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大孔树脂分离纯化苦苣菜黄酮的工艺研究



全 文 :基金项目:北京市农产品加工与贮藏工程重点建设学科项目(编号:
PXM2009_014207078172)
作者简介:安卓(1986-),男,硕士。E-mail:anzhuo1986@yahoo.cn
通讯作者:贾昌喜
收稿日期:2012-02-11
第28卷第3期
2 0 1 2年5月
OOD&MACHINERY
食 品 与 机 械
Vol.28,No.3
May.2 0 1 2
10.3969/j.issn.1003-5788.2012.03.034
大孔树脂分离纯化苦苣菜黄酮的工艺研究
Study on separation and purification of Sonchus oleraceus Ltotal flavonoids
by AB-8 macroporous resin with response surface analysis
安 卓
AN Zhuo
 
贾昌喜
JIA Chang-xi
(北京农学院食品科学学院,北京 102206)
(College of Food Scienc,Beijing Agricultural University,Beijing102206,China)
摘要:研究大孔树脂纯化苦苣菜黄酮的条件。利用静态吸附
方法筛选纯化苦苣菜黄酮的最适大孔树脂,利用动态吸附方
法研究最适大孔树脂纯化苦苣菜黄酮的条件。结果表明,大
孔树脂AB-8对吸附苦苣菜黄酮的效果最好,最佳纯化条件:
上样液浓度为3.73%,上样液速率为3.6mL/min,上样液
pH 5.18;用78.20%的乙醇溶液、以120mL 2.88mL/min
的速率洗脱。利用大孔吸附树脂 AB-8在上述最佳条件下,
吸附率可达84.32%;解吸率91.73%。
关键词:大孔树脂;静态吸附;动态吸附;苦苣菜;黄酮
Abstract:To study the purification conditions with macroporous resin
in Sonchus culture.Using the static adsorption method for screening
optimum macroporous resin to be purification of Sonchus oleraceus
flavones,using dynamic adsorption method to study optimum macro-
porous resin conditions of purification of Sonchus oleraceus flavonoid.
Results the macroporous resin adsorption of AB-8 on Sonchus
flavone was the best,the best purification conditions were:3.73%
sample concentration,sample liquid rate of 3.6mL/min,sample
liquid pH was 5.18;by 78.20%ethanol solution,with 120mL(col-
umn volume)2.88mL/min rate elution.Using macroporous ad-
sorption resin AB-8,under the optimum conditions,the adsorption
rate is up to 84.32%;desorption rate 91.73%.
Keywords:macroporous resin;static adsorption;dynamic adsorption;
celery;flavone
菊科苦苣属中,苦苣 (sonchus oleraceus L.)属于1年至
2年生的草本植物,或称做苦荬菜、苣荬菜[1]。苦苣菜中具有
芹菜素、木犀草素、苷类等黄酮类物质[2],具有优良的药用价
值以及食用价值,而且分布广泛[3]。苦苣菜黄酮类物质能显
著改善试验性肝损伤,从其提取的酸性物质能显著对抗肿
瘤[4,5]。大孔树脂(macroporous resin)是一种不溶于酸、碱
及各种有机溶剂的有机高分子聚合物,具有吸附容量大、吸
附速度快、解吸条件温和、易于再生、使用寿命长等优点[6],
是近十几年发展起来的一类有机高分子聚合物吸附剂,已广
泛应用于各种植物和中草药黄酮类化合物的分离纯化过
程[7-9],树脂本身的性质不同程度地影响着分离纯化效
果[10-12]。本试验旨在寻找一种适合苦苣菜黄酮纯化的大孔
吸附树脂,并研究出最佳纯化条件,为制备高纯度的苦苣菜
黄酮提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
苦苣菜:2011年8月采于北京庞各庄,于120℃干燥至
恒重后,粉碎过40目筛,得苦苣干粉,密封包装后置于干燥
皿中避光保存;
芦丁标准试剂:分析纯,上海试剂二厂;
无水乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠:分析纯,北京化
学试剂公司;
大孔 树 脂:AB-8,D-101,HPD-100,LX-60,LSA-21,
NKA,XDA-7,XAD-16,北京九州同业生物科技有限公司。
紫外-可见分光光度计:UV 765CRT,上海精研有限公司;
数控超声波清洗器:KQ-700E型,昆山市超声仪器有限
公司;
中草药粉碎机:KS-80,天津泰斯特仪器有限公司;
恒温水浴锅:R-201,上海申生科技有限公司;
电热鼓风干燥箱:DHG-9076A,天津泰斯特仪器有限公司;
精密pH 计:PHS-3C型,上海第三分析仪器厂;
电子天平:BT125D,赛多利斯北京公司;
台式低速离心机:L530,湖南赫西仪器装备有限公司;
