全 文 ：影响草地早熟禾愈伤组织诱导和分化的相关因子研究
张媛媛，马晖玲，俞　玲
（甘肃农业大学 草业学院／草业生态系统教育部重点实验室／甘肃省草业工程实验室／中－美草地畜牧业
可持续发展研究中心，甘肃 兰州　７３００７０）
　　摘要：以草地早熟禾品种午夜２号，新格莱德和橄榄球２号种子为外植体，采用不同温度及浸种时
间处理后进行愈伤组织的诱导和分化培养。结果表明：４℃浸种１６～２４ｈ可以促进愈伤组织形成，不同
品种间差异不明显；午夜２号和橄榄球２号继代１次的愈伤组织分化能力最强，新格莱德继代２次的胚
性愈伤组织分化率最高。
　　关键词：草地早熟禾；愈伤组织；出愈率；愈伤组织分化
　　中图分类号：Ｓ　３３０．２　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９－５５００（２０１２）０５－００６２－０５
　　草地早熟禾（Ｐｏａ　ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）是一种优质的冷季型
草坪草，主要分布于我国北方地区，也是这一地区需求
量最大的建坪草种之一。但草地早熟禾具有生长缓
慢、抗病虫害能力弱、耐高温和抗旱能力较差，在高温
干旱的环境下叶片容易干枯变黄等缺点［１，２］。而草地
早熟禾的一些改良品种，如午夜２号（ＭｉｄｎｉｇｈｔⅡ）、
新哥来德（Ｎｕｇｌａｄｅ）、橄榄球２号（ＲｕｇｂｙⅡ）等具有优
良特性。其中，午夜２号的特点为绿期长、耐低修剪、
抗旱耐寒性强、耐热耐阴性高、耐践踏、综合抗病力好；
新格莱德耐热耐阴力出众、抗病性能高、植株低矮［３］；
橄榄球２号抗寒旱能力强，绿期长、返青好、抗病虫害
能力强［４，５］。草地早熟禾的３个品种的综合评价较高，
是目前草坪建植中优先选择的优异品种，同时也是良
好的育种亲本材料。以草地早熟禾午夜２号、新格莱
德和橄榄球２号为材料，进行愈伤组织诱导和植株再
生的研究，为草地早熟禾的品种改良和新品种选育奠
定基础。
１　材料和方法
１．１　试验材料
　　供试材料由北京克劳沃集团提供的草地早熟禾
　　收稿日期：２０１２－０４－２０；修回日期：２０１２－０６－０１
　　基金项目：国家自然科学基金“草地早熟禾种间体细胞杂
交的研究”（３１１６０４８２）资助
　　作者简介：张媛媛 （１９８８－），女，甘肃天水人，在读硕士。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｙｙｓ．ｓ＠１６３．ｃｏｍ
马晖玲为通讯作者。
午夜２号、新格莱德和橄榄球２号３个品种的成熟种
子为供试材料。
　　培养基所用的无机盐、蔗糖以及琼脂为国产分析
纯；各种维生素和激素购自上海生工生物有限公司，实
验用水均为蒸馏水。
１．２　实验方法
１．２．１　外植体处理　取每个品种的成熟种子适量，分
成两份浸泡于清水，分别放置于４℃冰箱和２５±１℃
恒温培养箱中，处理时间分别为８、１６和２４ｈ，取出后
用清水冲去漂浮的干瘪种子并用纱布包裹，然后在超
净工作台上先后用７０％酒精和０．１％升汞溶液消毒２
～１０ｍｉｎ，无菌水冲洗３～５次，放置在双层无菌滤纸
上吸干水分［６］。
１．２．２　愈伤组织诱导和继代培养　将灭菌后的种子
按每皿５０粒接种于 ＭＳ诱导培养基，置于２５±１℃、
黑暗条件下进行愈伤组织的诱导；６周后，将愈伤组织
转接到继代培养基上，每１５ｄ继代１次［１８］。附加的激
素成分及含量见表１。
１．２．３　分化和植株再生　选取不同继代次数且胚性
较好的愈伤组织接种到分化培养基（表１），置于人工
气候箱培养，温度为２５±１℃，１６ｈ光照，８ｈ黑暗，光
照强度为２　０００ｌｘ。
１．３　统计与分析
　　（１）记录不同处理条件下种子由萌动到发芽再到
愈伤组织形成的时间，计算平均出愈时间。
　　（２）接种约６周（第１次继代前），统计各品种不同
处理条件下的总愈伤组织块数，计算出愈率。
２６ 　　　　　　ＧＲＡＳＳＬＡＮＤ　ＡＮＤ　ＴＵＲＦ（２０１２）　　　　　　　　　　　　Ｖｏｌ．３２Ｎｏ．５
DOI:10.13817/j.cnki.cyycp.2012.05.014
表１　培养基激素含量
