全 文 ：书收稿日期:2012-09-11; 修订日期:2012-12-27
基金项目:新疆教育厅高校科研计划青年教师启动基金项目
( No． XJEDU2010S27)
作者简介:王晓梅( 1979-) ，女( 汉族) ，新疆乌鲁木齐人，现任新疆医科大
学副教授，在读博士，硕士学位，主要从事天然药物活性成分的研究工作．
* 通讯作者简介:热娜·卡斯木( 1962-) ，女( 维吾尔族) ，新疆乌鲁木齐
人，现任新疆医科大学教授，博士研究生导师，博士学位，主要从事新疆特
色药用植物资源的研究与开发工作．
大孔吸附树脂纯化新疆鼠尾草总酚酸的工艺研究
王晓梅1，热娜·卡斯木1* ，胡君萍1，王新玲1，李 敏1，帕肉克·艾哈买提2
(1．新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011; 2．新疆农业大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830052)
摘要:目的 优选大孔吸附树脂纯化新疆鼠尾草中总酚酸类成分的工艺条件。方法 以鼠尾草洗脱液中总酚酸的含量为
考察指标，研究大孔吸附树脂分离纯化的吸附性能和洗脱参数。结果 S － 8 型大孔吸附树脂对新疆鼠尾草总酚酸的吸附
率为 76． 67%，解吸附率为 85． 59%，浸膏中总酚酸的含量达 56． 10%。结论 用 S － 8 型大孔吸附树脂分离纯化新疆鼠尾
草中总酚酸的方法可行。
关键词:新疆鼠尾草; 总酚酸; 大孔吸附树脂; 纯化
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 05． 113
中图分类号:Ｒ285 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 05-1270-02
新疆鼠尾草 Salvia Deserta Schang为唇形科(Labiatae)鼠尾草
属(Salvia L)植物。它是我国鼠尾草属植物中独特的品种，在我
国新疆天山山脉和中亚诸国有广泛的分布［1］。近年来，本课题
组对新疆鼠尾草的化学成分及药理活性进行了一定的研究，从中
分离出了多种化学成分［2 ～ 4］，并且发现其酚酸类成分具有一定的
药理活性［5］，因此，筛选新疆鼠尾草中的总酚酸的分离纯化工艺
具有一定的研究价值和实际意义。故在前期研究的基础上，我们
对新疆鼠尾草的酚酸类成分进行了进一步的研究。本实验在确
定总酚酸的最佳提取工艺的基础上［6］，对其纯化工艺作了较系
统的研究，得出了新疆鼠尾草总酚酸的最佳树脂吸附及洗脱工
艺，确定了新疆鼠尾草的最佳纯化工艺，为新疆鼠尾草的进一步
研究提供了技术支持。
1 仪器与材料
1． 1 仪器与试药 UV －2550 型紫外可见光分光光度计(日本岛
津公司) ，EYELAN － 1001 旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公
司) ，中药粉碎机 ST － 02A(永康市帅通工具有限公司) ，电子分
析天平(梅特勒 －托利多仪器(上海)有限公司) ，HH － S4 数显恒
温水浴锅(金坛市医疗仪器厂) ，SHB －Ⅲ循环式多用真空泵(郑
州长城科工贸有限公司)电热恒温振荡水槽(上海精宏实验设备
有限公司)。
AB － 8 大孔吸附树脂购自天津光复精细化工研究所、D －
201 大孔吸附树脂、D － 301 大孔吸附树脂购自安徽三星树脂科
技有限公司，HPD － 100、HPD － 300、HPD － 400、S － 8 大孔吸附树
脂购自河北沧州宝恩吸附树脂材料科技有限公司，聚酰胺购自浙
江省台州市路桥四甲生化塑料厂。对照品丹酚酸 K 自制(经峰
面积归一化法计算纯度为 97． 94%)。所用试剂均为分析纯。
1． 2 药材 新疆鼠尾草于 2010 年采收于新疆乌鲁木齐仓房沟，
品种由新疆医科大学药学院热娜·卡斯木教授鉴定。药材晾干
后，取根茎粉碎后过 40 目筛待用。
2 方法与结果
2． 1 大孔吸附树脂的预处理 称取一定量树脂置圆底烧瓶中，加
入一定量丙酮回流 2 h，过滤，将树脂用无水乙醇洗涤至乙醇与水
混合无混浊，再用蒸馏水洗至无醇味，晾干，备用。
2． 2 总酚酸的含量测定方法 精密称取干燥至恒重的丹酚酸 K
对照品 5 mg，置 50 ml 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇
匀，制成浓度 0． 1 mg /ml的丹酚酸 K对照品溶液。再精密吸取丹