台式冷冻恒温振荡器:THZ-C-1,太仓市实验设备厂;
恒流泵:HL-Z,上海沪西分析仪器厂有限公司;
221
自动部分收集器:BSZ-100,上海沪西分析仪器厂有限公司。
1.2 试验方法
1.2.1 黄酮粗提液的制备 称取4.00g苦苣菜干粉,加入
40mL乙醇溶液充分溶解,按照乙醇体积分数50%、提取时
间3.33h、提取温度84℃、料液比1∶50(m∶V)的条件,采
用乙醇回流提取法提取,收集提取液,抽滤,得到苦苣菜黄酮
粗提取液。
1.2.2 标准曲线的制作 根据文献[13]制作标准曲线,以
浓度C(mg/mL)为横坐标,吸光度A为纵坐标,得回归方程
A=1.180 1C+0.009 4,R2 =0.999 9。
1.2.3 测定样品中黄酮浓度 精密称取定量提取液,按
1.2.2节操作,在波长510nm 处测定其吸光度,由回归方程
计算样品中黄酮浓度(mg/mL)。
1.2.4 大孔树脂的预处理 首先用去离子水冲洗大孔树脂
以除去其杂质,再将树脂用95%乙醇充分浸泡24h,使其充
分溶胀,后装入玻璃层析柱,以一定流速使用无水乙醇洗涤
大孔树脂,直到完全去除流出液中醇溶杂质,再以浓度为4%
的稀盐酸浸泡树脂,以去离子水洗涤树脂使其pH 值为中
性,最后以浓度为2%的氢氧化钠浸泡树脂,以去离子水洗涤
树脂使其pH值为中性。
1.2.5 树脂的静态吸附和解吸率的测定 精确称取已处理
好的8种树脂 HPD-100、D101、AB-8、NKA、LX-60、XDA-7、
LSA-21、XAD-16各1g(干质量),分别置于8个50mL具塞
磨口锥形瓶中,各加入30mL苦苣菜黄酮提取液,密封,在
25℃恒温振荡器中震荡吸附24h后,测定吸附前后黄酮浓
度的变化,按照式(1)和式(2)计算各树脂的吸附容量和吸附
率。测定完毕,用80%乙醇溶液进行洗脱,测定解吸附液中
黄酮类物质的浓度,按式(3)计算解吸附率,确定具有良好纯
化性能的树脂。
CA = C0-C( )1 ×Vm
(1)
R1 =C0-C1C0 ×
100% (2)
R2 = C2×Vm×CA×
100% (3)
式中:
CA——— 吸附容量,mg/g;
R1——— 吸附率,%;
R2——— 解吸率,%;
C0——— 起始浓度,mg/mL;
C1——— 平衡浓度,mg/mL;
C2——— 解吸液浓度,mg/mL;
V——— 吸附液体积,mL;
m——— 树脂干质量,g。
1.3 吸附与解吸附条件的优化
用去离子水浸泡树脂 AB-8,使其充分溶胀,并抽真空
1h。采用湿法装柱,将苦苣菜提取液注入树脂柱中,待样品
溶液全部通过树脂柱后,用去离子水冲洗至流出液无色,以
一定浓度的乙醇进行洗脱,收集乙醇洗脱液,经真空干燥后,
在510nm处测定黄酮浓度。根据本实验室在吸附与解吸附
过程中所确定的单因素试验结果,最终,在吸附过程中选取
上样液浓度、上样液速率、上样液pH 值3个因素(见表1);
在解吸附过程中,选取乙醇洗脱浓度、解吸流速及乙醇洗脱
体积3个因素(见表2),依据 Design-Expert 7.0软件采用
Box-Behnken Design方法确定其最优工艺。
表1 大孔树脂吸附效果响应曲面因素与水平表
Table 1 Factors and levels of RSM
水平因素
编码
X1上样液浓度/
(mg·mL-1)
X2上样液速率/
(mL·min-1)
X3上样液
pH值
-1  2  1  4
0  3  3  5
1  4  5  6
表2 大孔树脂解吸附效果响应曲面因素与水平表
Table 2 Factors and levels of RSM
水平因素
编码
A乙醇洗脱
浓度/%
B解吸流速/
(mL·min-1)
C乙醇洗脱
体积/mL
-1  70  2  120
0  80  3  160
1  90  4  200
2 结果与分析
2.1 树脂的静态平衡吸附和解吸特性
由表3可知,在8种树脂中,AB-8树脂的单位吸附容量
值为最高,达到了23.13mg/g,其吸附率和解吸率也为最
高,分别达到了74.85%和82.36%,与其他8种树脂相比,
树脂AB-8最适宜分离纯化苦苣菜黄酮,因此选用其来分离
苦苣菜黄酮。
表3 不同树脂对苦苣菜黄酮吸附容量、吸附率及解吸率
Table 3 Construction Parameter of Resins,Adsorption
and Desorption Properties on Flavonoids
树脂型号 吸附容量/(mg·g-1) 吸附率/% 解吸率/%
AB-8  23.13  74.85  82.36
D101  18.34  60.24  71.55
HPD-100  17.68  57.63  68.15
LX-60  18.87  64.30  72.34
LSA-21  16.98  53.77  79.36
NKA  16.53  52.64  63.87
XDA-7  17.26  55.89  78.65
XAD-16  18.74  62.86  79.45
321
提取与活性   2012年第3期
2.2 苦苣菜黄酮分离纯化工艺的优化
在吸附过程中,上样液pH值、上样液浓度、上样液流速等
因素都会影响大孔树脂对黄酮的吸附效果。在解吸附过程
中,乙醇洗脱浓度,乙醇洗脱体积以及解吸流速对解吸附过程
会产生不同的影响。根据Box-Behnken试验设计原理,综合本
实验室单因素试验,分别采用3因素3水平的响应面分析方
法来优化苦苣菜黄酮的吸附和解吸附过程,结果见表4、表5。
表4 吸附试验结果
Table 4 Experiment design and result of
response surface method analysis
试验号 X1 X2 X3 吸附率Y/%
1  0  0 -1  77.05
2  1 -1  0  66.18
3  0  0  0  83.71
4  0  0  0  86.12
5  0 -1  1  62.45