　　Ｔａｂｌｅ　１　Ｈｏｒｍｏｎｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　 ｍｇ／Ｌ
愈伤组织诱导阶段
２，４－Ｄ　 ６－ＢＡ
继代培养阶段
２，４－Ｄ　 ６－ＢＡ
分化培养阶段
ＮＡＡ　 ６－ＢＡ
午夜２号　 １．０　 ０．１　 １．０　 ０．３　 ０．５　 １．０
新格莱德　 ３．０　 ０．５　 ３．０　 ０．５　 ０．５　 ２．０
橄榄球２号 ３．０　 ０．１　 ３．０　 ０．１　 ０．５　 ２．０
　　出愈率（％ ）＝愈伤组织块数／接种的种子总数×
１００。
　　（３）愈伤组织转移到分化培养基２０ｄ后，统计分
化的绿芽数，并计算绿芽率。
　　绿芽率（％ ）＝出现绿芽的愈伤数／愈伤总数×
１００
　　（４）愈伤组织转接到分化培养基４０ｄ后，记录成
苗数，并计算成苗率。
　　成苗率（％ ）＝成苗的愈伤数／愈伤总数×１００
２　结果与分析
实验做了２种温度和３个浸种时间的预处理。不
同条件处理的草地早熟禾成熟种子的诱导，愈伤组织
在出愈时间和出愈率等方面有明显差异，而分化和再
生过程差异不大（图１）。
２．１　不同处理对草地早熟禾种子出愈时间的影响
浸种时间相同，４℃下浸种较２５℃下浸种，各品
种的出愈时间显著缩短。而浸种温度相同条件下，各
品种浸种８ｈ较浸种１６ｈ和２４ｈ的出愈时间显著增
加，而１６ｈ和２４ｈ间差异不显著（表２）。实验中，在
２５℃下浸种１６ｈ和２４ｈ，各品种４～５ｄ萌动，７～８ｄ
发芽，平均２６．２６～３８．７９ｄ形成愈伤组织，而在４℃
下浸种１６ｈ和２４ｈ，进程明显提前，在１６．２７～２８．９５
ｄ即形成愈伤组织，说明对草地早熟禾种子进行低温
预处理能加快出愈时间，最佳浸种时间１６～２４ｈ。
２．２　不同处理对草地早熟禾出愈率的影响
相同时间４℃较２５℃浸种，各品种愈伤组织诱导
率均有所提高（表４），在浸种１６ｈ和２４ｈ时，这２个
温度处理的差异呈显著水平；相同温度条件下浸种８ｈ
的愈伤组织诱导率均明显低于１６～２４ｈ。表明４℃浸
图１　４种愈伤组织生长状况
Ｆｉｇ．１　Ａ　Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ；Ｂ　Ｃａｌｕｓ　ｓｕｂ－ｃｕｌｔｕｒｅ；Ｃ　Ｇｒｅｅｎ　ｓｈｏｏｔ－ｂｕｄｓ；Ｄ　Ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ
　　注：Ａ诱导中的愈伤组织；Ｂ继代培养的愈伤组织；Ｃ出现绿芽的愈伤组织；Ｄ出苗的愈伤组织
表２　不同处理草地早熟禾的出愈时间
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　Ｐｏａ　ｐｒｅｔｅｎｓｉｓ　 ｄ
品种
８ｈ
４℃ ２５℃
１６ｈ
４℃ ２５℃
２４ｈ
４℃ ２５℃
午夜２号 （３０．６９±１．５７）ｂ （３８．９９±１．４４）ａ （１９．２７±１．１４）ｂ （３２．９８±１．４３）ａ （１５．５６±２．９０）ｂ （３０．４６±２．１２）ａ
新格莱德 （２７．３８±１．０２）ｂ （４０．５５±１．６２）ａ （１９．８１±１．００）ｂ （２６．９３±１．４７）ａ （２０．３５±１．２８）ｂ （２５．５３±１．６０）ａ
橄榄球２号 （３５．７９±１．５３）ｂ （４６．１３±１．８１）ａ （２７．５３±１．３５）ｂ （４０．０１±１．４６）ａ （３１．０２±１．８４）ｂ （３６．６０±１．４２）ａ
品种
４℃
８ｈ １６ｈ ２４ｈ
２５℃
８ｈ １６ｈ ２４ｈ
午夜２号 （３０．１６±１．５３）ａ （２０．２７±１．１１）ｂ （１６．２７±１．１０）ｂ （３７．４５±１．５５）ａ （３０．７５±１．４６）ｂ （３１．１８±０．７４）ｂ
新格莱德 （２７．６９±１．２８）ａ （２０．７６±１．２１）ｂ （２０．０６±１．２７）ｂ （３８．５２±１．５９）ａ （２７．５１±１．５８）ｂ （２６．２６±１．６１）ｂ
橄榄球２号 （３３．５７±１．７０）ａ （２８．９５±１．２６）ｂ （２６．１４±１．５９）ｂ （４９．１８±１．４８）ａ （３８．２６±１．５０）ｂ （３８．７９±１．３１）ｂ
