全 文 ：芮亚培，邱 刚． HPLC法测定绒毛鼠尾草中丹参酮ⅡA含量及提取工艺优化［J］． 江苏农业科学，2013，41(5) :252 － 254．
HPLC法测定绒毛鼠尾草中丹参酮ⅡA含量
及提取工艺优化
芮亚培，邱 刚
(西藏大学农牧学院，西藏林芝 860000)
摘要:采用 HPLC 法测定野生绒毛鼠尾草中丹参酮ⅡA 的含量，并对提取工艺进行优化，流动相为甲醇 －水
(75 ∶ 25，体积比) ，检测波长为 270 nm。结果表明:丹参酮ⅡA 在 10 ～ 100 μg /mL 范围内时，峰面积与进样浓度线性
关系良好，回归方程为 y = 242． 73x + 94． 884，r2 = 0． 998 5，平均回收率为 98． 0%，RSD = 1． 67%;野生绒毛鼠尾草样品
1、样品 2、样品 3 中丹参酮ⅡA含量分别为 0． 406%、0． 582%、0． 631%。所测样品中丹参酮ⅡA 含量均高于《中国药
典》2005 年版丹参项下规定要求，且直径粗的绒毛鼠尾草丹参酮ⅡA含量相对较高。
关键词:绒毛鼠尾草;丹参酮ⅡA;高效液相色谱;含量
中图分类号:R284． 2 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2013)05 － 0252 － 02
收稿日期:2012 － 09 － 26
基金项目:西藏农牧学院青年科研基金。
作者简介:芮亚培(1981—) ，女，西藏林芝人，硕士，讲师，主要从事新
兽药开发方面研究。E － mail:294624605@ qq． com。
通信作者:邱刚，硕士，讲师，主要从事兽医药理及毒理方面研究。
E － mail:421916413@ qq． com。
绒毛鼠尾草(Salvia castanea Diels f． tomentosa Stib．)是唇
形科鼠尾草属植物栗色鼠尾草(Salvia castanea Diefs)的一个
变型［1］，产于西藏林芝地区，俗称“丹参”，为特有资源。长期
以来，当地中医师以其根和根茎代丹参使用，效果良好，有人
称之为“林芝丹参”［2］。
绒毛鼠尾草在《中国植物志》和《西藏植物志》中均有记
载，在中医及藏医里广泛用于心悸、心烦失眠、肝脾肿大、关节
疼痛、产后淤血疼痛、黄疸性发烧、口腔溃痛、月经不调等症的
治疗，24 变种 8 变型，据文献报道，西藏林芝地区有(9 种)和
可能有(8 种)的唇形科鼠尾草属植物共 17 种。其中鼠尾草
属中的丹参从 1963 年起被历版《中国药典》规定为正品丹参
原植物［3］，但在历史使用上，有学者认为应该是丹参的广义
种［4］。在现代药用中有多个地方特色品种被列为地方药品
标准［5］，如《云南省药品标准》1974 年版收载的药材丹参来源
于唇形科植物滇丹参及大紫丹参的干燥根及根茎;《贵州省
中药材质量标准》1988 年版收载的药材丹参来源于唇形科植
物滇丹参的干燥根及根茎;《青海省药品标准》1992 年版收载
的药材丹参来源于唇形科植物高原丹参的干燥根;《甘肃省
中药材质量标准》1995 年版收载的药材丹参来源于唇形科植
物甘西鼠尾草的干燥根及根茎;《浙江省中药材标准》2000 年
版收载的药材丹参来源于唇形科植物南丹参的干燥根及根
茎。2005 年 12 月西藏自治区食品药品监督管理局批准绒毛
鼠尾草为西藏地方药材标准品种，名“藏丹参”［6 － 9］。
据记载，丹参有效成分包括脂溶性成分(二萜醌类)和水
溶性成分(酚酸类) ，均具有一定的生理活性。由于受产地、
品种、气候和生态环境、炮制方法等影响，不同丹参药材所含
主要活性成分差异较大。《中国药典》丹参项下脂溶性成分
以丹参酮ⅡA作为质控指标［10 － 11］，因此本研究对绒毛鼠尾草
中的丹参酮ⅡA进行提取工艺优化和含量测定，其中含量测
定方法主要采用《中国药典》项下所列标准方法。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 植物材料 绒毛鼠尾草药材采集于西藏自治区林芝
地区，由西藏农牧学院兰小中副教授和张华老师鉴定。
1． 1． 2 主要药品和试剂 丹参酮ⅡA 对照品由河南省药品
检验所提供(批号:110766 － 200619) ，色谱纯甲醇由美国
Fisher公司生产，超纯水为自制。
1． 1． 3 主要仪器 Agilent 1200 高效液相色谱仪(安捷伦科