6  1  1  0  80.10
7  1  0 -1  76.05
8  0  0  0  82.77
9 -1 -1  0  69.38
10  0  1  1  70.30
11 -1  0 -1  75.22
12 -1  0  1  61.61
13  0 -1 -1  70.39
14  1  0  1  82.86
15  0  0  0  86.73
16 -1  1  0  70.48
17  0  0  0  84.69
表5 解吸附试验结果
Table 5 Experiment design and result of
response surface method analysis
试验号 A  B  C 解吸附率Y/%
1 -1 -1  0  83.28
2  1 -1  0  82.71
3 -1  1  0  83.11
4  1  1  0  82.61
5 -1  0 -1  91.12
6  1  0 -1  87.96
7 -1  0  1  85.41
8  1  0  1  84.33
9  0 -1 -1  90.02
10  0  1 -1  87.32
11  0 -1  1  82.97
12  0  1  1  83.35
13  0  0  0  88.48
14  0  0  0  91.88
15  0  0  0  91.61
16  0  0  0  90.67
17  0  0  0  91.46
  在吸附过程中,由二次曲面模型拟合得回归方程:
Y =84.40+3.56 X1+2.97 X2-1.71 X3+3.20 X1X2+
5.10 X1X2+1.74 X2X3-3.74 X21-9.07 X22-7.18 X23 (4)
式(4)P值为0.000 8<0.01,可判别响应值与全体自变
量变化关系为显著相关,其R2 为0.951 5,说明响应值中有
95.15%来源于模型中全体自变量,其中,一次项、二次项对
响应值有显著性影响,且失拟项不显著(P>0.05),说明该回
归模型与实测值能较好地拟合,具有较强可靠性。剔除式
(4)中不显著的回归系数,简化后的回归方程:
Y =84.40+3.56 X1+2.97 X2+5.10 X1X3-3.74 X21-
9.07 X22-7.18 X23 (5)
在解吸附过程中,由二次曲面模型拟合得回归方程:
Y =90.82-0.66A-0.32B-2.55C+0.018AB +
0.52AC+0.77BC-3.30A2-4.59B2-0.31C2 (6)
式(6)P值为0.000 7<0.01,其响应值与全体自变量为
显著相关,其R2 为0.954 2,说明响应值中有95.42%来源
于模型全体自变量,其中,一次项、二次项对响应值有显著性
影响,且失拟项不显著(P>0.05),说明该回归模型与实测值
能较好地拟合,具有较强可靠性。剔除式(6)中不显著的回
归系数,简化后的回归方程:
Y =90.82-2.55C-3.30A2-4.59B2 (7)
2.2.1 主效应分析 由表6可知,由于式(4)中各因素均经
无量纲线性编码处理,且所有回归系数之间都是不相关的,
因此,可以由回归系数绝对值的大小来直接比较各因素一次
项对苦荞黄酮得率的影响[14]。式(4)中A项和B项,即上样
液浓度和上样液速率对吸附率影响最大,各项对响应值的影
响大小排序为上样液浓度>上样液速率>上样液pH。
由表7可知,C项和 A项,即乙醇洗脱体积和乙醇洗脱
浓度对响应值影响最大,各项对响应值影响作用为乙醇洗脱
体积>乙醇洗脱浓度>解吸流速。
2.2.2 两因素间的交互效应分析 分别固定原始回归方程
(4)、(6)中任意两个因素在零水平,可以得到另外两个因素
的双因素模型。由表6可知,其 A项(上样液浓度)和C项
(上样液pH)的交互效应对模型影响最大,故应重点考察,根
据模型作出的响应面图和等高线图见图1。由表7可知,所
有交互项的P值均不显著,这说明交互项对于模型的影响较
小,可此不做讨论。
由图1可知,上样液pH与上样液浓度之间的相互影响
较显著,其最优点非常接近上样液浓度3.00%、上样液pH
5.00,吸附率在其附近达到最大值。
2.2.3 最优提取工艺条件的验证实验 使用Design Expert
7.0软 件 得 到 最 优 提 取 工 艺 的 吸 附 率 理 论 最 大 值 为
86.20%;工艺条件为上样液浓度 3.73%,上样液速率
3.6mL/min,pH 5.18。解吸附理论最大值为93.22%;工艺
条件为乙醇洗脱浓度78.20%,解吸流速2.88mL/min,乙醇
洗脱体积120mL。为检验RSM分析法的可靠性,采用上述
421
第28卷第3期 安 卓等:大孔树脂分离纯化苦苣菜黄酮的工艺研究  
最优提取条件进行黄酮的分离纯化试验,实际测得的吸附率
为84.32%,洗脱率为91.73%,与理论预测值相比相对误差
低于5%。
表6 吸附参数数学回归模型分析及各项作用显著性检验
Table 6 Variance analysis of regression equation
方差来源 平方和 自由度 均方和 F值 P值
模型 1 034.46  9  113.94  15.25  0.000 8
X1 101.53  1  101.53  13.47  0.008 0
X2 49.65  1  49.65  6.59  0.037 2
X3 19.60  1  19.60  2.60  0.150 9
X1X2 41.09  1  41.09  5.45  0.052 3
X1X3 104.24  1  104.24  13.83  0.007 5
X2X3 6.55  1  6.55  0.87  0.382 4
X21 52.71  1  52.71  6.99  0.033 2
X22 274.03  1  274.03  36.35  0.000 5
X23 200.56  1  200.56  26.61  0.001 3
残差 

