全 文 ：2011-08-25
DOI: 10.3724/SP.J.1145.2011.00509
应用与环境生物学报 2011，17 ( 4 ): 509~511
Chin J Appl Environ Biol=ISSN 1006-687X
弯茎还阳参Crepis fl exuosa（DC.）Benth.et Hook.f.为菊科
还阳参属植物，生于高山溪边，分布于我国甘肃、青海、西藏.
全草药用，具有清热止血的作用，可用于治疗肝炎、胃出血等
症. 还阳参属植物中有许多种在民间医药中应用，有健胃消
食、补肾壮阳、清热解毒功效，可治疗消化不良、胃痛、性神
经衰弱、支气管炎、肺炎、痈疽等 [1]. 对本属植物化学成分的
研究显示，本属植物主要含有倍半萜内酯、倍半萜甙、三萜、
甾醇、有机酸等 [2~3]. 有关弯茎还阳参的化学成分，尚未见研
究报道. 为探讨其有效成分，我们对其化学成分进行了系统
研究，首次从中分离得到12个化合物，分别为：对羟基苯甲酸
（1）、对羟基苯甲酸乙酯（2）、20(30)-烯-3β,21α-双羟基蒲公
英烷（3）、秦皮乙素（4）、乌素酸（5）、齐墩果酸（6）、芹菜
素（7）、木犀草素（8）、二十八烷酸（9）、二十五烷酸α单甘
油酯（10）、胡萝卜苷（11）和木犀草素-7-葡萄糖苷（12）. 用
MTT法研究化合物3、4、5、8在体外对小鼠黑色素瘤B16的抑
制作用，结果显示它们具有细胞毒活性.
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
WRS-1B数字熔点测定仪，WFH-203B三用紫外分析仪，
IR-FT Nicolet型红外分光光度仪（KBr压片），VG2AB-SH质
谱仪，Bruker AM-400型核磁共振仪. 柱层层析硅胶（60~100
目，100~200目，200~300目，300~400目）、薄层层析硅胶G
（60）型为青岛海洋化工集团公司产品. 柱色谱用Sephadex
LH-20为Pharmacia公司产品，上海化学试剂厂进口分装；显
色剂为碘蒸汽或者5%H2SO4（EtOH）. 所有试剂均为分析纯.
小鼠黑色素瘤细胞系，由中国科学院上海细胞生物研究所引
进，培养在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中，0.25%胰酶
消化传代，每2天传代一次.
1.2 植物材料
实验 所用植物全草于2006年8月采自甘 肃省兰州市石
佛沟，由兰州大学生物系张国樑教授鉴定为弯茎还阳参C.
fl exuosa (DC.) Benth.et Hook .f.
1.3 提取与分离
弯茎还阳参全草5 kg用95%乙醇常温提取，提取液常压
蒸馏回收溶剂，共得到总浸膏587 g，总浸膏用水混悬，依次
用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各萃取层减压蒸干后，
得到石油醚萃取浸膏110 g，乙酸乙酯萃取浸膏45 g，正丁醇
萃取浸膏86 g. 石油醚萃取物用等量硅胶拌样上硅胶柱层析，
用石油醚-乙酸乙酯（1 : 0 ~ 0 : 1）极性梯度洗脱，合并成分相
同组分，各组分再经Sephadex LH-20、反复硅胶柱层析分离
纯化，得到化合物1（10 mg）、化合物2（10 mg）、化合物3（15
mg）、化合物4（20 mg）. 乙酸乙酯萃取物经硅胶柱色谱，用
氯仿-甲醇（1 : 0 ~ 0 : 1）极性梯度洗脱，合并成分相同组分，
各组分再经Sephadex LH-20、反复硅胶柱层析分离纯化，得
弯茎还阳参的化学成分*
张永红1** 张婉春1 张建刚2 陈世武2 林小燕1
（1福建医科大学药学院 福州 350004）
（2兰州大学药学院 兰州 730000）
Chemical Constituents of Crepis fl exuosa*
ZHANG Yonghong1**, ZHANG Wanchun1, ZHANG Jiangang2, CHEN Shiwu2 & LIN Xiaoyan1
(1Faculty of Pharmacy, Fujian Medical University, Fuzhou 350004, China)
(2Faculty of Pharmacy, Lanzhou University, Lanzhou 730000, China)
