全 文 ：昆 明 医 学 院 学 报 2009，（11）：15～ 18
Journal of Kunming Medical University
CN 53 -1049/ R
论 著
滇重楼对口腔病原菌生长影响的体外实验研究
李艳红 1），刘 娟 1），杨丽川 2），张灿华 1），李 罡 1）
（1） 昆明医学院附属口腔医院，云南昆明 650031；2） 昆明医学院药学院，云南昆明 650031）
［摘要］目的 测定滇重楼对口腔临床常见病原菌生长的影响，从而初步确定其在口腔临床的药用价值．
方法 采用美国国立实验室标准化委员会推荐的厌氧菌药物敏感试验—琼脂稀释法，测定滇重楼对 21株口腔
临床常见病原菌模式株、临床分离株的体外抗菌活性，用最小抑菌浓度（MIC） 表示．结果 滇重楼对 10株致
龋菌和 11株牙髓根尖周炎、牙周病的常见病原菌的 MIC值均为 20 mg/mL．结论 滇重楼对实验细菌的生长均
有抑制作用，对口腔细菌性疾病的临床治疗具有潜在的药用价值．
［关键词］滇重楼；口腔病原菌；生长；抗菌活性
［中图分类号］ R780.1［文献标识码］ A［文章编号］ 1003－4706（2009） 11－0015－04
Effect s of Par is Polyphylla Var .yunnanensis on t he Growt h of
Oral Pat hoges in Vit ro
LI Yan－hong1），LIU Juan1），YANGLi－chuan2），ZHANGCan－hua1），LI Gang1）
（1） The Affiliated Stomatology Hospital of Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650031；2）
School of Pharmacy，Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650031，China）
［Abstract］ Objective To determine the effect of Paris polyphylla var．yunnanensis on the growth of
common oral pathogens in vitro，and to discuss primarily the medicinal value of this herbs．Methods Agar
dilution method， the antimicrobial susceptibility testing of anaerobes which was recommended by National
Committee for Clinical Laboratory Standard（NCCLs），was used to determine the antimicrobial activity of Paris
polyphylla var．yunnanensis on 21 kinds of oral model strains and clinical isolates．The results were expressed by
Minimum inhibitory concentration（MIC）．Result Paris polyphylla var．yunnanensis was effective to all the
oral pathogens， the MIC were all 20 mg/mL．Conclus ions Paris polyphylla var．yunnanensis can inhibit the
growth of common oral pathogens in vitro．It shows that Paris polyphylla var．yunnanensis can be used in the
treatment or prevention of oral bacterial diseases.
［Key words］ Paris polyphylla var.yunnanensis；Oral pathogen；Growth；Antibacterial activity
［基金项目］云南省教育厅科学研究基金资助项目（08C0106）；云南省应用基础研究基金资助项目（2008CD118）
［作者简介］李艳红（1975~），女，湖南嘉禾县人，医学硕士，讲师，主要从事预防口腔医学、儿童口腔医学临床工
作.
［通讯作者］李罡．E- mail:leegunser@163.com
滇重楼是云南白药等中成药的重要原料药，
目前其 GAP规范化种植为云南省科技厅重点建设
项目．大量研究证实，滇重楼具有抑菌等多种药
理作用，但其对口腔细菌生长代谢是否有影响，
第 30卷昆 明 医 学 院 学 报16
目前尚无文献报道．口腔是人体与外界直接相通
的门户之一，口腔内适宜的环境条件使许多种类
的微生物在口腔内定居、生长繁殖，构成了复杂
的口腔微生态环境[1]．龋病、牙周病、牙髓根尖周
病是口腔常见的细菌感染性疾病，在本质上是菌
群生态失衡性疾病，需生态防治．防龋中药在调
理口腔菌群平衡方面具有其他防龋药物不可比拟
的优势[2]，近年来受到国内外研究者的广泛关注．
但中药对防治牙周病、牙髓根尖周病的相关研究
较少．本研究通过测定滇重楼对 21株口腔临床常
见致龋菌、牙髓根尖周病和牙周病病原菌模式株
及临床分离株的生长影响，初步探讨其是否具有
防治该类口腔细菌性疾病的潜在临床药用价值．
1 材料与方法
采用美国国立实验室标准化委员会推荐的厌
氧菌药物敏感试验—琼脂稀释法，测定滇重楼对
21 株口腔临床常见病原菌的最小抑菌浓度
（minimum inhibitory concentration，MIC）．
1.1 实验药物及配制
1.1.1 实验药物贮存液配制 将滇重楼研磨粉碎
后，采用高压法配制实验药物储存液，配制方法：
称取 1 g药物加入 5 mL无菌蒸馏水，在试管中混
合后置高压锅内，121 ℃、15 min（药物浓度：
200 mg/mL）．
1.1.2 药物实验液的配制 取药物贮存液，用无
菌 BHI肉汤培养基（英国 OXID） 对倍稀释，配
制药物浓度呈对倍递减的实验溶液：100、50、
25、12.5、6.25 mg/mL，置 4℃保存．
1.2 含药琼脂平皿的配制
选用 BHI琼脂 （英国 OXID） 作为实验琼脂
培养基，在革兰氏阴性厌氧杆菌的实验培养基中
加入维生素 K1- Hemin溶液．
分别取药物贮存液和药物实验液 2 mL与温度
为 45～55℃的 BHI（或 BHI- S） 营养琼脂混合并
立即倾注于无菌平皿中，待冷却后备用．含药琼
脂平皿的药物浓度分别为： 20、 10、 5、 2.5、
1.25、0.625 mg/mL．
1.3 实验菌株及菌液的配制
1.3.1 实验菌株 选用口腔临床常见的 21 株牙
体牙髓病和牙周病原菌作为本实验的实验菌株，
细菌名称及菌株号如下（均由四川大学华西口腔
医学院重点实验室提供）.