52.77  7  7.54
失拟度 41.98  3  13.99  5.19  0.072 8
纯误差 10.79  4  2.70
总和  1 087.23  16
   P<0.05,差异显著;P<0.000 1,差异极其显著。
表7 解吸附参数数学回归模型分析
及各项作用显著性检验
Table 7 Variance analysis of regression equation
方差来源 平方和 自由度 均方和 F值 P值
模型 203.78  9  22.64  16.19  0.000 7
A  3.52  1  3.52  2.52  0.156 4
B  0.84  1  0.84  0.60  0.464 1
C  51.52  1  51.52  37.05  0.000 5
AB  0.001 225  1  0.001 225 0.000 875 9 0.977 2
AC  1.08  1  1.08  0.77  0.408 3
BC  2.37  1  2.37  1.70  0.234 0
A2  45.89  1  45.89  32.81  0.000 7
B2  88.76  1  88.76  63.46 <0.000 1
C2  0.41  1  0.41  0.30  0.603 1
残差 

9.79  7  1.40
失拟度 2.13  3  0.71  0.37  0.778 8
纯误差 7.66  4  1.91
总和  213.57  16
   P<0.05,差异显著;P<0.000 1,差异极其显著。
90
85
80
75
70
65
60
6.00
5.50
5.00
4.50
4.00 2.00
2.50
3.50
3.00
4.00
上样液 pH值
Sample on liquid pH value
上样
液浓

