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(2007-12-03收稿
2008-04-09修回)
滇重楼根茎腐烂与小杆线虫的关系研究
杨永红1, 2 ,刘君英 1 ,王明辉 2 ,杨昌红2 ,韦建荣 2 ,马　青 2 ,管开云3
(1.云南农业大学教育部农业生物多样性和病虫害防治重点实验室 /云南省植物病理重点实验室 ,云南昆明
650201;2.云南白药集团股份有限公司 ,云南昆明 650118;3.中国科学院昆明植物研究所 ,云南昆明
650204)
　　摘要　栽培滇重楼根茎腐烂严重 ,从中分离得到小杆线虫 Rhabditissp.及其它土壤昆虫幼虫。通过接种实验
证明滇重楼根茎腐烂严重程度与小杆线虫 Rhabditissp.原始密度密切相关。采用切块 、挖孔 、划伤和完整的接种方
法 , 均可引起发病 ,最高发病率高达 94.4%。
关键词　滇重楼;根茎腐烂;小杆线虫
中图分类号:R282.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)10-1467-03
作者简介:杨永红(1965-),女,教授 ,博士生导师 ,主要从事中药资源 、中药栽培及其病虫害防治研究;Tel:13700656671, E-mail:yyh831994@yahoo.com.cn。
　　滇重楼 ParispolyphylaSmithvar.yunnansensis
(Franch.)Hand.-Mazz.分布于云南 、贵州和四川 ,
生长在海拔 1400 ～ 3100 m的常绿阔叶林 、云南松
林 、竹林 、灌丛或草坡 ,根茎入药 ,有清热解毒 、消肿
止痛 、凉肝定惊之功效 ,用于疔肿痈肿 、咽喉肿痛 、毒
蛇咬伤 、跌打伤痛 、惊风抽搐等症 〔1〕。滇重楼在我
国有着悠久的药用历史 ,为云南白药 、宫血宁 、夺命
丹等中成药的主要原料〔2〕。
滇重楼是云南省地道稀缺贵重药材 ,随着中医
药产业的快速发展 ,近 10年来云南省重楼栽培面积
不断扩展。由于重楼种子有二次休眠的特性 ,用种
子繁殖 ,技术复杂 、生长周期长 。近年来切块繁殖取
得一定进展 〔3〕 ,但根腐病非常严重 , 成为栽培的关
键问题 。从田间调查发现 ,滇重楼的根腐病发病率
一般为 50%,严重可达到 87.7%,也影响原料的质
量 。本研究主要探明滇重楼根茎腐烂与小杆线虫的
关系 ,为防治提供依据 。
1 　材料与方法
滇重楼 Parispolyphylavar.yunnansensis经云南农业
大学杨永红教授鉴定 。健康滇重楼植株于 2005年
10月引种自云南白药集团武定滇重楼种植基地 ,在
云南农业大学植物保护学院温室栽培 。腐烂滇重楼
根茎也采自该种植基地 。参照文献 〔4 -11〕方法分离 ,
鉴定得到小杆线虫 Rhabditissp.并按植病研究方法
设计实验步骤 〔12〕。
1.1　小杆线虫培养
1.1　培养基:马铃薯培养基(PDA),胡萝卜马铃薯
培养基(PCA),重楼培养基(PDA培养基中马铃薯
换成重楼)。
1.1.2 　培养物的准备:灰葡萄孢及从重楼根茎分
离到的真菌 G和真菌 D接种到 PDA或 PCA, 于
28℃倒置培养 ,培养基表面长满菌丝 ,以备培养线
虫。
1.1.3 　线虫消毒:用改良贝曼漏斗分离到的线虫
收集在无菌的指形管中 , 3000 rpm离心 6 min后 ,加
入消毒液消毒 ,用无菌水冲洗 3遍 ,定容成一定线虫
浓度的悬浮液(可在 4℃保存)备用。
1.2　接种实验
1.2.1 　土壤准备:重楼病害的土壤 , 121℃高压灭
