全 文 ：C H I N E S E H O R T I C U L T U R E A B S T R A C T S

苦苣菜再生体系建立研究
于 颖 何 漫 吴冰冰 徐 娜 姜长 阳
辽 宁师 范大学 生命科 学学 院 ， 辽 宁 大连
摘 要 ： 以苦 苣 菜 的嫩茎 为 材料 ， 进行 愈伤 组织 的诱导 、 分化 、 试管 苗 生根、 移 栽及栘植 所 需要条件 的研 究 ，
并建 立起苦 苣 菜嫩茎 的再生体系 。 结 果证明 ： 八 是嫩 茎 颗粒状 愈伤组 织诱 导 的 理
想培养基 ； 八 八 八是诱导愈伤组 织 颗粒和不定 芽 分化培养 的理 想培养基 ；
八 是试管 苗 生根培养的 理想培养基 ； 河沙和炉灰 渣是试管 苗栘 栽的理想基质 ， 栘栽
成活率为 和 ， 栘植到 山坡上 的试管 苗 生长旺蛊 ， 根系 发达 。
关键词 ： 苦苣 菜 ； 愈伤 组织 ； 再 生体系
苦苣菜 是菊科苦苣菜属一年生
或二年生草本植物 ， 生长于田野 、 荒坡 、 沙地或林缘 ， 在
我国各地均有分布 』 。 苦苣菜的嫩茎叶是羊 、 猪 、 兔等家
畜 、 家禽喜食 的青饲料 ， 也是一种许多人喜食的野菜 。 苦
苣菜的全草可入药 ， 具有消炎化 痰 、 清热解毒等功效 。 由
于 苦苣菜具有饲用 、 食用和药用等重要的价值 ， 毎年都有
很 多人多次采收 ， 因此 ， 导致这种本来分布较多 的野生植
物数量越来越少 。 在大连市的郊区 ， 现在 已经很难采到苦
苣 菜 。 为 了保护这种野生 资源 ， 加强其研究 ， 我们 对苦苣
菜进行 了组织培养及再生 系 统建立的研究 。 目 前 已经有苦
菜类组织培养研究的报 道 迄今未见苦苣菜组织培养
和再生系 统建立 的研究报道 。 本试验以苦苣菜的嫩茎为外
植 体 ， 在筛选了适于愈伤 组织诱导培养基 的基础上 ， 研究
了 暗培养 、 光培养 、 不 同激素对愈伤组织 分化的影响 ， 以
期 建立起苦苣菜高频 、 稳定的再生体系 ， 为苦苣菜组培繁
殖 、 无性系选种及基 因工程育种等提供技术支持 。
材料和方法
材料及灭菌
上一年 月份将大连石门 山 山坡林缘生长非常旺 盛的苦
苣菜挖 回来 ， 栽到花盆中 。 经过冬季枯萎休眠后 ， 当 年 月
末放到温室 中使其萌发生长 ， 月 中旬将生长旺盛的嫩茎剪
成长 茎段后 ， 立 刻带回 实验室 ， 放到 的磨 口
广 口 瓶中 ， 用 自 来水反复振荡冲洗 左右 ， 用 安
利 洗涤液反复振荡洗涤 再用 蒸馏水 洗至没有泡沫
时移到超净工作 台上进行操作 。 将经过上述处理的嫩茎用
无菌水振荡洗涤后 ， 用 乙醇灭菌 迅速
用无菌水洗涤 次 ， 再用 溶液振荡灭菌 ，
最后用无菌水洗涤 次 。 在无菌培养皿中 ， 用解剖刀 将无菌
第一作者简介 ： 于 颖 （ ’ 女 ， 在读本科 ； 就读于辽宁
师范大学生命科学学院生物系 。
通讯作者 ： 姜长阳 ， 教授 。
项目 来源 ： 辽宁师范大学教学改革项 目 （
嫩茎切成长 左右的茎段 ， 然后接种到相应的 固体培
养基上 ， 进行培养和观察 。
培养条件
以培养基 、 和 为基本 培养基 ， 附加
不 同浓 度的细胞分裂素 和生长素 、 、 、
。 培养基加蔗糖 胨力 强度为
为 — 培养温度为 左右 ， 光 照 光照度
。
方法
不 同 激素对愈伤 组织诱导的 影响 将无菌嫩茎段
横放半插接种 到以 为基本培 养基 ， 附加不 同浓度 、
、 ， 的培养基上 ， 进行愈伤组织诱导培养 。 愈伤
组织诱导试验重复 了 次 ， 每种处理接种 个嫩茎段 。
不 同 激素对愈伤组 织和 不 定芽 分化 的 影响 把
在 培养 基 上 继
代 培 养 的 愈 伤 组 织 分 散为 独立 的 颗 粒 后 ， 接种 到 以
为基本培养基 ， 附加
不同浓 度的 、 的培养基上进行愈伤组织颗粒的光
照分化培养和无光分化培养 。 每种培养基接种 个愈伤组
织颗粒 。 时观察统计分化率和长势 。 把分化培养的不定
芽从基部剪下 ， 接种到与颗粒状愈伤组织分 化培养相同 的
培养 基上 ， 进行不定芽的分化培养和分化继代培养 。 继代