Sam
ple
on l
iqui
d
conc
entr
ation
/(mg
·mL
-1 )



Ad
so
rp
tio
n
ra
te
/%
6.00
5.50
5.00
4.50
4.00
2.00 2.50 3.00 3.50 4.00
上样液浓度
Sample on liquid concentration/(mg·mL-1)



pH

Sa
m
pl
e
on
liq
ui
d
pH
va
lu
e
吸附率
Adsorption rate/%
图1 上样液浓度与上样液pH相互作用示意图
Figure 1 Interaction of the largest volume and pH value
3 结论
通过比较不同型号大孔吸附树脂对苦苣菜黄酮的吸附
解吸特性,可以看出,AB-8大孔吸附树脂是一种性能良好的
吸附剂,其对黄酮的单位吸附容量值达到了23.13mg/g,其
吸附率和解吸率分别达到了74.85%和82.36%,将响应面
分析(RSM)应用于纯化苦苣菜黄酮工艺,采用合理的试验设
计对纯化工艺进行研究。依据BBD试验设计原理求得最佳
纯化工艺条件,即吸附最佳条件为上样液浓度3.73%,上样
液速率3.6mL/min,上样液pH 5.18;解吸附最佳工艺条件
为乙醇洗脱浓度78.20%,解吸流速2.88mL/min,乙醇洗脱
体积120mL。
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提取与活性   2012年第3期
1
2
3
4
5
6
7
8
0
0.005 0.015 0.025 0.035 0.045 0.055
铝箔宽度方向 y向
y direction in top surface of top Al film/m




JT
Ed
dy
cu
rre
nt
de
ns
ity
JT
/(

m
-2

×108

430 kHz
530 kHz
630 kHz
图8 不同频率时铝箔感应电流密度分布 (y向)
Figure 8 Induced current density in aluminum foil
(ydirection)with different frequency
(1)影响包材铝箔上感应电流分布的两个主要因子为
感应线圈的形状和尺寸以及高导磁率材料的使用情况。感
应线圈的正下方区域为感应电流富集区,所设计的砖包感应
封合系统能使铝箔封合线得到基本均匀的涡流分布,这将有
利于铝箔基复合材料的均匀封合;封合系统中增加磁通集中
器对实现包材有选择性的快速局部封合大有裨益,它通过将
磁力线束缚在局部目标区域内,实现感应电流在封合线处的
聚集,从而有效增加封合效率和速度。
(2)影响包装材料铝箔上感应电流密度大小的主要因
素在于封合激励电流的频率和大小。封合激励电流频率是
影响封合速度和效果的重要原因,封合电流频率的增加将增
大封合线上的感应电流密度,故增加频率是提高封合速度的
有效方法;影响包材感应封合的最大因素是封合电流的大
小,使用大电流可实现包材的瞬间封合。
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第28卷第3期 张建国等:铝箔基包装材料高频感应封合电磁场3D有限元模拟