全 文 ：收稿日期:2010-04-20
基金项目:河南省教育厅自然科学研究计划项目(2009B210025);校企合作开发项目
作者简介:刘永录(1964-), 男 ,河南武陟人 , 副教授 ,主要从事中药有效成分提取及药学统计学方面的教学与研究。
E-mail:yonglu2005@163.com
不同采收期迷迭香中的鼠尾草酸和
鼠尾草酚含量的动态变化
刘永录 1 ,李宇伟 1 ,连瑞丽1 ,李利红 1 ,解克伟 2
(1.郑州牧业工程高等专科学校 药物工程系 ,河南 郑州 450011;
2.禹州市森源本草天然产物有限公司 , 河南 禹州 461670)
摘要:运用高效液相色谱方法 ,对不同采收期迷迭香中的鼠尾草酸和和鼠尾草酚的含量进行测定 ,
以确定其最佳采收期 。结果表明 ,优化色谱条件:检测波长 230nm,以乙腈作流动相 ,乙腈和水比
例为 60∶40, pH值 4.5 ～ 5.0。鼠尾草酸和鼠尾草酚含量均以 10月份最高 ,其次为 6月份。因此 ,
确定 10月份为迷迭香的最佳采收期 ,其次为 6月份 。
关键词:高效液相色谱法;迷迭香;采收期;鼠尾草酸;鼠尾草酚
中图分类号:S573.9　　文献标识码:A　　文章编号:1004-3268(2010)10-0088-04
ChangingofCarnosicAcidandCarnosolContentinRosmarinus
oficinalisL.atDiferentHarvestingStages
LIUYong-lu1 , LIYu-wei1 , LIANRui-li1 , LILi-hong1 , XIEKe-wei2
(1.MedicinalEngineeringDepartmentofZhengzhouColegeofAnimalHusbandryandEngineering,
Zhengzhou450011, China;2.YuzhouCitiesSenyuanBencaoNauralProductsCo., Ltd, Yuzhou461670, China)
Abstract:AnexperimentwasconductedtodeterminethecamosicacidandcarnosolcontentinRosmarinusof
ficinalisL.bymeansofHPLCatdiferentharvestingstagesinordertoobtaintheoptimalharvestingstage.Re-
sultshowed thatthedetection wacelength was 230nm, the mobile phasewasacetonitrile-water
(60∶40byvolume), andthepH=4.5-5.0.Thecontentofcamosieacidandcarnosolreachedthehighest
valueinOctober, thenfolowedinJune.Therefore, thebestharvestingstageisinOctober, nextisinJune.
Keywords:HPLC;RosmarinusoficinalisL.;Harvestingstage;Camosicacid;Carnosol
　　迷迭香(RosmarinusoficinalisL.)又名油安草 ,
系唇形科迷迭香属多年生常绿小灌木植物 [ 1-5] 。研
究表明 ,迷迭香具有清除自由基 、消炎 、抗氧化 、抗肿
瘤 、抗病毒等功效 ,广泛应用于药品 、化妆品和食品
等方面 ,其主要成分鼠尾草酸和鼠尾草酚的抗氧化
作用较强[ 6-8] 。以禹州市森源本草天然产物有限公
司药用植物 GAP生产基地的不同采收期迷迭香叶
片为试材 ,利用高效液相色谱检测手段 ,对其鼠尾草
酸和鼠尾草酚含量的动态变化规律进行跟踪研究 ,
以期确定迷迭香最佳采收期 ,并进一步为迷迭香的
综合开发利用提供一定的参考依据。
1　材料和方法
1.1　材料
迷迭香样品:试验用迷迭香叶片采自河南禹州
市森源本草天然产物有限公司药用植物 GAP生产
基地 ,采收后自然阴干 ,经测定含水率为 9.5%,经
郑州牧专生药学实验室赵建平教授鉴定 ,确认为迷
迭香属植物迷迭香的叶片。
药品:鼠尾草酸和鼠尾草酚标准品购于中国药
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2010年第 10期DOI :10.15933/j.cnki.1004-3268.2010.10.022
品生物制品检定所;乙腈为色谱纯 ,购于美国 Sigma-
Aldrich公司;2次蒸馏水 ,自制;其余试剂均为分析
纯 。
仪器:Mli-Q超纯水系统(美国 Mlipore科技有