酚酸 K对照品溶液 0． 5，1． 0，1． 5，2． 0，2． 5，3． 0，3． 5 ml 分别置于
10 ml的容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用 UV － 2550 型紫
外可见光分光光度计在 λmax 285 nm处测定吸光度，测 3 次取平
均值，以质量浓度 C(mg /ml)和吸光度 A 建立标准曲线，得回归
方程为 A = 28． 023 71 C + 0． 012 71，r = 0． 999 7，线性范围:0． 005
～ 0． 035 mg /ml。用同种方法，相同条件下测定各样品的吸光度，
由对应的吸光度标准曲线得出相应浓度，并计算样品中总酚酸的
含量。本方法的精密度、稳定性、重复性及回收率结果良好，适合
用于新疆鼠尾草总酚酸的测定［6］。
2． 3 新疆鼠尾草总酚酸粗提物的制备 取一定量的新疆鼠尾草
根茎粉末，用 25 倍体积的 40%乙醇溶液回流提取 3 次，每次 1 h，
提取液过滤，合并三次提取液，减压蒸馏至稠膏，蒸干后称重，得
粗提物浸膏。
2． 4 大孔吸附树脂对新疆鼠尾草总酚酸的静态吸附与解吸附研
究
2． 4． 1 不同大孔吸附树脂静态吸附能力比较 精密称取已预处
理的大孔吸附树脂 1g，置 50 ml 的具塞三角瓶中，加入总酚酸粗
提物制备的溶液 25 ml，回旋振荡吸附 24 h，充分吸附后，过滤，吸
取滤液按含量测定方法测定总酚酸含量，计算不同树脂的吸附量
和吸附率。
2． 4． 2 不同大孔吸附树脂静态解吸附能力比较 将吸附饱和的
树脂晾干后，加入 25 ml80%乙醇溶液，回旋振荡 24 h 解吸附，过
滤，吸取滤液按含量测定方法测定总酚酸含量，计算不同树脂的
解吸附量和解吸附率。吸附与解吸附结果见表 1。
由表 1 可以看出，树脂 AB － 8、HPD － 100、HPD － 300、HPD －
400 及聚酰胺的解吸附率较高，但是他们的吸附率却较低。而 D
－201、D －301、S － 8 的吸附率较高，但解吸附率较低，故考虑改
变解吸附剂进一步考察这三种树脂的解吸附率。
2． 4． 3 不同洗脱液对 D －201、D － 301、S － 8 树脂的静态解吸附
能力考察 称取 D －201、D － 301、S － 8 树脂 1 g 各两份，按“2． 4．
1”项下条件充分吸附后，将树脂晾干，在每种树脂中分别加入 25
ml 0． 5% HCl与 0． 5% NaOH的 80%乙醇溶液，按“2． 4． 2”项下
条件充分解吸附，测定吸附与解吸附的总酚酸含量，计算吸附率、
解吸附率。结果见表 2。
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 5 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 5
书表 1 不同树脂的吸附量、吸附率及解吸附率
树脂型号
吸附量 /
mg·g － 1
吸附率
(%)
解吸附量 /
mg·g － 1
解吸附率
(%)
D －201 35． 9375 92． 74 0． 9375 2． 60
D － 301 35． 6250 91． 94 1． 2500 3． 51
AB － 8 5． 0000 12． 90 4． 8125 96． 25
HPD － 100 6． 2500 16． 13 6． 1750 98． 80
HPD － 300 3． 7500 9． 68 3． 2500 86． 67
HPD － 400 5． 0000 12． 90 4． 5625 91． 25
S － 8 37． 1875 95． 97 0． 078 1． 68
聚酰胺 10． 0000 25． 81 6． 2500 62． 50
表 2 不同树脂的吸附量、吸附率及解吸附率
序号 树脂型号
解吸附剂
(80% EtOH溶液)
吸附率
(%)
解吸附率
(%)
1 D － 201 0． 5%HCl 88． 75 36． 62
2 D － 201 0． 5%NaOH 88． 13 2． 84
3 D － 301 0． 5%HCl 86． 25 13． 04
4 D － 301 0． 5%NaOH 86． 88 25． 94
5 S － 8 0． 5%HCl 91． 25 63． 01
6 S － 8 0． 5%NaOH 91． 25 9． 59
由表 2 可以看出，当在 80% EtOH 中加入酸或碱后，三种树
