全 文 ：甘西鼠尾草脂溶性成分提取工艺的研究
崔　颖 , 　薛　明 , 　史彦斌 , 　胡振英 , 　罗永江 , 　张　彬
(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部新兽药工程重点开放实验室 ,甘肃 兰州 ,730050)
收稿日期:2002-04-18
基金项目:国家“九五”攻关项目子专题(96-005-02-04-05)
作者简介:崔　颖(1956～ ),河南渑池县人 ,副研究员 ,主要从事新兽药的研究。
关键词:甘西鼠尾草;隐丹参酮;丹参酮ⅡA;正交试验;高效液相色谱法
摘要:目的:研究甘西鼠尾草脂溶性成分提取工艺的最佳条件。方法:采用 L9(34)正交试验法 ,以甘西鼠尾草中主要抗菌
活性成分隐丹参酮和丹参酮ⅡA 的含量之和为指标 ,用高效液相色谱法测定。结果:乙醇浓度和乙醇用量对提取效果有
非常显著性和显著性影响。结论:最佳工艺条件为加 8倍量 95%的乙醇浸泡 8h 后开始渗漉 , 流速 10滴/ min。
中图分类号:R284.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2003)01-0022-02
Study on extraction for lipophilic parts of Rhizoma salvia przewalskii maxim
GU I Ying , 　XUE Ming , 　SHI Yan-bin , 　HU Zhen-ying , 　LUO Yong-jiang , 　ZHANG Bin
(Lanzhou Insti tute of Animal an d Veterinary Pharmaceu ticals , Chinese Academy of Agr icu lture Sciences , Key Laboratory of New Anima l
Medicine Project , Minist ry of Agriculture , P.R.C.Gansu Lanzhou , 730050 , Ch ina)
Key words:Salvia przewalsk ii Maxim ;cryptotanshinone;tanshinone ⅡA;orthogonal design;HPLC
Abstract:Objective:To study the optimum ex traction conditions for lipophilic parts of rhizome of Salvia prze-
walski i Maxim.Methods:The orthogonal design L9(34)was used w ith the sum of content of cryptotanshinone
and tanshinone ⅡA as markers and determined by HPLC.Results:The significant ef fects of ethanol concentra-
tion and amount on the ext ract ion yield w ere discovered.Conclusion:The opt imum technical condi tion:adding
8 times amount of 95%ethanol , then begin to percolate af ter having been soaked for 8h , percolation speed is 10
drop/min.
　　甘西鼠尾草(Salvia przewalski i Maxim.)与中
药丹参是同属植物。其干燥根茎中的脂溶性成分总
丹参酮具有良好的抗菌活性[ 1 , 2] ,和明显的抗炎作
用[ 3] 。隐丹参酮(CT)和丹参酮 ⅡA(TS)是总丹参
酮的两个具有代表性的活性单体化合物 。本试验采
用正交试验法 ,以 CT 和 TS 含量之和为指标 ,用高
效液相色谱法进行含量测定 ,用方差分析方法对影
响渗漉提取的主要因素进行分析 ,从而优选总丹参
酮的提取条件。
1　材料与方法
1.1　仪器与药品
美国 Waters高效液相色谱仪系列 , YWG-C18
H37(10μm)4.0mm ×150mm 色谱柱;510 型泵;480
型紫外检测器;U6K 型进样阀;AST 型数据处理仪;
3800型打印机。甘西鼠尾草产自甘肃省临夏地区 。
标准对照品隐丹参酮和丹参酮 ⅡA 由本实验室从甘
西鼠尾草的根中分离纯化制得 ,经熔点 、TLC 及光
谱数据证明为纯品[ 4] ,纯度大于 99%。内标准品二
苄基为试验试剂 ,甲醇为色谱纯 ,重蒸馏水 ,其余试
剂为分析纯 。
1.2　测定方法
1.2.1　色谱条件　流动相为甲醇∶水(85∶15),流速