　　注：同列不同字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５），下同
３６第３２卷　第５期　　　　　　　　　　　草 原 与 草 坪２０１２年
种有利于提高草地早熟禾愈伤组织的诱导率，但浸种
时间过短则不利于诱导愈伤组织。午夜２号浸种１６～
２４ｈ的愈伤组织诱导率略高，说明４℃下浸种１６ｈ有
利于午夜２号愈伤组织诱导。新格莱德和橄榄球２号
在４℃下浸种２４ｈ的愈伤组织诱导率比浸种１６ｈ略
高，结合二者在此条件下的平均出愈时间，说明４℃下
浸种２４ｈ有利于愈伤组织诱导。
２．３　继代次数对草地早熟禾愈伤组织分化的影响
　　分别选取继代１～６次，外表干燥、致密、呈颗粒状
的愈伤组织接种到分化培养基上，每１０ｄ继代１次。
约２０ｄ愈伤组织出现绿色芽点，４０ｄ形成绿苗（图２）。
随着继代次数的增加，草地早熟禾愈伤组织的分化能
力逐渐下降。午夜２号和橄榄球２号继代１次的愈伤
组织分化能力最高，继代次数增加，分化率明显降低；
新格莱德继代２次的愈伤组织有较强的组织分化能
力，随后愈伤组织分化能力急剧下降。结果显示，草地
早熟禾继代培养时间越长越不利于愈伤组织的分化，
培养３０ｄ以内的愈伤组织胚性较好，分化能力强，继代
培养６０ｄ以后的愈伤组织分化率明显降低，基本丧失
分化能力。
表３　不同处理草地早熟禾的出愈率
Ｔａｂｌｅ　３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｐｏａ　ｐｒｅｔｅｎｓｉｓ ％
品种
８ｈ
４℃ ２５℃
１６ｈ
４℃ ２５℃
２４ｈ
４℃ ２５℃
午夜２号 （３８．０９±１．５７）ａ （３５．９４±１．７７）ａ （７３．５３±１．８２）ａ （６４．３０±１．４９）ｂ （６５．９３±１．４８）ａ （５６．８９±１．４１）ｂ
新格莱德 （３８．６２±１．２８）ａ （３３．３７±１．２３）ａ （６４．５７±１．６５）ａ （５５．９５±１．３８）ｂ （６５．０６±２．０６）ａ （５０．８９±１．７８）ｂ
橄榄球２号 （２６．２１±１．１４）ａ （２７．７９±１．５４）ａ （５９．５２±１．８３）ａ （５０．８３±１．６３）ｂ （６０．３０±１．５６）ａ （５３．１４±１．７３）ｂ
品种
４℃
８ｈ １６ｈ ２４ｈ
２５℃
８ｈ １６ｈ ２４ｈ
午夜２号 （３６．２１±１．７８）ｂ （７８．４７±２．２０）ａ （６５．８０±２．６５）ａ （３５．１３±１．５６）ｃ （６１．３４±１．８７）ａ （５５．２６±１．４２）ｂ
新格莱德 （３５．３０±１．２６）ｂ （６０．６４±１．８３）ａ （６１．６１±１．４８）ａ （３１．９３±１．１８）ｃ （５９．９５±１．４０）ａ （４９．６０±１．６２）ｂ
橄榄球２号 （２５．９３±１．３１）ｂ （５７．０５±１．７８）ａ （６１．５２±１．７４）ａ （３０．９１±２．０７）ｂ （５１．９６±１．８２）ａ （５２．２７±２．０３）ａ
图２　继代培养次数草地早熟禾愈伤组织的分化
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｓｕｂ－ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃａｌｕｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｏａ　ｐｒｅｔｅｎｓｉｓ
３　讨论与结论
３．１　低温处理对草地早熟禾愈伤组织诱导的影响
　　关于低温预处理对愈伤组织诱导的影响，国内外
学者的研究结果不尽相同。刘萍等［７］和廖祥儒等［８］在
研究中发现，低温处理能够促进小麦成熟胚愈伤组织
的形成；但曹原等［９］在研究中指出，低温预处理对愈伤
组织形成率的影响取决于植物体的品种；贺杰等［１０］在
研究中报道，尽管低温预处理对不同小麦品种愈伤组
织诱导率的促进效应在不同基因型间存在差异，但低
温预处理有益于多数品种进行愈伤组织诱导；１９８４年
ＭｃＤｏｎｎｅｌ和Ｃｏｎｇｅｒ［１１］的研究表明，种子在４℃下进
