全 文 ：◎研究原著 ◎ 中国临床药理学与治疗学中国药理学会主办
CN 34-1206 R , ISSN 1009-2501
E-mail:editorys@mail.wh.ah.cn
2003 Feb;8(1):23-26
2002-10-24收稿 2002-11-18修回
1 甘肃省教育厅 2001年一般性科研项目(№013-01)
程体娟 ,通讯作者 ,女 ,硕士 ,教授 ,硕士生导师 ,研究方向:中药药理。
Tel:0931-8615389 E-mai l:lilianj@lz.gs.cninfo.net
甘西鼠尾草注射液和丹参注射液抗大鼠急性脑缺血
和抗脂质过氧化作用的比较1
程体娟 ,杨志勇
兰州医学院药学系药理教研室 ,兰州 730000 ,甘肃
摘要 目的:比较甘西鼠尾草和丹参两种注射液对
大鼠急性脑缺血的影响 ,并对其作用机理进行探讨 。
方法:采用大脑中动脉阻断术(MCAO)制作大鼠急
性脑缺血模型 ,采用计算机图像分析仪测定脑梗死
的体积 ,TBA比色法测定血清 MDA 含量 ,放免法测
定血清SOD含量;电子自旋共振(ESR)法测定药物
对羟自由基的清除作用 。结果:甘西鼠尾草注射液
和丹参注射液均可明显减小急性脑缺血大鼠脑梗死
体积 ,降低血清 MDA含量 ,升高血清 SOD含量 ,体
外清除羟自由基的作用甘西鼠尾草强于丹参 。结
论:甘西鼠尾草和丹参两种注射液作用基本相同 ,提
示甘西鼠尾草有可能成为丹参的代用品 。
关键词 药理学;甘西鼠尾草注射液;丹参注射液;
大脑中动脉阻断术;脑缺血;丙二醛;超氧化物歧化
酶;羟自由基
中图分类号:R285.1;R972
文献标识码:A
文 章 编 号:1009-2501(2003)01-0023-04
丹参(salvia milliorrhiza bunge)是一种传统的活
血化淤药物 ,丹参注射液由于见效快 、疗效好 、毒性
小 ,是目前临床防治急性脑血管疾病的主要药物之
一。目前国内有限的丹参资源已经不能满足丹参类
药物生产的需要 ,迫切需要有效的丹参代用品 。甘
西鼠尾草(salvia przewaslskii maxim),又名甘肃丹参 ,
是丹参同属植物 , 在我国西北 、西南地区分布较
广[ 1] 。据报道其所含化学成分与丹参基本一致 ,其
中某些活性成分含量高于丹参[ 2] ,具有较好的开发
前景。本文通过对丹参和甘西鼠尾草两种注射液对
脑缺血的预防作用和抗脂质过氧化作用的比较 ,旨
在探讨甘西鼠尾草与丹参作用是否相似 ,以便为丰
富丹参资源及甘西鼠尾草的开发提供一定的理论依
据 。
1 材料与方法
1.1 药品及试剂 丹参注射液 ,上海第一生化药业
公司产品 , 规格:1.5 g 生药∶1 ml ,批号:980605;甘
西鼠尾草注射液 ,由兰州大学化学系提供 , 规格:
1.8 g 生药∶1 ml ,制备日期:980527;灯盏花注射液 ,
昆明龙津制药厂产品 ,批号:980912。SOD放射免疫
测定盒 ,解放军总医院科技开发中心生产;DMPO
(5 , 5-dimethyl-1-pyrroline n-oxide), Sigma 公司产品;
红四氮唑 ,北京化工四厂产品;MDA试剂盒 ,南京建
成生物工程公司产品。
1.2 动物 ♂昆明种小鼠 ,体重 25±2 g ,合格证
号:医动字第 14-006;♂Wistar大鼠 ,体重 274±28 g;
大鼠合格证号:医动字第14-005 ,均由兰州医学院动
物实验中心提供 。 ♂青紫兰家兔 ,体重 2.8±0.3
kg ,由兰州生物制品研究所提供 , 合格证号:14-004。
1.3 仪器 CMIAS8型计算机显微图像分析仪 ,北
京航空航天大学产品;TYXN-96I 型血小板聚集仪 ,
上海通用机电研究所产品;722-型分光光度计 ,上海
分析仪器厂产品;E-115型电子顺磁共振仪 ,美国瓦
里安公司产品。
1.4 实验分组及给药 (1)在体实验 ,Wistar 大鼠
随机分为 7组 ,每组 8 ～ 10 只:假手术组(等容积
NS)、模型组(等容积 NS)、灯盏花注射液组(0.042
g·kg-1)、丹参注射液组(12 、6 g·kg-1)及甘西鼠尾草
注射液组(12 、6 g·kg-1)。术前舌下静脉连续给药 3
d ,每日 2次。(2)·OH离体实验 ,分别选择不同浓度