Abstract Twelve compounds were isolated from the whole plants of Crepis fl exuosa (DC.) Benth.et Hook.f. On the basis
of physicochemical and spectroscopic data, they were identifi ed as p-hydroxybenzoic acid (1), ethyl p-hydroxybenzoate (2),
taraxast-20(30) ene-3β,21α-diol (3), esculetin (4), ursolic acid (5), oleanolic acid (6), apigenin (7), luteolin (8), octacosanoic acid
(9), 2′,3′-dihydroxypropyl pentacosanoate (10), daucosterol (11) and luteolin-7-O-β-D-glucoside (12). Compounds 3, 4, 5 and 8
showed moderate cytotoxicity against B16 cell line. Ref 17
Keywords Crepis fl exuosa; triterpene; coumarin; fl avone; cytotoxicity
CLC Q949.783.506 + R965
摘 要 从弯茎还阳参全草中首次分离得到12个化合物，通过理化性质和波谱数据，分别鉴定为对羟基苯甲酸（1）、
对羟基苯甲酸乙酯（2）、20(30)-烯-3β,21α-双羟基蒲公英烷（3）、秦皮乙素（4）、乌素酸（5）、齐墩果酸（6）、芹菜素
（7）、木犀草素（8）、二十八烷酸（9）、二十五烷酸α单甘油酯（10）、胡萝卜苷（11）和木犀草素-7-葡萄糖苷（12）. 其
中，化合物3、4、5、8在体外对小鼠黑色素瘤B16具有抑制作用. 参17
关键词 弯茎还阳参；三萜；香豆素；黄酮；细胞毒活性
CLC Q949.783.506 + R965
收稿日期：2010-08-12 接受日期：2010-10-27
*福建省自然科学基金项目（No. 2010J01179）和福建省教育厅科技基金
项目（No. JS06025）资助 Supported by the Natural Science Foundation of
Fujian, China (No. 2010J01179) and the Science and Technology Foundation
of Fujian Educational Bureau (No. JS06025)
**通讯作者 Corresponding author (E-mail: zhangyh@mail.fjmu.edu.cn)
510 17 卷应 用 与 环 境 生 物 学 报 Chin J Appl Environ Biol
到化合物5（8 mg）、化合物6（5 mg）、化合物7（10 mg）、化
合物8（11 mg）、化合物9（12 mg）、化合物10（12 mg）、化合
物11（15 mg）、化合物12（15 mg）.
1.4 体外抗肿瘤活性筛选
用常规的MTT法对分离得到的化合物进行体外细胞毒
活性测试. 结果显示，化合物3、4、5、8对小鼠黑色素瘤B16的
IC50 值分别为4.54、8.66、7.52、17.93 μg mL-1.
2 结构鉴定
化合 物 1：无色针晶（石油醚 /醋 酸乙酯 = 2 : 1），mp
213~215 ℃，EI-MS m/z：138 [M+]，121 [M+-OH]，93 [M+-
COOH]. 1H NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.89（2H，d，J = 8.4
Hz，H-2，6），6.90（2H，d，J = 8.8 Hz，H-3，5）. 13C NMR（100
MHz，CD3OD）δ：167.5（COOH），162.5（C-4），132.6（C-2，
6），122.6（C-1），115.8（C-3，5），以上波谱学数据与对羟基
苯甲酸（p-hydroxybenzoic acid）的数据 [4]一致.
