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RP-HPLC测定甘西鼠尾草中丹参酮Ⅱ_A的含量



全 文 :北方药学 2011年第 8卷第 2期
·药品质量及检验·
RP-HPLC 测定甘西鼠尾草中丹参酮ⅡA的含量
翁裕馨 * 刘占厚 王津慧 陈湘宏(青海大学医学院 西宁 810001)
摘要:目的:本文采用《中国药典》(2005版)的高效液相色谱法,以丹参酮ⅡA的含量为指标,对不同生长年限、不同药用部位的
甘西鼠尾草丹参酮ⅡA的含量进行了比较。方法:Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),甲醇:水(75∶25),检测波长
270nm,流速 1.0ml/min,进样量 20μl(定量环控制),室温,理论塔板数按丹参酮ⅡA峰计算不低于 2000。结果:丹参酮ⅡA进样量
在 0.05~3.2μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。回归方程为:y=26.755x+16.714,r=0.9987,平均回收率为 99.0%。栽培品种甘
西鼠尾草丹参酮ⅡA含量为 1年生 0.291%,2年生 0.553%,3年生 0.759%,野生品种为 0.489%。药店购买丹参为 0.573%。结论:
在青藏高原,野生及人工种植品种的甘西鼠尾草中丹参酮ⅡA含量均符合《中国药典》(2005版)规定。甘西鼠尾草茎、叶中丹参
酮含量明显低于根部丹参酮的含量,不宜作为药材使用。
关键词:甘西鼠尾草 丹参酮ⅡA 含量测定
中图分类号:R927.2 文献标识码:B 文章编号:1672-8351(2011)02-0001-02
Salvia Przewalskii tanshinone IIA content detected by RP - HPLC
Weng Yuxin Liu Zhanhou Chen Xianghong Wang Jinhui(Qinghai University Medical College,xining,qinghai,810001,China)
Abstract:Objective:This article adopts China Pharmacopoeia(Edition 2005),high performance liquid chromatography with tanshi-
none IIA content as the index,in different growth fixed number of year,different vantage medicinal parts of Salvia przewalskii tanshi-
none IIA content are compared.Methods:Zorbax SB - Agilent C18 column chromatography (250mm×4.6 mm,5um),methanol: water
(75∶25),detection wavelength 270nm,velocity 1.0 ml/min,incoming sample amount 20ul(quantitative ring control),at room tempera-
ture,according to the theory of tanshinone IIA tower plate number,No less than 2,000. The results:The incoming sample amount of
tanshinone IIA in 0.05~3.2 ug range and peak area is good linear relationship.Regression equation for: y=26.755 x+16.714,r= 0.9987,
The average recovery was 99.0%. Cultivated varieties west sage tanshinone IIA content was 0.291% for annual ,0.553% for biennial,
0.759% for three years,wild germplasm was 0.489%. 0.573% for purchasing salvia miltiorrhiza file.Conclusion:In the qinghai-tibet
plateau,wild and cultivated varieties of tanshinone IIA content in western sage all accord with the regulation of China pharmacopoeia
(Edition 2005).The content of tanshinone in the stems and leaves of Salvia przewalskii is obviously lower than the roots,unfavorable
to be used as medicine.
Key words:Salvia przewalskii tanshinone IIA content determination
甘西鼠尾草(Salvia Przewalskii Maxim),又名甘肃丹参。甘
西鼠尾草也是著名的藏药之一(藏文译音:吉子思保)[1],甘西
鼠尾草中的脂溶性成分以丹参酮类化合物为代表,具有改善
血液循环、抗菌消炎等基本作用,同时有免疫调节、激素样、
抗氧化等多种作用[2]。《中国药典》(2005版)规定丹参以丹参
酮ⅡA的含量作为质量标准之一,丹参酮ⅡA(C19H18O3)含量不
得少于 0.20%。
1 样品、仪器与试剂
1.1样品
药店购买丹参、贵德多年生野生品种、贵德一年生、二年
生、三年生栽培品种。甘西鼠尾草经青海大学医学院魏全嘉教
授分别鉴定为丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)的根和甘西鼠尾
草(Salvia Przewalskii Maxim)的根。
1.2仪器
Agilent 1200高效液相色谱仪,G1311A(四元泵),G1322A
(在线脱气机),G1314B(VWD 检测器),G1328B(手动进样
器),GM-0.33Ⅱ隔膜真空泵,ChemStation 色谱工作站,KQ-
400DB 型数控超声波清洗器,BS224S 电子天平,AKRY-UP-
1808艾柯超纯水机,微孔滤膜 W型和 F型,欧若克空气排代
式精密移液器 P200型和 P1000型。