1mL·min-1 ,柱温35°C ,检测波长 254nm 。 　
1.2.2　回归方程　精密称取对照品 CT 、TS ,用流
动相配成 0.02 , 0.04 , 0.06 , 0.08 , 0.10 , 0.15mg·
mL
-1的标准溶液 , 精确加入等量的内标液 , 涡旋
1min ,取 5μL 进样 。反相 HPLC 检测峰面积 ,以样
品峰与内标峰的面积比为纵坐标 ,浓度为横坐标 ,进
行线性回归 , 隐丹参酮方程为:Y =25.9167X +
0.0102 , r =0.9981;丹参酮 ⅡA 方程为:Y =
30.2868X -0.1454 , r=0.9992。
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2003 年 1 月
第 25 卷　第 1 期
中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
Jan., 2003
Vol.25　No.1
1.2.3　精密度测定　各选 3 个浓度的标准溶液进
行日内 、日间精密度测定(n=5),结果日内精密度变
异系数小于 0.9%, 日间精密度变异系数小于
1.1%。
1.3　提取工艺的正交试验方法
1.3.1　试验因素与水平　见表 1。
表 1　 因素水平表
因素
水平
A 乙醇浓度
(%)
B渗漉流速
(滴/min)
C乙醇用量
(倍)
D浸泡时间
(h)
1 95 4 4 8
2 85 7 6 16
3 75 10 8 24
1.3.2　试验方法　每份试验药材 100g ,粒度范围
一致 ,按 L9(34)正交表安排试验 。将接收到的各份
渗漉液浓缩或稀释至 300mL ,精确量取适量 ,精确
加入等量的内标和流动相 ,涡旋 1min ,取 5μL 进样 ,
HPLC检测 。以隐丹参酮与丹参酮 ⅡA 含量之和为
考察指标。
2　结果分析
正交实验结果见表 2 ,方差分析见表 3。
　　实验结果表明以 A1B2C3D3 为最佳渗漉提取工
艺 。CT 与 TS含量之和随乙醇浓度的增高 、用量的
加大而增加。B 、D两因素无显著性差异 ,故应采用
生产周期短的工艺 。因此实际生产工艺应选
A1B3C3D1 为宜。
表 2　 L9(34)正交表及结果
试验号 A B C D 隐丹参酮(%) 丹参酮ⅡA(%) 总量(%)
1 1 1 1 1 0.0706 0.0838 0.154
2 1 2 2 2 0.0757 0.120 0.196
3 1 3 3 3 0.0749 0.133 0.208
4 2 1 2 3 0.0747 0.102 0.177
5 2 2 3 1 0.0796 0.113 0.193
6 2 3 1 2 0.0689 0.0600 0.129
7 3 1 3 2 0.0795 0.0504 0.130
8 3 2 1 3 0.0644 0.0384 0.103
9 3 3 2 1 0.0670 0.0505 0.118
K1 0.558 0.461 0.386 0.465
K2 0.499 0.492 0.491 0.455
K3 0.351 0.455 0.53 0.488
R 0.0690 0.0123 0.0483 0.011
表 3　 方差分析表
方差来源 SS DF MS F P 值
A 0.0019 2 0.00095 31.7 P<0.01(＊＊)
B 0.00006 2 0.00003 1.0
C 0.0009 2 0.00045 15.0 P<0.05(＊)
D 0.00006 2 0.00003 1.0
误差 0.00012 2 0.00006
3　讨论
3.1　根据总丹参酮的药理作用 ,我们选取其中抗菌
作用强的隐丹参酮和抗炎作用强的丹参酮ⅡA 的含
量之和作为优选正交方案的指标。
3.2　市售甘西鼠尾草质量差异较大 ,隐丹参酮和丹
参酮ⅡA 的含量也有差异 。但本试验所用药材为一
次性购入 ,具有可比性 。
参考文献:
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的体外抑制作用[ J] .中兽医学杂志 , 2001 ,(2):10.
[ 2] 　崔　颖 ,薛　明 ,罗永江 ,等.消炎醌的药理研究及在兽医临床
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[ 3] 　史彦斌 ,薛　明 ,罗永江,等.消炎醌的抗炎实验研究[ J] .中兽
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第 25 卷　第 1 期
中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
Jan., 2003
Vol.25　No.1