变形链球菌（Streptococcus mutans，S.mutans）
7株，其中模式株 1株（ATCC25175）、临床分离
株 6 株 （Sm27、Sm593、Sm516、Sm29、Sm583、
Sm572）.
粘 性 放 线 菌 （Actinomyces viscosus， A.
viscosus） 1株：ATCC15987.
内氏放线菌 （Actinomyces naeslundii， A.
naeslundii） 1株：ATCC12104.
嗜酸乳杆菌 （Lactobacillus acidophilus， L.
acidophilus） 1株：4356.
牙龈卟啉单胞菌 （Porphyromonas gingivalis，
P.gingivalis） 1株：模式株 ATCC33277.
中间普雷沃菌 （Prevotella intermedius， P.
intermedius） 1株：ATCC25611.
变黑普雷沃菌 （Prevotella nigrescens）， P.
nigrescens.） 1株：ATCC32567.
洛 氏 普 雷 沃 菌 （Prevotella loescheii， P.
loescheii） 1株：ATCC15930.
具核拟杆菌 （Fusobacterium nucleatum， F.
nucleatum） 1株：ATCC25586.
产黑色素的革兰氏阴性无芽胞厌氧杆菌
（BPB） 临床分离株 6株：M- 1、M6- 7、M2- 1- 1、
M2- 7- 6、M11- 2、M13- 7．
质控菌株为脆弱拟杆菌 （Bacteroides fragilis）
ATCC25285．
1.3.2 实验菌液的准备 在 BHI琼脂表面接种实
验菌株，置于厌氧培养箱内 （80% N2+10%
CO2+10%H2） 培养 48 h，取 48 h 纯培养物接种
BHI 肉汤并放置厌氧培养箱内 （80%N2+10%
CO2+10%H2） 培养 48 h，校正菌液浓度为 0.5
McFarland （1.5×108 cell/mL） 备用．
1.4 MIC值测定
用细菌点种仪取实验菌液（细菌浓度：1.5×
108 cell/mL） 5 μL分别点种于不同浓度的系列含
药琼脂平皿表面，然后放置于厌氧培养箱内
（80%N2+10%CO2+10%H2），培养 48 h后读取 MIC
值结果，评价抑菌作用.
2 结果
用蒸馏水代替实验药液的阴性对照组，所有
实验细菌均生长良好，所以实验药物水溶液的
李艳红，等．滇重楼对口腔病原菌生长影响的体外实验研究 17第 11期
表 1 滇重楼对 10株致龋菌的抑菌作用
Tab. 1 The MIC of Par is polyphylla var．yunnanens-
is t o 10 kinds of car iogenic bact er ia
MIC值（mg/mL）
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
细菌（株数） 药物用量（mL）
S.mutans（6）
ATCC25175 2
Sm27 2
Sm593 2
Sm516 2
Sm29 2
Sm583 2
Sm572 2
L.acidophilus
ATCC4356 2
A.viscosus
ATCC15987 2
A.naeslundii
ATCC12104 2
B fragilis
ATCC25285 2
MIC值（mg/mL）
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
细菌（株数） 药物用量（mL）
P.gingivalis
ATCC33277 2
P.intermedius
ATCC25611 2
P.nigrescens
ATCC32567 2
P.loescheii
ATCC15930 2
F.nucleatum
ATCC25586 2
BPB
M- 1 2
M6- 7 2
M2- 1- 1 2
M2- 7- 6 2
M11- 2 2
M13- 7 2
B fragilis 2
表 2 滇重楼对 11株牙髓根尖周炎和牙周病病原菌的抑菌
作用
Tab. 2 The MIC of Par is polyphylla var．yunnanen-
sis t o 11 kinds of pat hogens involved in pulp