行低温预处理可以有效提高肯塔基种子诱导愈伤组织
的能力。此次研究发现，４℃低温预处理对３个供试草
地早熟禾品种愈伤组织的诱导均有促进作用，加快了
愈伤组织的形成并提高了愈伤组织的诱导率，可能是
低温处理打破种子休眠，提高种子萌发率，从而提高了
其愈伤组织诱导率。因此，低温预处理可以广泛用来
改善草地早熟禾种子愈伤组织形成。
３．２　浸种时间对草地早熟禾愈伤组织诱导的影响
在对日本结缕草进行研究的结果表明，用水浸泡
处理和综合处理的方法可以快速有效地促进日本结缕
４６ 　　　　　　ＧＲＡＳＳＬＡＮＤ　ＡＮＤ　ＴＵＲＦ（２０１２）　　　　　　　　　　　　Ｖｏｌ．３２Ｎｏ．５
草成熟种子发芽，并且指出最佳浸泡时间为７２ｈ，但随
着浸泡时间延长，种子萌发率降低，愈伤组织诱导率也
相应下降［１２，１３］；贺杰等［１０］以小麦种子作为供试材料，
研究了不同浸种时间对种子出愈率的影响，结果显示，
１６ｈ为最佳浸种时间，同时还指出不同品种应采取不
同浸种时间。试验发现，浸种８ｈ的种子仍然较硬，很
难剥离胚，不利于种子的萌发，愈伤组织诱导率也处于
较低水平；浸种１６～２４ｈ的种子胚易剥离，种子萌发
率升高，有利于愈伤组织的形成。
３．３　继代培养时间对草地早熟禾再生的影响
对不同基因型早熟禾组织培养和植株再生的研究
表明，早熟禾愈伤组织的继代时间对其分化影响较大，
随着愈伤组织继代培养时间的增加，其再分化能力显
著下降［１１，１４］，培养超过３个月的愈伤组织基本丧失分
化能力［１５］。Ｋｅ等［１４］研究结果表明，植株再生能力与
愈伤组织的生长状态有关，颜色鲜黄、表面干燥、颗粒
状，生长迅速的愈伤组织为胚性愈伤组织，Ａｒｍ－
ｓｔｒｏｎｇ［１６］，佘建明等［１７］认为选择胚性较好的愈伤组织
有利于克服继代培养时间对再生能力产生的不良影
响。研究结果显示，继代１～２次的愈伤组织保持较高
分化能力，继代３次后愈伤组织分化能力明显降低，甚
至丧失分化能力；不同基因型之间差异显著，午夜２号
和橄榄球２号继代１次的愈伤组织分化能力最强，而
新格莱德继代２次的分化率明显高于其他培养时间。
　　以草地早熟禾３个品种的成熟种子作为外植体，
对种子作温度及浸种处理，进行愈伤组织的诱导，结果
表明４℃浸种１６～２４ｈ可以促进愈伤组织形成，不同
品种差异不明显；对３个品种进行分化培养，午夜２
号、橄榄球２号继代１次的愈伤组织胚性最好，分化能
力强，新格莱德继代２次的胚性愈伤组织分化率最高。
为了提高草地早熟禾愈伤组织诱导率并加快出愈时
间，对种子应做４℃低温预处理，并且浸泡１６～２４ｈ为
宜；愈伤组织胚性的保持是进行植株再生的关键，因
此，应挑选生长状态最好的愈伤组织进行植株再生，此
次实验午夜２号和橄榄球２号继代培养１５ｄ、新格莱
德继代培养３０ｄ。
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ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｏａ　ｐｒｅｔｅｎｓｉｓ
ＺＨＡＮＧ　Ｙｕａｎ－ｙｕａｎ，ＭＡ　Ｈｕｉ－ｌｉｎｇ，ＹＵ　Ｌｉｎｇ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇａｎｓｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｇｒａｓｓｌａｎｄ　Ｅｃｏｓｙｓｔｅｍ，
Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ／Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｇａｎｓｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ／Ｓｉｎｏ－Ｕ．Ｓ．
Ｃｅｎｔｅｒｓ　ｆｏｒ　Ｇｒａｚｉｎｇｌａｎｄ　Ｅｃｏｓｙｓｔｅｍ　Ｓｕｓｔａｉｎａｂｉｌｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｍａｔｕｒｅ　ｓｅｅｄｓ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　Ｋｅｎｔｕｃｋｙ　ｂｌｕｅｇｒａｓｓ　ａｒｉｅｔｉｅｓ，Ｍｉｄｎｉｇｈｔ　ＩＩ，Ｎｕｇｌａｄｅ　ａｎｄ　Ｒｕｇｂｙ　ＩＩ，ｗｅｒｅ
ｕｓｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ　ｗｈｉｃｈ　ｉｎｃｌｕｄｅｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｅｍｐｅｒａ－
ｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｔｉｍｅ　ｐｅｒｉｏｄｓ　ｏｆ　ｓｅｅｄ　ｓｏａｋｉｎｇ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｉｌｕｓｔｒａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｓｅｅｄｓ　ｓｏａｋｉｎｇ　ｉｎ　４℃ｃｏｌｄ　ｗａ－
ｔｅｒ　ｆｏｒ　１６～２４ｈｃａｎ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｍｏｎｇ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ａｒｉｅｔｉｅｓ；ａｎｄ
ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ，ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｄｎｉｇｈｔ　ＩＩ　ａｎｄ　ｒｕｇｂｙ　ＩＩ　ｗａｓ
ｈｉｇｈｅｓｔ　ｆｏｒ　ｏｎｃｅ　ｓｕｂ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ，ｂｕｔ　ａｆｔｅｒ　ｔｗｉｃｅ　ｓｕｂ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ，Ｎｕｇｌａｄｅ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ．
　　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｏａ　ｐｒｅｔｅｎｓｉｓ　Ｌ；ｃａｌｕｓ；ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ；
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
ｃａｌｕｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
（上接６１页）
Ａ　ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｐｒｅｖｅｎｔ　Ｈｅｔａｉｎ　ａｌｆａｌｆａ
ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ　ｏｆ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ
ＷＡＮＧ　Ｔｉｎｇ－ｈｕｉ，ＭＡ　Ｈｕｉ－ｌｉｎｇ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇａｎｓｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｇｒａｓｓｌａｎｄ　Ｅｃｏｓｙｓｔｅｍ，
Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ／Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｇａｎｓｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ／Ｓｉｎｏ－Ｕ．Ｓ．