分化培养试验重复 次 ， 每种接种培养 个材料。
不 同 生 长 素 对试 管 苗 生根培 养 的 影 响 将
培养
基上继代分化培 养的高在 以上的不定芽从基部剪下
后 ， 接种到以 为基 本培养基 ， 附加
浓度分别为 、 、
、 、 、 、
和 的 的 种生根培养基上进行生根培养 。 每
种处理接种 个外植体 ， 试验重复 次 ， 观察生根培养情
况 。
不 同基质对试管 苗移栽成活 的 影响 打开培养着生
根试管苗 的培养瓶瓶塞 ， 置于 左右的光照下炼苗
后 ， 用镊子把试管苗从培 养瓶中 取出 ， 立刻在清水中洗净
根部的培养基 ， 把试管苗移栽到表层为约 厚的河沙 、
中国园艺文摘 年第 期
炉灰渣 、 珍珠岩 ， 下面为肥沃园土的温室苗床上 ， 然后弥
雾浇 透水 ， 并保持湿度 以上 、 温度 左右 、 无直射
光照的条件 ， 时观察统计 。 共移栽 了 次 ， 每次移栽
株 。
试管 苗 的移植 把在温 室中移栽成活的试管苗于
月 下 旬移植到采集地山坡上 ， 并按照野生的条 件进行管
理 。 移植试验进行 了 次 ， 移植的数量为 株 ， 移植后定
期观察统计 。
结果
不同激素对愈伤组织诱导的影响
观察表明 ， 接种后 左右在有的 培养基上可 见接触
培养基 的嫩茎切 口 形成浅黄色的愈伤组织 。 时观察统
计 。 由表 可见 ， 在附加不同浓度 与 或 ， 的培
养基上都能诱导形成愈伤组织 ， 且 与 ， 配合使用的
培养基上愈伤组织的诱导率高于 与 配合使用 的培
养基 ， 其 中在 乙的培养基
上 ， 愈伤组织诱导率为 且愈伤组织长势好 。 观察表
明 ， 在上述培养基上培养到 时 ， 所培养的材料大部分形
成初始愈伤组织 。 初始愈伤组织一般是在接种嫩茎两端 的
切 口 处形成的 ， 使其成为哑铃状 。 所形成的愈伤 组织初期
外观光滑 ， 呈浅黄色 ， 后来逐渐生长成为浅绿色的颗粒 。
培养到 时 ， 所培养生长的愈伤组织就成为 由许多 小颗粒
组成的直径 左右的绿色愈伤组织块 。 把上述诱导培
养的颗粒状愈伤组织 ， 在相同 培养基上进行继代 培养 ， 结
果证明 ： 每次继代培养时 间 为 所培养的愈伤组织颗
粒外观不变 ， 每次继代平均 个愈伤组织颗粒可形成 个颗
粒 。 上述结果说明 ： ， 是
苦苣菜嫩茎颗粒状愈伤组织诱导的理想培养基 。
表 不 同 浓度激素对嫩 茎愈伤组织诱导 的影响
激素
注 ： 为长势好 ； 为长势一般 ： 为不生长 。
诱导愈伤组 诱导率
织数 个 ） 长势
不 同激素对愈伤组织和不定 芽分化的 影响
由表 可 见 ， 在暗 培 养 的条 件下 ， 附加 不 同浓 度 的
、 培养基上愈伤组织颗粒都不能分化 ， 在 光照
培养的 条件下 ， 附加不同 浓度 的培养基 上 ， 愈伤组织
颗粒也难以分化 ， 而在附加不同 浓度的 的培养基上愈
伤组织颗粒分化的效果较好 。 但从 愈伤组织颗粒的分化率
和分化不定芽的长势看 ， 在 的浓度为 的培养
基上 ， 不 仅愈伤组织颗粒的分化率达到 了 而且分化
的不定芽长势较好 。 观察表明 ， 在 的浓度为
的培养基 上 ， 接种培养 时有的愈伤组织颗粒就开始分
化 ， 培养 时 的愈伤组织颗粒开始分化 。 接着 ， 伴随
着愈伤组织颗粒的分化和不定芽的生长 ， 在已经分化的不
定芽基部又会分化生长出多个不定芽 。 培养到 时 ， 一个
愈伤组织颗粒就会分化 出 个高 以上 的绿色不定
芽 ， 分化的不定芽呈丛生状 ， 生长较为旺盛 。
把由愈伤组织颗粒分化的高 以上的不定芽从基
部剪下 ， 接种到 与愈伤 组织 颗粒分化培 养相 同 的培养基
上 ， 经过 的分化培养 ， 平均 个不定芽可分化培养出
个髙在 以上生长旺盛的丛生不定芽 。 经过 次不定芽
的分化继代培养重复试验 、 每次重复试验继代培养 代 、
每代接种培养 个材料的研究表明 ， 所培养的不定 芽的
长势和分化率基本不变 。 上述说明 ，
这一培养基是诱导苦苣菜
嫩茎愈伤组织颗粒分化培养和不定芽分化培养 的理想培养
基 。
表 不 同 浓度生长素对愈伤组织分化的 影响
生长素 浓度 愈伤组织 分化率 分化不定
种类 分化数 芽长势
—
—