菌 2 h。分离接种线虫时使用灭菌过的细河沙过滤
真菌孢子 。
1.2.2 　根茎准备:提前两天细水冲洗干净滇重楼
根茎 ,用毛笔刷去表面泥沙 ,以防伤及表面 ,再用蒸
馏水浸泡 ,冲洗 。
1.2.3　接种条件:灭菌的土壤装入透明矿泉水瓶 ,
植入消毒过并表面划伤的根茎 ,用线虫悬浮液喷洒
·1467·中药材　JournalofChineseMedicinalMaterials　第 31卷第 10期 2008年 10月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.10.002
在根茎表面 ,盖上土壤 。设不同温湿度及线虫浓度
6个处理 , 3次重复 ,培养 60 d。
1.2.4　接种方法:根茎经 0.1%升汞及 70%酒精
消毒。实验设:
切块:重楼切成直径为 3 ～ 5cm,厚为 1cm的切
片 ,放在铺有灭菌滤纸的培养皿 ,切片表面分别喷上
线虫悬浮液 。
挖孔:在重楼根茎上挖 2 ～ 3个孔 ,用移液枪注
入线虫悬浮液孔 ,再将原先挖下来的小块封上 ,放入
灭菌敞口玻璃瓶 ,盖上盖子而不拧紧 。
划伤:将消毒过的根茎用解剖刀划伤 ,喷上线虫
悬浮液 ,置于培养皿。
完整:喷洒线虫悬浮液在根茎表面 ,放在培养皿
中培养 。
2 　结果与分析
2.1 　温湿度与线虫繁殖率　用繁殖指数 Rf说明
线虫对滇重楼根茎的致病力 , Rf=Pf/Pi(Pf为线虫
最后的虫口密度 , Pi为接种量)。
2.1.1　常温:在 20 ～ 24℃条件下 , Pf100出现在 Pi
1000条以上 , Pf最高为 397.2,平均发病级数最高为
2.7,表明滇重楼在此条件下病害较轻;但 Rf随着 Pi
水平增加而级数降低 ,最高的 Rf为 1.6出现在 Pi
10 ,表明线虫的原始密度影响着繁殖率 ,详见表 1。
　表 1 　常温与线虫繁殖率
Pi(条) 根茎重量(g)
根茎内线虫数(条)
Pf(条) Rf 发病级数
100000 4.7 1867 397.2 0.0040 2.6
10000 6.2 1067 171.1 0.0171 2.3
1000 4.3 1533 359.4 0.3594 2.7
100 6.7 633 94.1 0.9406 2
10 8.1 133 16.5 1.6461 2
CK 7.7 0 0 - 1
2.1.2　中温高湿:26 ～ 28℃及每天浇水条件下的
Pf为 100出现在 Pi10以上 , Pf最高为 406.3,平均
发病级数最高为 3.7,表明病害严重 ,而且高湿影响
滇重楼生长 ,降低了抗病性 。但线虫在滇重楼上的
Rf同样随着 Pi水平增加而级数降低(表 2),表明线
虫的原始密度同样影响繁殖率 。
2.1.3　高温高湿:29℃每天浇水条件下的 Pf为
100出现在 Pi10以上 ,平均发病级数最高为 4.3,表
明此种条件下病害发生最为严重 ,即不接种线虫 ,也
有病害发生;高温高湿条件下 ,最高的 Rf出现在 Pi
10上 ,详见表 3。表明线虫的原始密度也影响繁殖
率 。
　表 2 　中温高湿与线虫繁殖率
Pi(条)
块茎
重量(g)
块茎内
线虫数(条)
Pf(条) Rf 发病级数
100000 8.5 1867 220.5 0.0022 2.7
10000 4.4 1500 338.3 0.0338 3.7
1000 3.9 867 222.2 0.2222 2.7
100 3.2 1300 406.3 4.0625 3.3
10 8.1 867 107.4 10.7438 2.7
CK 7.3 0 0 - 1