·23·
的两种注射液 ,加入到Fenten反应体系中 ,混匀后立
即测 ESR谱 。
1.5 大鼠脑梗死体积测定 采用大脑中动脉阻断
术(MCAO)制作脑缺血动物模型[ 3 , 4] 。用 7%水合氯
醛 ip麻醉大鼠 ,将动物固定 ,使右侧面部朝上 ,剃毛
消毒后 ,在右眼与右耳间中点作一长约 1.5 cm的垂
直弧形切口 ,切开颞肌并向嘴侧翻起 ,在颧弓与颞鳞
骨接合处的前端 2 mm 处用牙科钻作一直径约 4 mm
的骨窗 ,暴露大脑中动脉(MCA),轻轻挑起后电凝阻
断位于嗅束内 1 ～ 2 mm至大脑下静脉处的一段 ,阻
断血管后逐层缝合颞肌及皮肤 ,待苏醒后放回鼠笼 ,
单独饲养 。假手术组按上述步骤进行 ,但不凝闭
MCA 。于术后 72 h 断头处死大鼠 ,取大脑迅速冷
冻 ,用自制连续切片刀冠状连续切 10 ～ 12片 ,每片
厚 1.2 mm ,在 TTC 染液中 37 ℃避光染色 30 min。
于计算机显微图像分析仪上测定每片梗死面积及总
面积 ,根据公式计算梗死体积占全脑体积的百分
率[ 5] 。
1.6 脑缺血大鼠血清MDA 含量和 SOD活力测定
大鼠取血 2 ml ,离心制备血清 ,使用MDA 检测试
剂盒 ,操作方法按照试剂盒说明书进行 ,在 722分光
光度计上测定血清中 MDA含量。大鼠取血制备血
清 , -20 ℃度保存 ,采用放免法测定血清 SOD含量 。
1.7 ·OH的测定 采用Fenten反应产生·OH ,其体
系为 Fenten-H2O2 ,取 10 mmol·L-1 FeSO4 , 7 H2O 10
μl ,1%H2O2 10μl ,0.1 mol·L-1磷酸缓冲液 25μl ,0.1
mol·L -1DMPO 20 μl ,混匀后立即测 ESR谱 。待·OH
发生体系建立后 , 选择不同浓度(31.2 、62.5 、125 、
250 、500 g·L-1)的两种注射液代替磷酸缓冲液 ,混匀
后上 ESR谱测定·OH含量。
1.8 统计方法 所有结果均采用 Excel软件 ,用 t
检验分析结果。
2 结果
2.1 甘西鼠尾草注射液和丹参注射液对大鼠脑梗
死体积的影响 与假手术组比较 ,模型组出现严重
的脑梗死。丹参注射液和甘西鼠尾草注射液高 、低
剂量组均可显著降低大鼠脑梗死体积。等剂量药物
间作用无显著的统计学意义。见表 1 。
2.2 对脑缺血大鼠血清MDA含量和 SOD水平的
影响 模型组与假手术组比较 ,血清 MDA含量明显
升高(P <0.01)。丹参注射液和甘西鼠尾草注射液
大 、小剂量对MDA含量均有显著的降低作用(P <
0.01)。等剂量药物间作用无显著统计学意义 。与
假手术组比较 , 模型组 SOD 水平明显降低(P <
0.05)。丹参注射液大 、小剂量均可升高血清中 SOD
水平(P<0.05),甘西鼠尾草注射液小剂量可轻微
升高SOD水平(P >0.05),灯盏花注射液和甘西鼠
尾草注射液大剂量反而可降低血清中 SOD 水平。
见表2 。
表 1 甘西鼠尾草注射液和丹参注射液对大鼠脑梗死体积
的影响(x±s)
组别 剂量 g·kg-1 n
梗死体积
%
梗死体积
减少 %
假手术(NS) 等容积 8 - -
模型组(NS) 等容积 8 17.06±2.54c -
丹参注射液 6 7 12.73±2.54f 38.7
丹参注射液 12 7 9.96±2.24f 26.9
鼠尾草注射液 6 8 13.22±2.32f 44.8
鼠尾草注射液 12 8 9.24±2.13f 54.9
灯盏花注射液 0.042 7 10.74±1.87f 39.4
与假手术组比较cP<0.01;与模型组比较 , fP<0.01
表 2 甘西鼠尾草注射液和丹参注射液对大鼠血清MDA 和
SOD含量的影响(x±s)
组别 剂量 g·kg-1 n
MDA含量
μmol·L-1
SOD含量
μmol·L-1
假手术(NS) 等容积 8 1.99±0.58 86.96±7.57
模型组(NS) 等容积 8 3.15±0.50c 75.97±7.79b
丹参注射液 6 7 2.51±0.48e 95±5f
丹参注射液 12 7 1.66±0.41f 100±3f
鼠尾草注射液 6 8 2.47±0.76e 84±13f