脂的解吸附率增大，尤其是 S － 8 用 0． 5% HCl的 80%EtOH溶液
的解吸附率达到 63． 01%，再加之其本身的吸附率就比较高，故
确定用 S － 8 型树脂作为对新疆鼠尾草中总酚酸的纯化树脂。
2． 5 上样液浓度的考察 分别称取适量的总酚酸粗提浸膏，用
40%EtOH配成浓度分别为 0． 375，0． 750，1． 500，2． 125，2． 750、
3． 250 mg /ml的上样液。将上述溶液各 25 ml 加于 S － 8 型树脂
上，按“2． 4． 1”项下条件充分吸附后，测定吸附前后的总酚酸含
量，计算吸附率。结果见表 3。
表 3 不同上样浓度的吸附量及吸附率
序号 上样浓度 /mg·ml －1 吸附量 /mg·g － 1 吸附率(%)
1 0． 375 9． 067 9 96． 67
2 0． 750 18． 125 0 96． 67
3 1． 500 35． 923 1 95． 83
4 2． 125 49． 980 0 94． 12
5 2． 750 62． 500 0 90． 91
6 3． 250 72． 812 5 89． 62
由表 3 可知，其吸附量随着上样液浓度的增大而增大，而其
吸附率却降低，当上样液浓度为 0． 75 mg /ml 时树脂的吸附率比
较大，当浓度再增大时，吸附率开始下降，故上样液的浓度以
0． 75 mg /ml为宜。
2． 6 最佳上样量考察 取 200 ml浓度为 0． 75 mg /ml的样品溶液
加到树脂柱上，每 5 ml 接一流份，测定每一流份中的总酚酸含
量。结果见图 1。
图 1 最佳上样量曲线
图 1 最佳上样量曲线如图 1 所示，在最初的流份中只有少量
的酚酸泄漏，当上样量为 175 ml时达吸附平衡，故选择 175 ml的
0． 75 mg /ml的样品溶液作为最佳上样量。
2． 7 乙醇浓度的考察 S － 8 树脂按最佳吸附条件吸附后，先用
60 ml水洗脱，再依次用 100 ml的不同浓度的乙醇溶液洗脱树脂
柱，测定洗脱液中总酚酸含量，计算解吸附率。结果见表 4。
由实验结果可知，当用不同浓度乙醇洗脱时，虽 60% EtOH
的解吸附率相对较高，但酚酸的解吸附率很低，因此结合静态解
吸附剂考察，综合考虑之后，决定在 60% EtOH 中加入一定量的
不同浓度的盐酸来考察其解吸附率。
表 4 不同乙醇浓度对鼠尾草中总酚酸的解吸附性能
序号 洗脱溶剂
吸附量 /
mg
解吸附液中样品的量 /
mg
解吸附率
(%)
1 水 105． 00 1． 00 0． 096
2 20% EtOH 104． 00 0． 595 1． 37
3 40% EtOH 180． 56 2． 208 3． 32
4 60% EtOH 184． 12 3． 575 3． 82
5 80% EtOH 175． 12 2． 562 5． 34
6 100% EtOH 171． 19 0． 62 4． 57
2． 8 酸浓度的考察 称取 6 份 S － 8 树脂按最佳吸附条件吸附
后，分别用 100 ml的不同盐酸的 60% EtOH溶液洗脱树脂柱，测
定洗脱液中总酚酸含量，计算解吸附率。结果见表 5。
表 5 不同盐酸浓度对鼠尾草中总酚酸的解吸附性能
序号 洗脱溶剂
吸附量
/mg·g － 1
吸附率
(%)
解吸附量
/mg·g － 1
解吸附率
(%)
1 0． 1%HCl 142． 1875 77． 38 85． 00 59． 78
2 0． 2%HCl 142． 1875 77． 38 95． 00 66． 81
3 0． 3%HCl 144． 375 78． 57 110． 00 76． 19
4 0． 4%HCl 137． 8125 75． 00 90． 00 65． 31
5 0． 5%HCl 152． 5625 83． 03 100． 00 65． 55
由实验结果可看出，在 60%的乙醇溶液中加入盐酸时，解吸
附率大大增高，而且比较而言，0． 3%HCl的 60%乙醇溶液的解吸
附率最高，故选择用 0． 3% HCl的 60%乙醇溶液作为最佳洗脱溶
剂。
2． 9 洗脱溶剂量的考察 取按最佳吸附条件吸附的树脂柱，依次
用不同体积的的 0． 3%HCl的 60%乙醇溶液进行洗脱，计算解吸
附率。结果见表 6。
表 6 洗脱溶剂量的考察
序号 洗脱溶剂体积
吸附量
/mg·g － 1
解吸附量
/mg·g － 1
解吸附率
(%)
1 2BV 124． 69 51． 00 40． 90
2 4BV 124． 69 82． 00 65． 76
3 6BV 124． 69 84． 00 67． 37