技有限公司) ;Welchrom C18色谱柱［月旭材料科技(上海)有
限公司］;BS214S电子天平(德国 Sartorius 公司) ;粉碎机;微
量移液器;棕色容量瓶;超声波清洗器等。
1． 2 方法
1． 2． 1 植物材料的处理 取干净的自然干燥的绒毛鼠尾草
根在植物粉碎机中粉碎，过 50 目筛，待用。
1． 2． 2 色谱条件 Welchrom 色谱柱 C18 柱(4． 6 mm ×
250 mm，5 μm) ;流动相为甲醇 －水(75 ∶ 25，体积比) ;流速
为 1 mL /min;柱温为室温;检测波长为 270 nm。
1． 2． 3 溶液的制备
1． 2． 3． 1 对照品溶液 精确称取丹参酮ⅡA对照品 4 mg，置
100 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得 40 μg /mL
的对照品溶液。
1． 2． 3． 2 供试品溶液 精确称取绒毛鼠尾草根粉末 0． 5 g，
置于磨口锥形瓶中，精确加入甲醇 50 mL，塞紧，称定重量。
超声波提取(250 W，全功率) ，放冷后，再次称定重量，用甲醇
补足减失的重量，摇匀，过滤，弃去初滤液，收集续滤液作为供
试品溶液。
1． 2． 4 线性关系考察 精确称定丹参酮ⅡA 4 mg，置于
20 mL 的棕色量瓶中，加甲醇至刻度，制成浓度为 200 μg /mL
—252— 江苏农业科学 2013 年第 41 卷第 5 期
DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2013.05.033
的溶液。精确量取该溶液 0． 5、1． 0、2． 0、3． 0、4． 0、5． 0 mL 分
别置于 10 mL 棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，精确吸取
20 μL 该液注入液相色谱仪中，按上述色谱条件进行测定，以
峰面积(y)对浓度(x)进行回归分析，得出回归方程，测丹参
酮ⅡA含量在 10 ～ 100 μg /mL范围内与峰面积的线性关系。
1． 2． 5 精密度试验 精确吸取浓度为 40 μg /mL 的丹参酮
ⅡA对照品溶液 20 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条
件进行分析，测定 5 次，计算出峰面积的相对标准偏差
(RSD) ，评估仪器精密度如何。
1． 2． 6 重复性试验 精确称定同一批样品 5 份，每份 0． 5 g，
按“1． 2． 3． 2”节制备供试品溶液，按上述色谱条件进样 20 μL
测得峰面积值，计算出绒毛鼠尾草中丹参酮ⅡA 的平均含量
和 RSD，看重复性是否良好。
1． 2． 7 稳定性试验 精确称定样品 0． 5 g，按“1． 2． 3． 2”节
制备供试品溶液，在 0、2、4、6、8 h 时分别精确吸取 20 μL 注
入高效液相色谱仪，测得峰面积值，计算 RSD，看样品在 8 h
内的稳定性是否良好。
1． 2． 8 回收率试验 分别精确称取同一批已知含量样品 4
份(丹参酮ⅡA 含量为 0． 526%) ，精确加入丹参酮ⅡA 对照
品适量，按含量测定法制备，测定含量，计算回收率。
1． 2． 9 样品测定 精确称取不同生长年限绒毛鼠尾草
0． 5 g，分别按“1． 2． 3． 1”节的方法制备供试品溶液。精确吸
取供试品溶液及“1． 2． 3． 1”项下对照品溶液(40 μg /mL)各
20 μL，分别测定其中丹参酮ⅡA 的含量(外标法)。采用超
声波提取 30、60、90 min的 3 种工艺的样品进行丹参酮ⅡA的
含量比较。
2 结果与分析
2． 1 线性关系考察
根据表 1 所测得的数据，经回归分析，得回归方程 y =
242． 73x + 94． 884，r2 = 0． 998 5，丹参酮ⅡA 含量在 10 ～
100 μg /mL 范围内与峰面积呈良好的线性关系。标准曲线见
图 1。
表 1 丹参酮ⅡA标准品峰面积实测值
标准品浓度(μg /mL) 峰面积实测值
10 2 632． 3
20 5 173． 2
40 9 382． 3
60 14 367． 5
80 19 968． 6
100 24 290． 3