Ｃｅｎｔｅｒｓ　ｆｏｒ　Ｇｒａｚｉｎｇｌａｎｄ　Ｅｃｏｓｙｓｔｅｍ　Ｓｕｓｔａｉｎａｂｉｌｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｉｓ　ａ　ｃｏｍｍｏｎ　ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ　ｆｏｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ａｌｆａｌｆａ．Ｉｔ　ｉｓ　ａ　ｓｅｒｉｏｕｓ　ｐｒｏｂｌｅｍｓ　ｗｈｉｃｈ
ｌｉｍｉｔｓ　ｔｈｅ　ｓｕｃｃｅｓｓ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｂｅｃａｕｓｅ　ｔｈｅｙ　ｃａｎ　ｎｏｔ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ｉｎｔｏ　ｎｏｒｍａｌ　ｐｌａｎｔｓ　ｏｒ　ｈａｒｄｌｙ　ｓｕｒｖｉｖｅ
ｗｈｅｎ　ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｔｏ　ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ，ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ　ｏｆ　Ｈｅｔｉａｎ　ａｌｆａｌｆａ
ｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｗａｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂｙ　ｃｈａｎｇｅ　ｓｏｍｅ　ｆａｃｔｏｒｓ（ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ，ｓｕｇａｒ　ｃｏｎ－
ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ａｇａｒ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）ａｓ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ　ｏｆ　ａｌｆａｌｆａ（Ｈｅｔｉａｎ）ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ａｎｄ　ＭＳ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｃ　ｍｅ－
ｄｉｕｍ　ｏｆ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｈｅｔｉａｎ　ａｌｆａｌｆａ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｃａｎ　ｂｅ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ－
ｌｙ　ｏｎ　ＭＳ　ｂａｓａｌ　ｓａｌｔ　ａｎｄ　ｖｉｔａｍｉｎｓ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　２．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ　ａｎｄ　０．５ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ　ａｎｄ　２０～２５ｇ／Ｌ　ｓｕｇａｒ　ａｎｄ　ｓｏｌｉｄ－
ｉｆｉｅｄ　ａｎｄ　７ｇ／Ｌ　ａｇａｒ　ｗｉｔｈ　１　０００～１　２００ｌｘ　ｌｉｇｈｔ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ．
　　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｈｅｔｉａｎ　ａｌｆａｌｆａ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ
６６ 　　　　　　ＧＲＡＳＳＬＡＮＤ　ＡＮＤ　ＴＵＲＦ（２０１２）　　　　　　　　　　　　Ｖｏｌ．３２Ｎｏ．５