化合 物2：无色针晶 （石油醚 /醋酸乙酯 = 2 : 1），mp
116~118 ℃，ESI-MS m/z：167 [M+H]+. 1H NMR（400 MHz，
CD3OD）δ：7.96（2H，d，J = 9.0 Hz，H-2，6），6.88（2H，d，J
= 9.0 Hz，H-3，5），4.36（2H，q，J = 7.0 Hz，—CH2—），1.38
（3H，t，J = 7.0 Hz，—CH3）. 13C NMR（100 MHz，CD3OD）δ：
166.9（C=O），160.1（C-4），131.8（C-2，6），122.7（C-1），115.2
（C-3，5），60.9（—OCH2—），14.3（—CH3）. 以上波谱学数
据与对羟基苯甲酸乙酯（ethyl p-hydroxybenzoate）的数据 [5]
一致.
化合 物 3：白色针晶（石油 醚 /醋 酸乙酯 = 1 : 1），mp
256~258 ℃，Liebermann-Burchard反应阳性，IR（KBr）cm-1：
3 406（OH），2 935，1 637（C=C），1 450，1 384；EI-MS m/z：
442（M+，C30H50O2），424（M+-H2O），409（M+-H2O-CH3），
372，255，234，216，207，189；1H NMR（400 MHz，C5D5N）
δ 0.89，0.90，0.93，1.01，1.05，1.23（each 3H，s，H-23，24，
25，26，27，28），1.49（3H，d，J = 6.4 Hz，H-29），4.99，
5.10 (2H，each br s，H-30），3.46（1H，dd，J = 10.0，6.0 Hz，
H-3），4.69（1H，dd，J = 8.8，4.4 Hz，H-21）. 13C NMR（100
MHz，C5D5N）δ 157.9（C-20，C），111.8（C-30，CH2），78.0
（C-3，CH），70.4(C-21，CH），39.0（C-1），28.0（C-2），39.3
（C-4），55.7（C-5），18.5（C-6），34.3（C-7），41.0（C-8），50.5
（C-9），37.2（C-10），21.4（C-11），26.5（C-12），39.2（C-13），
42.2（C-14），26.5（C-15），38.3（C-16），34.1（C-17），48.4
（C-18），38.7（C-19），50.4（C-22），27.8（C-23），15.9
（C-24），16.3（C-25），16.0（C-26），14.6（C-27），18.8
（C-28），28.4（C-29）. 以上数据与20(30)-烯-3β,21α-双羟基蒲
公英烷[Taraxast- 20(30) ene-3β,21α-diol]的数据 [6]一致.
化合物4：淡黄色粉末（氯仿），mp 267~268 ℃，紫外灯
下显天蓝色荧光 . EI-MS m/z：178（M+，C9H6O4），150，132，
121. UV λmax：206，297，347. IR（KBr）cm-1：3 329（OH），
1 667（C=O），1 618，1 567. 1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ
6.14（1H，d，J=9.5 Hz，H-3），7.83（1H，d，J=9.5 Hz，H-4），
6.96 (1H，s，H-5），6.72 (1H，s，H-8）. 13C NMR（100 MHz，
DMSO-d6）δ 161.5（C-2），112.2（C-3），145.1（C-4），113.0
（C-5），143.5（C-6），149.2（C-7），103.3（C-8），151.0（C-9），
111.4（C-10）. 以上数 据与6,7-二羟 基 香豆 素，即秦皮乙素
（Esculetin）的数据 [7]一致.
化合 物 5：白色针状 结晶（氯仿），mp 284 ~286 ℃，
Liebermann-Burchard反应阳性，IR（KBr）cm-1：3 436（OH），
2 915，2 865（CH），1 688（C=O），1 452，1 315. EI-MS m/z：
456（M+，C30H48O3），438（M+-H2O），423（M+-H2O-CH3），
411（M+-COOH），410（M+-HCOOH），248，208，189，135. 1H
NMR（400 MHz，CD3OD）δ 0.97，1.01，1.04，1.07，1.09，1.17，
1.15（each 3H×7，H-23，24，25，26，27，29，30），5.52（1H，
J=3.5 Hz，H-12），3.54（1H，t，H-3α），2.72（1H，d，J=11.3
Hz，H-18），3.39（1H，dd，J=13.8，3.9 Hz，H-19），2.42（1H，
dt，J = 13.3 Hz，H-20）. 13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ 182.0
（COOH，C-28），127.3（d，C-12），140.0（s，C-13），78.1（d，
C-3）. 以上数据与乌苏酸（Ursolic acid）的数据 [8]一致.