4 8BV 124． 69 78． 00 62． 56
5 10BV 124． 69 95． 00 76． 19
6 12BV 124． 69 84． 00 67． 37
由实验结果看出，当洗脱剂用量在 10BV的时候解吸附率比
较大，故确定洗脱剂用量为 10 倍量的柱体积。
2． 10 验证实验 按照上述实验确定的最佳吸附与解吸附工艺，
选用 3 根 S － 8 大孔吸附树脂，上样液 0． 75 mg /ml 进行吸附，再
用 10BV的0． 3%HCl的 60%乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液后
浓缩至干，测得树脂吸附量为 100． 63 mg /g，吸附率为 76． 67%，
解吸附率为 85． 59%，浸膏中总酚酸的含量达 56． 10%。验证实
验证明，S － 8 树脂对新疆鼠尾草总酚酸的确有比较好的纯化效
果，可以作为鼠尾草总酚酸的有效纯化方法。
3 讨论
新疆鼠尾草中的总酚酸在被树脂吸附后，只用乙醇溶液洗
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 5 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 5 期
书脱，结果不理想，在乙醇溶液中加适量的酸可以增加酚酸解吸附
率，从而提高其纯化效果。
参考文献:
［1］ Konta F，Shimizu T． Flowering Plants and Ferns of the Tianshan
Mountains inChina，［M］． Osaka:Tombow Publisher，1996，110:195．
［2］ 王新玲，热娜·卡斯木，早然木·尼亚孜，等．新疆鼠尾草花化学成
分的研究［J］．新疆医科大学学报，2003，26(6) :583．
［3］ 马 燕，热娜·卡斯木．王晓梅，等．新疆鼠尾草茎化学成分的研究
［J］．新疆医科大学学报，2004，27(6) :577．
［4］ Tezuka Y，Kasimu Ｒ，Li JX，et al． Constituents of roots of Salvia Deserta
Schang (Xinjiang － Danshen) ［J］． Chem Pharm Bull，1998，46(1) :
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［5］ Ｒena Kasimu，Ken Tanaka，Yasuhiro Tezuka，et al． Comparative Study
of Seventeen Salvia Plants:Aldose Ｒeductase Inhibitory Activity of Wa-
ter and MeOH Extracts and Liquid Chromtoraphy Mass Spectrometry
(LC － MS)Analysis of Water Extracts［J］． Chem Pharm Bull，1998，
46(3) :500．
［6］ 王晓梅，马俊鹏，胡君萍，等．新疆鼠尾草中总酚酸类成分的提取工
艺研究［J］．新疆医科大学学报，2012，35(4) :476．
收稿日期:2012-09-25; 修订日期:2013-02-04
基金项目:国家科技部“十一五”支撑项目( No． 2008BAI53B068)
作者简介:马俊杰( 1982-) ，男( 汉族) ，江苏苏州人，现为南京中医药大学
博士研究生，硕士学位，主要从事《伤寒论》理法方药及肾脏免疫机制方面
的研究工作．
* 通讯作者简介:周春祥( 1964-) ，男( 汉族) ，江苏扬州人，现任南京中医
药大学教授，博士学位，主要从事《伤寒论》理法方药研究工作．
基于药浴治疗慢性肾脏病安全性
相关机制研究探讨壮火食气的内涵
马俊杰，周春祥*
(南京中医药大学基础医学院，江苏 南京 210046)
摘要:目的 观察药浴疗法治疗慢性肾脏病过程中休克患者的发生机制，并做出相应安全性评价。方法 30 例药浴治疗
过程中发生休克的慢性肾脏病患者，在休克前后分别测定 GFＲ、血肌酐、D －二聚体、肾素 －血管紧张素 II －醛固酮、hs －
C反应蛋白、TNF － α、IL － 6。结果 患者发生休克前后的 GFＲ、血肌酐、D －二聚体、肾素 －血管紧张素 II －醛固酮、hs － C