　表 3 　高温高湿与线虫繁殖率
Pi(条) 块茎重量
(g)
块茎内
线虫数
(条)
Pf(条) Rf 发病级数
100000 5.9 2600 440.7 0.0044 4.3
10000 7.2 1933 269.8 0.0270 3.7
1000 4.1 2433 593.5 0.5935 4.3
100 5.5 2200 402.4 4.0244 4
10 5.6 733 131.7 13.1737 3
CK 7.3 0 0 - 1.7
2.2　温湿度与滇重楼生长　从表 4看出苗率随着
温湿度增加而降低 ,且块茎严重腐烂 ,发病率 、发病
级数和病情指数也随之增加 ,显示高温和高湿的生
长环境易发生滇重楼腐烂。
　表 4 　三种接种条件与重楼生长
接种条件 出苗率(%) 发病率(%) 病情指数(%)
正常生长条件 50.0 66.7 29
中温高湿条件 44.4 72.2 33
高温高湿条件 0 94.4 50
2.3　接种方法与发病程度　切块接种的根茎在第
3天出现一些淡黄色或紫红色斑点 ,而 CK没有颜色
变化;第 10天时 ,切块成泛土色或土色 ,油状的浑浊
物增多 ,开始腐烂 ,而 CK长了霉菌 ,颜色没有变化;
第 20天时 ,大多数切块整个表面变成土色 ,中央出
现蜂窝状的腐烂样 。
各种不同接种方法 ,以挖孔接种的虫口密度最
大(11084),其次是切块接种 (8960)和划伤接种
(8340),完整根茎 (CK)的虫口密度最小为 7291。
发病级数以切块接种最高为 3.7 ,其次是挖孔及划
伤分别为 2.61和 2.33,完整根茎发病级数最小为
1.998。这说明线虫主要通过伤口对根茎造成影响 ,
加重根茎腐烂 。详见图 1、2。
·1468· 中药材　JournalofChineseMedicinalMaterials　第 31卷第 10期 2008年 10月
图 1　接种方法和接种量对 Pf影响
图 2　接种方法与发病级数
3 　讨论
滇重楼人工栽培病虫害严重 ,尤其根茎腐烂 ,并
从腐烂根茎中分离得到小杆线虫。本实验以表面消
毒的线虫接种健康的根茎 ,无论哪种接种方法 ,均可
引起发病 ,且发病程度与接种虫口数呈正相关 ,最高
发病率可高达 94.4%。至于线虫以外的其他病原
物还有待测定。
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版社 , 1998:306-325.
(2007-12-03收稿
2008-05-20修回)
《中药材 》杂志征稿内容
1 　药用植物栽培 ,包括野生药材变家种 ,引种药材和异地药材的引种驯化 ,道地药材的研究 ,培育优良品
种 ,防治病虫害 ,改革耕作制度 ,提高产量 、质量 ,组织培养 ,药用真菌的栽培及 GAP基地的建设等 。
2　动物药研究 ,包括药用动物的饲养和管理 ,资源 、生态 、习性的调查与观察 。野生变家养与异地引种品种
的驯化;用新技术 、新方法提高动物药的产量与质量 ,动物药的药理 、药化和临床实验等 。
3 　中药材鉴别 ,加工炮制和商品养护。
4 　中药资源的合理开发和利用 。
5 　中药化学成分及有效成分的提取 、分离及鉴定研究。
6 　中药药理 、临床试验研究。
7 　新技术 、新方法在中药材上的应用。
8 　基础理论讲座 ,文献综述 ,专论 ,考证 ,译文 ,中药剂型改革 ,制剂 ,用药 ,药膳 ,经验以及报道中药店(房)
的文章等 。
·1469·中药材　JournalofChineseMedicinalMaterials　第 31卷第 10期 2008年 10月