限公司), FA-1104型电子分析天平(上海精胜科学
仪器有限公司), LD-06A型高速中药粉碎机 (上海
科达医学仪器设备有限公司 ), 高效液相色谱仪
(1525控制泵 、 2487紫外检测器 、美国 Waters公
司), KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声
仪器有限公司),循环水式多用真空泵(郑州长城科
工贸有限公司)。所用的玻璃器皿等用具均经 10%
硝酸浸泡 48h后 ,用超纯水洗净。
1.2　方法
1.2.1　色谱条件　色谱柱:DiamonsilR C18(200mm×
4.6mm, 5μm)。流动相:乙腈 -水(60∶40)。紫外
检测器测定鼠尾草酚和鼠尾草酸检测波长为
230nm。采用等度洗脱 ,流速为 0.8mL/min。进样
量 10μL。柱温:30℃。灵敏度:0.5AUFS[ 8-12] 。在
该条件下 ,鼠尾草酸在 25min左右出峰 ,鼠尾草酚
在 16min左右出峰 ,且峰形良好 。
1.2.2　标准溶液的制备　用电子天平精密称取
105℃干燥 4h后至质量恒定的的鼠尾草酸 、鼠尾草
酚标准品 10.0mg、5.0mg, 置于 50mL棕色容量瓶
中 ,用 70%的乙醇溶解并稀释至刻度定容 ,摇匀 ,其
质量浓度分别为 200mg/L、 100mg/L, 作为标准溶
液 。置于冰箱中避光保存 ,临用时用流动相稀释至
不同的质量浓度 。
1.2.3　供试品溶液的制备　选取迷迭香植物的叶
片筛选去除沙石等机械杂质后进行切断处理 (约
1cm),采用水上蒸馏法蒸出挥发油 ,自然阴干后粉
碎 ,并过孔径为 0.85mm的药筛 。精密称取样品
1.000g(精确至 0.001g)置于锥形瓶中 , 按料液比
1∶50(m/V)加入 95%的乙醇 50mL, 超声提取
60min,用乙醇定容至 50mL,用 0.45μm的微孔滤
膜过滤 ,取滤液作为供试品溶液。根据含量高低稀
释成上机液 ,按上述色谱条件进样分析[ 13] 。每项试
验平行 3次 。
1.2.4　测定方法的验证
1.2.4.1　线性关系的确定　分别精密量取制备好
的 2种标准溶液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0mL置
于 10mL棕色容量瓶中 , 用流动相稀释定容成
10mL,配制成系列质量浓度的标准溶液 ,各进样
10μL进行分析测定 ,记录色谱图 ,以峰面积 A为纵
坐标 ,质量浓度 C(g/L)为横坐标 ,分别绘制标准
曲线 [ 14] 。
1.2.4.2　精密度试验　在上述色谱条件下 ,分别精
密吸取质量浓度为 25、50、100mg/L的标准溶液加
入空白样中 ,每个处理重复进样 6次 ,测定其峰面
积[ 15] ,计算 RSD。
1.2.4.3　稳定性试验　分别精密吸取同一供试品
溶液 10μL,每 6h左右进样 1次 ,分别在 0、 6、12、
24、48h进行测定 、记录鼠尾草酸和鼠尾草酚的峰面
积 ,以峰面积计算 RSD。
1.2.4.4　重复性试验　精密称取同一批号样品粉
末 0.500g(精确至 0.001g),共 6份 ,进样 10μL,按
外标法计算 RSD。
1.2.4.5　回收率试验　精密称取已知质量分数的
鼠尾草酸(2.59%)和鼠尾草酚(0.97%)的迷迭香
粉末 0.100g(精确至 0.001g)作为空白样品 ,分别
置于 50mL量瓶中 ,每 3份为 1组 ,分别准确加入鼠
尾草酚和鼠尾草酸标准混合贮备液 10.0、 20.0、
30.0mL,取 10μL注入液相色谱仪 ,测定计算 3种
浓度(低 、中 、高)的加样回收率 ,平行测定 6次[ 16] 。
1.2.5　样品中鼠尾草酸 、鼠尾草酚的含量测定　精
密称取不同采收日期 (每月 1日)迷迭香叶片样品
20.000g(精确至 0.001g), 精密吸取各样品溶液
10μL,分别进样 ,注入液相色谱仪进行测定 ,每项试
验平行 3次 ,按外标法定量 ,以峰面积取平均值 ,代
入回归方程 ,计算样品中鼠尾草酸和鼠尾草酚的
含量 。
2　结果与分析
2.1　色谱条件的优化
精密量取适量标准溶液和供试品溶液用流动相
溶解后 ,在 190 ～ 500nm进行高速紫外扫描 。结果
表明 , 标准溶液和供试品溶液的鼠尾草酸在
230nm、280nm、331nm各有 1个吸收峰 ,鼠尾草酚
在 230nm、285nm、329nm各有 1个吸收峰。其中
230nm是最大吸收波长 ,灵敏度高 ,重现性好;同时
在 230nm处样品谱图中杂质干扰较少 ,因此选用
230nm作为检测波长。分别采用甲醇 -水 、乙腈 -
水 、乙腈 -甲醇 3种体系来实现分离 ,结果表明 ,选