化 合 物 6 ：白 色 针 状 结 晶（氯 仿），m p > 3 0 0 ℃ ，
Lieber mann-Burchard反 应阳性 . EI-MS m/z：456（M+，
C30H48O3），248，203，189，133. 1H NMR（400 MHz，CD3OD）
δ 5.23（1H，t，J = 3.5 Hz，H-12），3.14（1H，dd，J = 4.4，11.2
Hz，H-3），2.84（1H，dd，J = 4.8，13.6 Hz，H-18），0.77，0.81，
0.90，0.93，0.94，0.96，1.18（each 3H×7，s，H-23，24，25，26，
27，29，30）. 13C NMR（100 MHz，CD3OD）δ 181.8（C-28），
145.2（C-13），123.6（C-12），79.7（C-3），56.3（C-5），49.0
（C-9），47.6（C-17），47.2（C-19），42.9（C-14），42.7（C-18），
40.6（C-8），40.4（C-4），39.8（C-1），38.1（C-10），34.8
（C-21），34.0（C-7），33.8（C-22），33.5（C-29），31.6（C-20），
28.8（C-15），28.7（C-23），27.8（C-2），26.3（C-27），24.5
（C-16），24.0（C-11），23.9（C-30），19.5（C-6），17.7（C-26），
16.2（C-24），15.8（C-25）. 以 上波 谱 学 数 据 与齐 墩 果 酸
（Oleanolic acid）的数据 [9]一致.
化合 物7：黄色 粉末（甲醇），mp>300 ℃，盐酸- 镁粉
反应阳性. 1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ 12.97（1H，s，
5-OH），10.82（1H，brs，7-OH），7.93（2H，d，J = 8.8 Hz，H-2′，
6′），6.93（2H，d，J = 8.8 Hz，H-3′，5′），6.80（1H，s，H-3），
6.49（1H，d，J = 2.0 Hz，H-8），6.19（1H，d，J = 2.0 Hz，H-6）.
13C NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ 181.6（C-4），164.0（C-7），
163.6（C-2），161.3（C-4′），161.1（C-5），157.2（C-9），128.4
（C-2′，6′），121.1（C-1′），115.8（C-3′，5′），103.6（C-10），102.7
（C-3），98.7（C-6），93.8（C-8）. 以上波谱学数据与芹菜素
（Apigenin）的数据 [10]一致.
化合物8：黄色粉末（甲醇），mp>300 ℃，盐酸-镁粉反
应阳性. UV λmax：252，349. 1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ
12.99（1H，s，5-OH），7.42（1H，dd，J = 2.4，8.0 Hz，H-6′），
7.40（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.90（1H，d，J = 8.4 Hz，H-5′），
6.68（1H，s，H-3），6.45（1H，d，J = 1.6 Hz，H-8），6.20（1H，
d，J = 1.6 Hz，H-6）. 13C NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ 181.6
（C-4），164.0（C-7），163.8（C-2），161.4（C-5），157.2（C-9），
149.6（C-4′），145.6（C-3′），121.4（C-1′），118.9（C-6′），
115.9（C-5′），113.3（C-2′），103.6（C-10），102.8（C-3），98.7
（C-6），93.7（C-8）. 以上波谱学数据与木犀草素（Luteolin）
5114 期 张永红等：弯茎还阳参的化学成分
的数据 [11]一致.