鼠尾草注射液 12 8 1.69±0.38f 60±6d
灯盏花注射液 0.042 7 1.57±0.25f 59±21e
与假手术组比较cP<0.01;与模型组比较eP<0.05 , f P<0.01
2.4 对 Fenten反应产生的羟自由基的影响 两种
注射液对·OH 的产生均有显著的抑制作用 ,在 125
g·L-1浓度下 ,甘西鼠尾草注射液对·OH 产生的抑制
作用虽然强于丹参注射液 ,但无统计学意义 ,其余各
浓度下 ,甘西鼠尾草作用均明显强于丹参 。见表 3 、
图 1。
表 3 两种注射液 对Fenten反应产生的·OH 的影响(x±s ,
n=6)
剂量
g·kg -1 丹参抑制率 % 鼠尾草抑制率 %
31.25 14.7±1.8 51.6±9.7c
62.5 25.8±3.17 82.6±7.4c
125 62.8±11.6 74.1±14.1
250 62.1±13.2 88.3±2.6b
500 59.4±15.1 83.6±2.4b
与丹参组比较bP<0.05 , cP<0.01
·24· Chin J Clin Pharmacol Ther 2003 Feb;8(1)
图1 丹参和鼠尾草注射液对Fenten反应产生的·OH的影响
A:·OH ESR图谱;B:丹参(250 g·L-1)·OH ESR图谱;C:鼠尾草(250
g·L-1)·OH ESR图谱。
3 讨论
甘西鼠尾草注射液与丹参注射液比较 ,降低大
鼠脑梗死体积的作用相似 ,其等剂量药物间作用无
显著差异 ,提示两药均有抗脑梗死作用 。众所周知 ,
在急性脑缺血病理条件下 ,抗自由基酶活性降低 ,抗
氧化物减少 ,自由基产生急剧增多 。实验证实缺血
后脑组织损伤实质是自由基引起神经细胞生物膜及
亚细胞器过氧化 ,造成结构与功能破坏 ,自由基引起
的脂质过氧化反应是脑缺血 再灌注损伤的重要机
制之一 。MDA 作为氧自由基与生物膜不饱和脂肪
酸发生脂质过氧化反应的代谢产物 ,其含量的变化
可近似反映组织中自由基变化情况[ 6] 。此外 , 脑缺
血时自由基防御体系受损 ,SOD等自由基清除剂活
性降低 ,也加剧了缺血时自由基引起的损害 。本实
验表明:丹参注射液和甘西鼠尾草注射液均可降低
脂质过氧化物丙二醛(MDA)的含量 ,提示两种药物
均可抑制脑缺血引起的脂质过氧化反应 ,丹参注射
液还可以升高体内 SOD的含量 ,提示该药可以通过
增强SOD的自由基清除作用抑制过氧化反应 ,甘西
鼠尾草注射液高剂量反而降低 SOD含量 ,提示其抑
制脑缺血引起的脂质过氧化反应可能另有途径 ,其
机理有待深入探讨 。本实验结果表明 ,两种注射液
均可显著抑制·OH 的产生 , ·OH的产生与脂质过氧
化有着密切关系[ 6] 。提示二者均可以直接清除脑缺
血后大量产生的·OH ,从而抑制脂质过氧化反应带
来的神经元损伤 ,而甘西鼠尾草注射液对·OH 的清
除作用明显强于丹参注射液 。
文献报道甘西鼠尾草所含的化学成分与丹参基
本一致 ,我们的实验结果提示两药的抗脑缺血作用
也相似 ,值得注意的是甘西鼠尾清除·OH 的作用还
强于丹参 ,因此我们有理由推测甘西鼠尾草有望成
为丹参的良好代用品 ,具有一定的开发价值。
参 考 文 献
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药鉴定[ J] .兰州医学院学报 , 1993;19:212-4
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ⅡA的资源寻找[ J] .植物学报 , 1980;22:98-100
3 Tamura A , Granaw DI , Mcculloch J , et al.Focal cerebral
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pathological consequences following middle cerebral artery oc-
clusion[ J] .Cereb Blood Flow Metab , 1981;1:53-4
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型的观察[ J] .上海第二医科大学学报 , 1990;10:140-2