用乙腈做流动相 ,柱效高 ,基线平稳 ,峰形 、分离效果
最好 。根据乙腈 -水不同配比下样品中鼠尾草酸及
鼠尾草酚的峰形及与其他杂峰的分离度 ,确定乙腈
和水比例为 60∶40,调节 pH为 4.5 ～ 5.0。
·89·
河南农业科学
2.2　测定方法的验证结果
2.2.1　线性关系的考察结果　根据色谱结果 ,分别
绘制标准曲线(图 1、2),并对峰面积进行回归 ,计算
线性回归方程 。鼠尾草酸在 0.0087 ～ 0.0558g/L
呈良好的线性关系 , 其线性回归方程及相关系数
(R2)分别为:y=2 685.6x-4.9472, R2 =0.999 8
(n=6);鼠尾草酚在 0.0182 ～ 0.116 2g/L呈良好的
线性关系 , 其线性回归方程及相关系数分别为:
y=3912.7x-7.4435 , R2 =0.999 4(n=6)。在上述
色谱条件下 ,以信噪比 S/N=3计算检出限 ,表明峰
面积与样品质量浓度呈良好的线性关系 ,线性范围
宽 ,检出限低。测得鼠尾草酸的最小检出限为
0.058mg/L,鼠尾草酚的最小检出限为 0.87mg/L。
图 1　鼠尾草酸的标准曲线
图 2　鼠尾草酚的标准曲线
2.2.2　精密度试验结果 　鼠尾草酸 RSD值在
0.61% ～ 1.02%, 鼠尾草酚 RSD值在 0.50% ～
1.21%,表明分析结果的精密度良好。
2.2.3　稳定性试验结果　鼠尾草酸和鼠尾草酚
RSD分别为 2.18%和 0.97%(n=5),说明供试品
溶液在室温条件下放置 30h比较稳定。
2.2.4　重复性试验结果　鼠尾草酸和鼠尾草酚平均
质量分数分别为 2.59%和 0.72%, RSD分别为
1.08%和 0.95%(n=6),说明该方法的重复性良好 。
2.2.5　回收率试验结果　本方法鼠尾草酸回收率
在 98.0% ～ 100.8%,平均回收率为 99.5%(n=6);
鼠尾草酚回收率在 97.0% ～ 100.2%,平均回收率
为 98.8%(n=6)。说明利用此方法测定迷迭香中
的鼠尾草酸和鼠尾草酚是可行的 ,其所得数据是可
靠的 ,该方法定量准确 ,重复性好 ,符合测试要求 。
表 1　加样回收率试验结果
成分 样品中含量 /mg
加标量 /
mg
检出量 /
mg
回收率 /
%
平均回
收率 /%
鼠尾草酸 2.59 2.00 4.55 98.0 99.5
2.59 4.00 6.62 100.8
2.59 6.00 8.57 99.7
鼠尾草酚 0.97 2.00 2.91 97.0 98.8
0.97 4.00 4.94 99.3
2.3　样品测定结果
计算鼠尾草酸和鼠尾草酚的质量分数 ,变化曲
线见图 3。结果表明 ,迷迭香中鼠尾草酸和鼠尾草
酚的含量有一定的变化规律 。 1月份鼠尾草酸含量
为 1.98%,然后逐渐上升 ,到 6月份升至 3.05%,然
后又逐渐开始下降 ,到 9月份又开始升高 , 10月份
突然升至最高 3.34%,然后又开始降低 ,所以鼠尾
草酸含量在 10月份最高 ,其次为 6月份;鼠尾草酚
1月份含量为 0.54%, 2月份为 0.51%,然后逐渐开
始上升 ,到 6月份升至 0.92%,然后又逐渐开始下
降 ,到 9月份又开始升高 , 10月份突然升至最高
1.02%,然后又开始降低 ,所以鼠尾草酸含量在 10
月份最高 ,其次为 6月份 。
采收时间为每月 1日
图 3　不同采收期迷迭香中的鼠尾草酸和
鼠尾草酚含量变化
3　小结
本研究对不同采收期迷迭香叶片处理后所得样
品采用超声提取的方法 ,以迷迭香中鼠尾草酸和鼠
尾草酚为指标 ,采用高效液相色谱法对其鼠尾草酸
和鼠尾草酚的含量进行跟踪研究 ,其色谱条件是在
参考有关文献的基础上 ,经过优化 、筛选而确定的 ,
选用 230nm作为含量测定的检测 (下转第 96页)
·90·
2010年第 10期
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(上接第 90页)　波长;选用乙腈做流动相 ,乙腈和
水比例为 60∶40, pH值 4.5 ～ 5.0。通过线性关系
的确定 、精密度试验 、稳定性试验 、重复性试验和加
样回收率试验对测定方法进行了验证 。结果表明 ,
该方法灵敏 、定量准确 ,重现性好 ,且分析时间短 ,操
作简便 ,符合测试要求 ,适合生产企业及质控部门作
为质量标准的定量分析方法。
本试验结果表明 ,迷迭香中鼠尾草酸和鼠尾草酚
的含量有一定的变化规律 ,鼠尾草酸和鼠尾草酚的含
量都是在 10月份最高 ,其次为 6月份。因此 ,确定 10
月份为迷迭香的最佳采收期 ,其次为 6月份 。
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