料
1. 1 试验药物 黄连-石菖蒲药对(2:3)水提液,由西南民族大
学民族医药研究院制备,外观棕褐色,采用水煎法提取制备成
1g(原药材)/ml浓度备用,批号:20110910;二甲双胍片,北京中
惠药业有限公司生产,国药准字:H19983069,批号 20110304。
1. 2 动物 ICR小鼠,雌雄各半,体质量 18 ~ 22g,由四川省医
学科学院实验动物研究所提供,动物合格证号:SCXK(川)2008-
24。
1. 3 试剂 四氧嘧啶,Sigma,批号:05758;SOD、MDA及考马
斯亮蓝试剂盒,南京建成生物工程研究所提供;大(小)鼠 Aβ、
胰岛素酶联免疫分析测定试剂盒,美国 RD 公司进口分装,批
号:20110910。
1. 4 方法 小鼠按体质量分层随机分为 2 组,除 10 只为空白
组外,其余小鼠均为模型组,用于糖尿病认知障碍小鼠模型的筛
选。试验前小鼠禁食 18 h。次日各组小鼠均尾静脉注射(iv)四
氧嘧啶溶液 80 mg /kg造成小鼠高血糖模型(空白组注射等容量
的生理盐水)。在四氧嘧啶小鼠糖尿病动物模型的基础上,水
迷宫训练前 0. 5 h小鼠腹腔注射东莨菪碱造成认知障碍,建立
小鼠糖尿病复合认知障碍模型,按表 1 设计分组及剂量灌胃给
药,每日 1 次,连续 30 d。
1. 4. 1 对小鼠 Morris 水迷宫行为学的影响 水迷宫由一个直
径 120cm、高 50cm、深 30cm的不锈钢圆形水池组成(自制) ,水
温 26. 0 ± 1. 0 ℃。池内放入平台(直径 9cm,位于水下 1cm)。
231 中药药理与临床 2012;28(5)
* 课题资助:2012 年度中央高校基本科研业务费专项项目(12NZYBS03)