5 Joshua B , Bederson MD , Lawrence H , et al.Evaluation of 2 ,
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1995;30:184-90
·25·中国临床药理学与治疗学 2003 Feb;8(1)
Comparison between s.przewalsii maxim injection and s.miltiorrhize
bunge injection on the protection on acute focal cerebral ischemia of rats
and the effect against lipide peroxidation
CHENG Ti-Juan , YANG Zhi-Yong
Department of Pharmacology , Lanzhou Medical College , Lanzhou 730000 , Gansu
ABSTRACT AIM:To compare the effect of s.milti-
orrhize bunge injection (SMBI)and s.przewalsii maxim
injection(SPMI)on acute focal cerebral ischemia in rats ,
and to study the mechanism of the actions of two agents.
METHODS:Acute focal cerebral ischemia model was
made by middle cerebral artery occlusion (MCAO)in
rats , and cerebral infarction volume was determined quan-
titatively by computer microscopical image analysis instru-
ments.MDA content in serum was determined by TBA
colorimetric analysis.SOD content in serum was studied
by radioimmunity method.The scavenging effect of
hydroxyl radical (·OH)was measured by electron spin
resonance technique (ESR).RESULTS:SMBI and SP-
MI could markedly reduce infarction volume after occlu-
sion of middle cerebral artery and MDA content in serum
in rats.SMBI could elevate SOD content in serum.Two
injections could markedly inhibit the formation of hydroxyl
radical(·OH), and the effect of SPMI was better than
that of SMBI.CONCLUSION:The effects of both SMBI
and SPMI are similar , and it is possible that SPMI as a
satisfactory substitute for SMBI.
KEY WORDS pharmacology;s.przewalsii maxim in-
jection;s.miltiorrhize bunge injection;middle cerebral
artery occlusion;acute focal cerebral ischemia;malondial-
dehyde;superoxide dismutase;hydroxyl radical
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