注 ： 前为 光培养结果 ， 后为暗培养结果 ； 为长势较好 ； 为 长势一般 ；
为不生长 。
不同生长素浓度对试管苗生根培养的影响
试验结果表明 ， 接种在附加 的培养
基上的不定芽都可以生根 。 但从生根率 、 平均生根数和试
管苗的长势看 ， 在附加浓度为 的培养基上效果最
好 。 观察还表明 ， 在这一培养基上 ， 培养 有的就可形成
根原基 ， 随后根系和植株迅速生长 。 当培养至 时 ，
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不定芽可 以 生长为具有 条 白色 根 、 个叶片 、 高
左右长势旺 盛的试管苗 。 把上述培养的试管苗剪成
具有 个叶片 、 长 左右的茎段 ， 接种到相同的培养基
上进行生根继代培养 。
把生根试管苗剪成具有 个生长点 、 长 的茎
段后 ， 接种到相同的培养基上进行生根继代培养 。 次生根
试验 ， 每次试验继代培养 代的结果表明 ， 继代培养的试管
苗除了 培养根数 、 叶片 、 根色 、 髙度和长 势等特点保持不
变外 ， 毎个培养周期缩短为 平均每代的繁殖系 数为
。 上述说明 ： 是
苦苣菜试管苗生根培养的理想培养基 。
不同基质对试管苗移栽成活的影响
观察表明 ： 移栽后 左右 ， 有的移栽试管苗可见成活
并开始生长 。 移栽后 时观察统计表明 ： 河沙与炉灰渣是
试管苗移栽的理想基质 。 移栽到 以河沙和炉灰渣为基质 的
试管苗生长旺盛 ， 根 系呈嫩白 色 ， 平均 成活率分别为
和 。 移栽成活的试管苗初 期植株较小 ， 长势较慢 ，
后开始旺盛生长 。
试管苗的移植
次移植成活率分别为 。 。 、 和 。 移植后
的定期观察表明 ， 与 野生苗苦苣菜相比 ， 试管苗长势非常
旺盛 。 对这种移植试管苗根系 的观察还表明 ： 移植的试管
苗根系发达 ， 相当 于野生植株的 倍左右 。 其他各种性状均
与野生植株一致 。
讨论
苦苣菜再生体系的 成功建立 ， 具有 以下几 方 面的意
义 ： 一是苦苣菜的颗粒状愈伤 组织的分化率达到 了
说明苦苣菜具有很高的再生潜能 ， 可以作为组织培 养 中器
官发生和无性系 变异研究的材料 ， 二是该研究为苦 苣菜的
转基 因 、 基 因库的建立等现代植物技术研究奠定 了 基础 ，
三是该研究为保护苦苣菜的野生资源提供了可能 。
在愈 伤组织的继代培 养中 ， 经过 培养 ， 愈伤组织
颗粒外观不变 ， 个愈伤组织颗粒可形成 个颗粒。 这说明
用愈伤组织的继代培养的 方法进 行繁殖 ， 的增殖 系数
为 ， 按照这个速度计算 ， 每年能繁殖数量为 个后
代 ； 对不 定芽进行分化培养 ， 经过 的分化培养 ， 平 均
个不定芽平均可分化培养出 个不定芽 。 按照这个速度计
算 ， 毎年能繁殖数 量为 个后代 采用生根继代 的方法
进行繁殖 ， 的繁殖系数为 。 按照这个速度计算 ， 每
年能繁殖数量为 个后代 。 上述说明 ， 不论采用哪种方
法进行繁殖 ， 毎年都能繁殖出大量的后代 。 但是 ， 若要繁
殖用于栽培的苦苣菜试管苗 ， 应采用生根继代的 方法进行
繁殖 。 这是因 为 ， 用生根继代 的方法繁殖的试管苗不仅几
乎没有无效苗 ， 而且试管苗生长旺 盛 ， 容易移栽成活 。
移植山坡上的试管苗 出现了生长 旺盛 、 根系发达的特
点 ， 主要与以 下原 因有关 ： 一是本研究所采用的材料是生
长非常 旺盛 的植株 ， 材料本身具有生长非常旺 盛的 遗传
性 二是在培 养过程中 使用浓度较高的生长素 。 生长素的
后效作用促进了生长 。
参考文献 ：
中 国 科学院北京植物研究所 中国 高等植物图 鉴 第四 册 ）
北京 ： 科学 出版社
李书心 辽宁植物志 （ 下册 ） 沈阳 ： 辽宁科学技术 出 版社
韩全忠 王正兴 大连植物志 下 册 ） 大连 ： 大连理工大学 出
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程林梅 ， 高洪文 ， 赵茂林 菊苣组织培养与植株再生的研究
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