化合 物 9：白色 粒 状 结晶（氯 仿），mp 86 ~88℃，I R
（KBr）cm-1：2 917，2 849（CH），1 707（C=O），EI-MS m/z：
424（M+，C28H56O2），质谱显示有长链脂肪酸部分的信号：
410，382，368，354，340，297，283，269，255，227，213，199，
185，57（100%），及一系列失去14单位的栅栏状碎片峰. 以上
数据与二十八烷酸（Octacosanoic acid）的数据 [12]一致.
化合 物 10：白色 粒 状 晶 体（氯仿），mp 86 ~87℃ . IR
（KBr）cm-1：3 300，3 240（OH），2 960，2 922，2 842（CH），
1 730（C=0），1 470；EI-MS m/z：457（M++1），382，322，294，
266，238，210，182，154，134，98，74，57，质谱上有一系列失
去14 单位的碎片峰. 1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ 0.87（3H，
t，J = 6.6 Hz，H-25），1.32~1.23（42H，overlopping，H-4~24）.
13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ 65.18（CH2，C-1′），70.27(CH，
C-2 ′），64.24(CH2，C-3′），174.34（C，C-1），29.66~29.12
（19xCH 2，C- 4 ~22），以上数 据与二十五 烷 酸α单甘 油酯
（2′,3′-dihydroxypropyl pentacosanoate）的数据 [13]一致.
化 合 物 11： 白 色 粉 末（甲 醇），m p 280 ~282 ℃，
Liebermann-Burchard和 Molish反 应均为阳性，IR（KBr）
cm-1：3 422（OH），2 932，2 868，1 627（C=C），1 461，1 380，
1 161，799，618，其红外光谱与胡萝卜苷的标准谱图完全一
致，另外其13C NMR及1H NMR谱与胡萝卜苷（Daucosterol）的
数据 [14]一致.
化合物12：黄色粉末（甲醇），mp 257~259℃，盐酸-镁粉
反应和Molish反应均为阳性. 1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）
δ 12.98（1H，s，5-OH ），7.44（1H，dd，J = 8.2，2.0 Hz，H-6′），
7.42（1H，d，J = 2.0 Hz，H-2′），6.90（1H，d，J = 8.5 Hz，
H-5′），6.79（1H，d，J =2.0 Hz，H-8），6.74（1H，s，H-3），
6.45（1H，br d，J = 2.0 Hz，H-6），5.07（1H，d，J = 7.5 Hz，
H-1），3.72（2H，d，J = 11.0 Hz，H-6），3.51~3.17（4H，m，
H-2~H-5）；13C NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ 163.4（C-2），
103.7（C-3），182.4（C-4），161.6（C-5），100.0（C-6），164.9
（C-7），95.2（C-8），157.4（C-9），105.8（C-10），121.9（C-1′），
114.0（C-2′），146.2（C-3′），150.4（C-4′），116.5（C-5′），119.6
（C-6′），100.4（C-1），73.6（C-2），76.9（C-3），70.1（C-4），
77.6（C-5），61.1（C-6）. 以上数据与木犀草素-7-O-β-D-吡喃
葡萄糖苷（Luteolin 7-O-β-D-glucopyranoside）的数据 [15]一致.
3 讨 论
从弯茎还阳参中分离鉴定了12个化合物，包括三萜、香
豆素、黄酮、甾体、脂肪酸等类型. 初步的体外抗肿瘤活性筛
选显示，具有末端双键的蒲公英烷型三萜（3）显示了很好的
细胞毒活性，秦皮乙素（4）和乌苏酸（5）也具有较好的细胞
毒活性. HPLC含量测定结果显示，秦皮乙素在该植物中的含
量为0.043%，可以考虑将该植物作为一种资源植物来提取秦
皮乙素. 秦皮乙素对DPPH自由基清除效果极佳，清除能力远
远强于广泛使用的合成抗氧剂BHT（2,6-二叔丁基对甲酚）[16].
乌苏酸具有广泛的生物学活性，如抗肿瘤、降血脂、抗动脉
粥样硬化、抗糖尿病、抗HIV、抗寄生虫等 [17]. 以上研究结果
为弯茎还阳参进一步的开发利用提供了科学依据.
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