2． 2 精密度试验
峰面积的 RSD为 0． 87%，仪器精密度良好。
2． 3 重复性试验
通过测得的峰面积值，计算出绒毛鼠尾草中丹参酮ⅡA
的平均含量为 0． 538，RSD 为 1． 82%，表明分析方法精密度
良好。
2． 6 稳定性试验
通过测得的峰面积值，计算 RSD 为 0． 92%，表明样品在
8． 5 h内稳定性良好。
2． 7 回收率试验
分别精确称取同一批已知含量样品 4 份(丹参酮ⅡA 含
量为 0． 526%) ，精确加入丹参酮ⅡA 对照品适量，按含量测
定法制备，测定含量，计算回收率，结果平均回收率为
98. 0%，RSD为 0． 95%(表 2)。从回收率的结果看，该方法
的准确度较好。
表 2 加样回收率试验结果(n =4)
样品号
样品量
(g)
样品中丹参酮
ⅡA含量(mg)
丹参酮ⅡA
加入量(mg)
测得值
(mg)
回收率
(%)
RSD
(%)
1 0． 483 2． 54 0． 5 3． 00 99
2 0． 476 2． 51 0． 5 2． 96 98
3 0． 492 2． 58 0． 5 3． 05 99
4 0． 482 2． 55 0． 5 2． 97 97
平均 98． 0 0． 95
2． 8 样品中丹参酮ⅡA含量测定结果及不同提取工艺比较
精确称取不同超声波处理时间(30、60、90 min)的绒毛鼠
尾草样品 0． 5 g，分别按“1． 2． 3． 2”节的方法制备供试品溶液，
吸取供试品溶液及“1． 2． 3． 1”节的标准品溶液各 20 μL，分别
测定丹参酮ⅡA含量(外标法)。结果显示，野生绒毛鼠尾草样
品 1、样品 2、样品 3 中丹参酮ⅡA 含量分别为 0． 406%、
0. 582%、0． 631%(表 3) ，所测样品中丹参酮ⅡA 含量均高于
《中国药典》2005年版丹参项下的规定要求(0． 20%) ，且根部
直径粗的绒毛鼠尾草丹参酮ⅡA含量相对较高。
表 3 野生绒毛鼠尾草干燥根粉不同提取工艺结果比较
样品号
超声波处理时间
(250W，全功率，min)
采样
季节
采样地点
丹参酮ⅡA
含量(%)
1 30 秋季 西藏林芝八一
镇周边
0． 406
2 60 秋季 西藏林芝八一
镇周边
0． 582
3 90 秋季 西藏林芝八一
镇周边
0． 631
3 讨论
供试品溶液的制备是根据 2005 版《中国药典》丹参中丹
参酮ⅡA的提取方法进行的，符合规定要求;其余各项分析效
能指标和参数均符合 HPLC分析的基本要求。丹参酮ⅡA 是
绒毛鼠尾草所含的主要成分，其含量高低直接影响药材质量。
《中国药典》2005 年版规定丹参中丹参酮ⅡA 含量不得少于
0． 20%［6］，本试验结果表明，青藏高原地区野生绒毛鼠尾草
中丹参酮ⅡA 含量均超过《中国药典》规定要求。本研究在
提取工艺上主要考察了不同超声波处理时间对最终测定结果
的影响，从试验结果来看，超声波处理30 ～ 90 min时，超声处
—352—芮亚培等:HPLC法测定绒毛鼠尾草中丹参酮ⅡA含量及提取工艺优化
櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄
理时间和药物溶出度呈正相关。
参考文献:
［1］吴征镒． 西藏植物志:第四卷［M］． 北京:科学出版社，1985:18．
［2］李 晖，蒋思萍，兰英儒． 西藏林芝地区的鼠尾草植物资源［J］．
西藏科技，2003(4) :60 － 61．
［3］国家药典委员会． 中华人民共和国药典:一部［M］． 北京:化学
工业出版社，2005:52．
［4］中国科学院云南植物研究所． 中国植物志:第六十六卷［M］． 北
京:科学出版社，1977:124 － 126．
［5］黎跃成． 药材标准品种大全［M］． 成都:四川科学技术出版社，
2001:23．
［6］初 敏，冯 亮，李跃武． 甘肃丹参———丹参类中一个重要资源
［J］． 中草药，2003，34(5) :472，附 4．
［7］叶华谷，廖文波，李 辉，等．“林芝丹参”资源调查［J］． 中药材，
2004，27(11) :809 － 811．
［8］肖小河，方清茂，夏文娟，等． 药用鼠尾草属数值分类与丹参药材
道地性［J］． 植物资源与环境，1997，6(2) :17 － 21．
［9］许 华． 大理地区市售丹参药材鉴定［J］． 中国药事，2004，18