per iapical disease and per iodont it is
MIC值可纳入结果分析．滇重楼对 10株致龋菌和
11株牙髓根尖周炎和牙周病病原菌的MIC值结果
见表 1、2．
3 讨论
龋病、牙周病、牙髓根尖周病是口腔常见的
细菌感染性疾病，牙菌斑是造成此类疾病的始动
因子．大量研究证实，龋病的发生与变形链球菌、
乳杆菌、放线菌等条件致病菌有关：变形链球菌
是口腔中主要的致龋菌；乳杆菌虽然不是龋病发
生的初始致病菌，但参与了龋病的发展，主要涉
及牙本质龋；放线菌与根面龋的发生有关，其在
根部龋发生中与变链球菌等主要致龋菌的协同作
用不可忽视．随着厌氧菌分离、培养技术的不断
改进和完善，人们对感染根管内厌氧菌的认识愈
加深入，目前普遍认为，口腔常驻菌群引起的内
源性混合感染是牙髓、根尖周病的主要细菌学特
点，其主要致病菌有：拟杆菌、产黑色素厌氧杆
菌、普雷沃菌、梭杆菌、放线菌等．细菌作为牙
周病的始动因子这一事实已毋庸置疑，然而有关
牙周病病原菌的认定、特别是有关牙周病病原菌
是特异性还是非特异性菌仍众说纷纭．目前，被
列为牙周可疑病原菌的菌种包括牙龈卟啉单胞菌、
伴放线放线杆菌、中间普雷沃菌、具核梭杆菌
等．基于以上研究基础，本研究选取 21株常见的
致龋菌、牙髓根尖周炎和牙周病病原菌作为实验
细菌，选取具有广泛的代表性，既包括实验稳定
性较强的模式株 9株，又包含能代表临床实际情
况的近期临床分离株 12株，从而使研究结果更能
体现在临床治疗中的实用价值．
口腔生态学理论认为，龋病、牙周病等许多
口腔疾病的发生，在本质上是由于口腔中正常微
生物群的失调所致，即菌群生态失衡性疾病，需
生态防治．天然药物在调理口腔菌群平衡方面具
有其他药物不可比拟的优势，又因其来源广、取
材方便、疗效显著且毒副作用小，近年来受到国
内外研究者的广泛关注．在口腔领域，天然植物
防龋的研究具有鲜明的地域特性，根据全球各地
不同的地理环境和国情，不同的国家和地区具有
代表性的天然药物．云南地处低纬度、高海拔区
域，地形地貌复杂，形成了复杂多样的气候类型
和“立体气候”的特点．丰富多样的自然条件，
汇集了从热带、亚热带至温带甚至寒带的不同生
态型的物种，最新统计显示，云南中药资源经调
查有 6 559种，品种和数量均属全国之首，并有
许多特有的品种，具有中草药资源深度开发利用
的前景．
滇重楼隶属于延龄科 Trilliaceae 重楼属 Paris
植物，又名重楼一枝箭、独角莲、大重楼、七叶
一枝花和两把伞等．本品味苦，性微寒，归肝经，
具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊之功效，主
要分布于云南等地，为云南白药、宫血宁和季德
胜蛇药等中成药的重要原料药[3]．大量研究证实，
滇重楼具有抗菌抑菌、抗病毒、免疫调节、止血、
抗肿瘤、拮抗内皮素、止咳平喘、镇静镇痛、杀
精子和雌激素样活性作用等多种药理作用，具有
广泛的临床应用范围[4]．其中，在滇重楼抗菌抑菌
作用的研究中，王强等[5]报道，滇重楼对多种细菌
有抑制作用，MIC（mg/mL分别是：宋内氏痢疾杆
菌 25.00，粘质沙雷氏菌 50.00，大肠杆菌 25.00，
金黄色葡萄球菌（耐药） 50.00，金黄色葡萄球菌
（敏感） 25.00．另有报道，除抑制细菌生长外，
滇重楼醇提物还有杀灭钩端螺旋体作用[6]、抗白色
念珠菌作用[7]．管璐晗研究了重楼醇提物、乙酸乙
酯萃取部位、正丁醇萃取部位和水溶部位这 4个
部分的抗肿瘤、抑菌、清除自由基活性，发现抑
菌活性较强的水溶部位可能是重楼抑制细菌作用
的物质基础．
本研究通过测定滇重楼对 21株口腔临床常见
病原菌模式株、临床分离株的体外抗菌活性，发
现滇重楼对 10 株致龋菌和 11 株牙髓根尖周炎、
牙周病的常见病原菌的MIC值均为 20 mg/mL，说
明滇重楼对口腔常见病原菌的生长均有抑制作用，
提示其在口腔细菌性疾病的临床治疗中具有潜在
的药用价值．然而，要使滇重楼在临床中得到应
用，还面临着诸多问题：有效成分提取、药物作
用机理阐述、药物剂型选择等，尚需进一步探讨.
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（2009－09－06收稿）
第 30卷昆 明 医 学 院 学 报18