1.3试剂
配制流动相用甲醇(2007110108)为色谱级纯,水为自制
二次蒸馏水,提取用甲醇(090716)为分析纯。丹参酮ⅡA(购于
中国药品生物制品检定所,批号:110766-200417)。
2 方 法
按照《中国药典》(2005版)法[3]。
2.1色谱条件
Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),甲
醇:水(75∶25),检测波长 270nm,流速 1.0ml/min,进样量 20μl
(定量环控制),室温,理论塔板数按丹参酮ⅡA峰计算不低于
2000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取丹参酮ⅡA对照品 5mg,置 50ml棕色容量瓶中,
加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀作为丹参酮ⅡA对照品储备溶
液;精密吸取 4ml置 25ml棕色容量瓶中,加甲醇溶解并稀释
至刻度,摇匀作为丹参酮ⅡA对照品溶液。
1
北方药学 2011年第 8卷第 2期
2.3供试品溶液的制备
取干燥粉碎过三号筛的甘西鼠尾草粉末 0.5g,精密称定,
置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇 50ml,塞紧,称定重量,超声
提取 1h,放冷后,称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤
过,取续滤液,经微孔滤膜 F型(0.45μm)滤过,作为丹参酮ⅡA
供试品溶液。
2.4线性范围考察
精密吸取丹参酮ⅡA对照品储备溶液 0.25,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0ml
于 10ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,依次吸取丹参酮ⅡA
对照品系列溶液 20μl进样,按 2.1项下色谱条件进行测定。以
丹参酮ⅡA的峰面积为纵坐标,以丹参酮ⅡA的浓度为横坐标,
进行回归分析。计算回归方程为:y=26.755x+16.714,r=0.9987。
丹参酮ⅡA进样量在 0.05~3.2μg范围内与峰面积呈良好的线
性关系。
2.5精密度试验
精密吸取丹参酮ⅡA对照品溶液进行测定,按 2.1项下色
谱条件连续进样 6次,每次 20μl,测定峰面积,计算丹参酮ⅡA
峰面积的 RSD为 1.63%,仪器的精密度良好。
2.6稳定性试验
取贵德两年生栽培品种甘西鼠尾草按 2.3项下供试品溶
液配制方法配制成丹参酮ⅡA供试品溶液,常温下取供试品溶
液分别在 0、2、4、6、8、10h进样,按 2.1项下色谱条件进行测
定,计算峰面积的平均值为 9388.57,RSD=1.60%,说明样品至
少在 10h内稳定。
2.7重复性试验
取贵德两年生栽培品种甘西鼠尾草按 2.3项下供试品溶
液配制方法平行配制 5份丹参酮ⅡA供试品溶液,按 2.1项下
色谱条件进行测定,计算峰面积 RSD=0.80%,重复性良好。
2.8回收率试验
精密称取已知含量供试品 6份(丹参酮ⅡA含量为 0.553%),
精密加入丹参酮ⅡA对照品适量,按含量测定法制备,按 2.1项
下色谱条件进行测定含量,计算平均回收率为 99.00%,RSD
为 1.62%(n=6),方法的准确度较好,见表 1。
表1 丹参酮ⅡA加样回收率试验结果
2.9供试品含量测定
精密称取干燥粉碎过三号筛的甘西鼠尾草粉末 0.5g,按
2.3项下供试品溶液配制方法制成供试品溶液,分别精密吸取
供试品溶液和对照品溶液各 20μl,在 2.1项下色谱条件下进
样,用外标一点法,计算样品中丹参酮ⅡA的含量,色谱图见图
1,图 2。
图1 丹参酮ⅡA对照品色谱图 图2 样品色谱图
3 实验结果
3.1甘西鼠尾草中丹参酮ⅡA含量测定结果见表 2。
表2 甘西鼠尾草丹参酮ⅡA含量测定结果
3.2不同部位甘西鼠尾草中丹参酮ⅡA含量测定结果见表 4。
表4 不同部位甘西鼠尾草丹参酮ⅡA含量测定结果
4 小结与讨论
4.1供试品溶液的含量测定是根据《中国药典》(2005版)丹参
中丹参酮ⅡA的含量测定方法进行的,其它各项分析效能指标
和参数均符合 HPLC分析的基本要求。
4.2丹参酮ⅡA是甘西鼠尾草所含的主要成分,其含量高低直
接影响药材质量。本实验结果表明,在青藏高原,野生及人工
种植品种的甘西鼠尾草中丹参酮ⅡA含量均符合《中国药典》
(2005版)规定。
4.3甘西鼠尾草茎、叶中丹参酮含量明显低于根部丹参酮的含
量,因此,不宜作为药材使用。
4.4三年生栽培品种甘西鼠尾草根中丹参酮ⅡA含量最高,达
0.759%。二年生栽培品种甘西鼠尾草根中丹参酮ⅡA含量达
0.553%,虽不如三年生栽培品种,但已超出《中国药典》(2005
版)规定丹参中丹参酮ⅡA含量 0.20%的范围。
参考文献
[1]中国科学院西北高原生物研究所.藏药志[M].西宁,青海人民
出版社,1991.92-93.
[2]翁裕馨,李成义.中藏药材甘西鼠尾草的研究进展[J].中国民
族民间医药,2010,19(128):19-20.
[3]中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国药典
(2005版)一部[S].北京;化学工业出版社,2005,52-53.
*翁裕馨(1978年—),女,汉族,河南籍,硕士,青海大学
医学院药学系讲师,从事中藏药的化学成分和质量研究工作。
样品量
(g)
样品中丹参酮
ⅡA含量(mg)
丹参酮ⅡA
加入量(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
0.4008 2.216 0.40 2.6071 97.78
99.00 1.62
0.4002 2.214 0.40 2.6212 101.8
0.4016 2.220 0.40 2.6090 97.25
0.4004 2.214 0.40 2.6104 99.10
0.4000 2.212 0.40 2.6061 98.52
0.4004 2.214 0.40 2.6122 99.56
样品名称 丹参酮ⅡA含量(%)
贵德多年生野生品种 0.489
贵德一年生栽培品种 0.291
贵德二年生栽培品种 0.553
贵德三年生栽培品种 0.759
丹参药材 0.330
样品名称 丹参酮ⅡA含量(%)
贵德多年生野生品种(根) 0.489
贵德多年生野生品种(茎) 0.103
贵德多年生野生品种(叶) 0.034
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