(1) :47 － 48．
［10］何 昱，李晓茹，李冰心，等． HPLC － DAD法同时测定丹参中丹
酚酸 B和隐丹参酮的含量［J］． 现代中药研究与实践，2010，24
(5) :78 － 81．
［11］孙景波，华 荣，欧润妹，等． 绒毛鼠尾草(林芝丹参)抗肉芽肿
形成和改善血液流变学药理试验［J］． 中药材，2004，27(2) :
118 － 120．
郭志欣，顾地周，宋宇辉，等． 五味子药渣中多糖提取工艺研究［J］． 江苏农业科学，2013，41(5) :254 － 255．
五味子药渣中多糖提取工艺研究
郭志欣，顾地周，宋宇辉，王亚娣，姚加梅
(通化师范学院生命科学学院，吉林通化 134002)
摘要:以五味子醇提后的药渣为原料，以提取温度、提取时间以及料液比为主要影响因素，筛选影响五味子药渣
水溶性多糖提取的因素水平。结果显示，提取温度对多糖得率影响显著，提取时间和溶剂用量对多糖得率影响均不显
著。五味子药渣中多糖提取的最优方案:提取温度为 100 ℃、提取时间为 4 h、料液比为 1 g ∶ 30 mL。本研究确定了五
味子药渣中水溶性多糖的最佳提取工艺，为五味子的深度开发利用提供方法和理论依据。
关键词:五味子;药渣;多糖;提取
中图分类号:TS261． 7 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2013)05 － 0254 － 02
收稿日期:2012 － 11 － 01
基金项目:吉林省教育厅科学技术研究项目(编号:2011 － 307)。
作者简介:郭志欣(1980—) ，女，吉林通化人，讲师，主要从事长白山药
用植物多糖及其活性研究。E － mail:guozhixin800317@163． com。
五味子［Schisandra chinensis (Turcz．)Bailey］是木兰科五
味子属多年生藤本植物，其果实入药，主治咳喘、自汗、盗汗、
遗精、久泻、神经衰弱、健忘失眠等症［1］。制药企业对五味子
药用价值的利用主要是通过乙醇回流方式提取其中的五味子
醇、五味子甲素和五味子乙素等脂溶性成分，提取后大量的药
渣多被作为燃料焚烧或作为垃圾丢弃，这不仅是对资源的极
大浪费，同时也对环境造成污染［2］，实际上在被废弃的药渣
中还有大量的活性成分没有被充分提取出来，仍具有药用和
营养价值［3］，多糖就是其中之一。现代药理研究表明，五味
子多糖不仅具有提高机体免疫力、抗氧化及降血糖等多种生
物学活性［4 － 5］，还具有预防和治疗癌症的潜在价值［6 － 7］。目
前，对于五味子多糖提取工艺的研究较多，主要是先采用水
提、碱提或联合酶法提取除脂，再纯化除蛋白等，这些方法存
在成本较高或工艺复杂等问题，且仅适合于实验室内的小规
模研究，大多不适用于工业化生产。本研究以脱脂后的五味
子药渣为原料，开展了水溶性多糖的提取研究，以期获得一种
相对简单的、能满足工业化生产的提取方法，研究结果对五味
子资源的充分利用、药渣的进一步开发和五味子多糖提取工
艺的优化具有现实意义。
1 材料与方法
1． 1 材料
试验样品为护肝片生产后剩余的五味子药渣，由修正药
业集团吉林省通化市制药有限公司提供。
1． 2 多糖的提取流程
准确称取自然干燥的五味子药渣，每份 10 g，加水后在水
浴中以不同的温度、时间和料液比进行提取［8］，过滤，滤液用
0． 1%活性炭脱色［9］，再向滤液中加入 3 倍体积的 95%乙醇，
于冰箱中静置过夜，待沉淀完全析出，离心收集沉淀，常规干
燥，得水溶性多糖。
1． 3 测定方法
采用苯酚 － 硫酸法测定糖含量，以葡萄糖为标准
样品［10］。
1． 3． 1 标准曲线制作 准确称取标准葡萄糖 10 mg，定容于
100 mL容量瓶中，分别吸取 0． 1、0． 2、0． 3、0． 4、0． 5、0． 6、0． 7、
0． 8、0． 9 mL溶液置于大试管中，并各以水补至 1． 0 mL，再加
入 6%苯酚 0． 5 mL及浓硫酸 2． 5 mL，静置 10 min，摇匀，室温
放置 20 min。以 1． 0 mL水按同样操作为空白，于 490 nm 处
测定光密度［11］，以多糖含量为横坐标、以光密度为纵坐标绘
制标准曲线(图 1)。
—452— 江苏农业科学 2013 年第 41 卷第 5 期