反应蛋白、TNF － α、IL － 6 水平有显著的差异( P ＜ 0． 05) ，具有统计学意义。结论 药浴治疗慢性肾脏病发生休克导致肾
功能恶化与凝血系统、ＲAS系统及免疫系统有关。
关键词:药浴; 慢性肾脏病; 休克; 安全性评价; 壮火食气
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 05． 114
中图分类号:Ｒ2 －03 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 05-1272-02
The Discussion of the Mechanism of“Evil Fire Exhaust Qi”by Observation of the Ne-
phritis of 30 Collapse CKD Patients in the Process of Medicated Bath
MA Jun-jie，ZHOU Chun-xiang*
( Preclinical Medicine College，Nanjing University of TCM，Nanjing 210046，China )
Abstract: Objective discuss the mechanism of Collapse CKD patients in the process of Medicated bath，and giving the Evalua-
tion of Safety．Methods To determinate GFＲ、serum creatinine、D － dimer 、ＲAS、hs － C － reactive protein、TNF － α、IL － 6before
and after collapsion． Ｒesults GFＲ、Serum creatinine、D － dimer、ＲAS、hs － C － reactive protein、TNF － α、IL － 6 were statistically
significant differences before and after collapsion． Conclusion Deterioration of renal function by the collapsion in the process of
Medicated bath was related to the coagulation system、ＲAS system and immune system．
Key words: Medicated bath; Chronic kidney disease; Shock; Evaluation of Safety; Evil Fire Exhaust Qi
中医外治疗法在几千年中医历史上有着举足轻重的地位，历
代医家对外治法都有推崇，清代著名医家吴师机亦发出“外治之
理即内治之理”之感慨，我们前期对药浴这一传统外治疗法进行
研究，发现其临床疗效并不亚于内治疗法，尤其是在慢性肾脏病
及一些风湿性疾病的治疗上具有更大的优势，它能很好的改善炎
症的发生发展及具有一定的免疫调节功能，对血液流变学及神经
内分泌功能［1］亦具有显著的影响，而任何疗法皆存在双面性，药
浴疗法在治疗过程中亦需要因人而异，尤其是面对慢性肾病，患
者本身的体质是其中一个重要因素，这为我们在关注药浴疗法疗
效的同时，对其安全性评价亦提出了必要性。
1 资料与方法
1． 1 一般资料 30 例均为南京中医药大学附属医院门诊及住院
诊断为 CKD并且在运用药浴疗法过程中出现了休克的病人，其
中 CKD3 期患者 10 例，4 期患者 12 例，5 期患者 8 例。病程在 1
～ 15 年之间。诊断为慢性肾炎 22 例，高血压肾病 2 例，肾病综
合征 3 例，糖尿病 3 例。
1． 2 诊断标准 西医诊断标准是根据美国 K/DOQI 专家组提出
的标准，按照对肾小球滤过率(GFＲ)的评估结果将 CKD 分为 5
期;根据全国“急性三衰”会议制定的休克诊断标准为:①有诱发
休克的病因。②意识异常。③脉细数，超过 100 次 /min 或不能
触知。④末梢循环灌注不足:四肢湿冷，胸骨部位皮肤指压阳性
(压后再充盈 ＞ 2 s) ，皮肤花纹，黏膜苍白或发绀等;尿量 ＜ 30
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 5 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 5