全 文 ：免疫器官造成了一定的损伤 , 出现脾指数和胸腺指数减小 , 脾脏
T淋巴细胞增殖活力及 NK细胞杀伤活性下降等现象 ,不同剂量
白花蛇舌草与 5-Fu合用后 ,脾指数和胸腺指数 ,脾脏 T淋巴细
胞增殖活力及 NK细胞杀伤活性均显著增加 , 表明白花蛇舌草在
一定程度上可以降低化疗药对免疫器官的损伤 ,保护机体的免疫
力。
目前已证实 , 氧自由基水平的增高以及细胞抗氧化酶的改变
可以导致肿瘤的发生 。SOD是一种重要的抗氧化酶 , 主要作用是
清除体内氧自由基 , 防止活性氧对细胞产生损伤作用 ,被认为是
一种新的肿瘤抑制基因。 MDA是体内脂质过氧化的重要产物 ,
它的产生一方面与脂质过氧化侵害有关 ,另一方面与机体抗氧化
系统酶活性有关。因而测试 MDA的量常常可反映机体内脂质
过氧化的程度 , 间接地反应出细胞损伤的程度。 5 -Fu为抗嘧啶
类抗代谢药 , 广泛应用于多种肿瘤的化疗 , 由于具有较强骨髓和
胃肠道损害 , 使其大剂量应用受限。本实验发现 , 荷瘤小鼠用 5
-Fu化疗后 , 小肠组织 SOD的活性下降 , MDA含量增加 , 而联合
白花蛇舌草治疗后 , SOD活性提高 , MDA含量下降 , 提示白花蛇
舌草可提高化疗小鼠的抗氧化酶活性和减少脂质过氧化产物的
生成 , 从而可清除自由基 , 减轻小肠氧化损伤的程度。
综上所述 ,白花蛇舌草与化疗药物合用可增强化疗药抑制肿
瘤生长的作用 ,同时减轻了化疗药物所致的免疫器官和肠道的损
害 , 调整了化疗小鼠的胃肠和免疫功能 , 从而起到了增效减毒作
用 , 这为白花蛇舌草肿瘤在化疗中的应用提供了实验依据。
参考文献:
[ 1 ] 　刘鲁明 ,杨宇飞.肿瘤科中西药物手册 [ M] .北京:人民卫生出版
社 , 2003:32.
[ 2 ] 　刘智勤 ,朱惠学 ,陈鹊汀 ,等.六君子汤对环磷酰胺的增效减毒作用
研究 [ J] .时珍国医国药, 2008, 19(9):2150.
[ 3 ] 　李仪奎.中药药理实验方法学 ,第 2版 [ M] .上海:上海科学技术出
版社 , 2006:777.
[ 4 ] 　迟明艳 ,黄　勇 ,王爱民 , 等.蒲薏颗粒对化疗荷瘤小鼠的增效减
毒及免疫功能的影响 [ J].中国现代应用药学杂志 , 2009, 26(6):
436.
[ 5 ] 　HaddenJW.Immunodeficiencyandcancerprospectsforcorrection
[ J] .lntImmunopharmacol, 2003, 3(8):1061.
收稿日期:2010-02-06;　修订日期:2010-08-07
基金项目:四川省应用基础研究资助项目(No.07JY029-062)
中央高校基本科研业务费专项资金资助项目
(No.SWJTU09ZT29)
作者简介:耿　耘(1959-),女(汉族),山东莘县人 ,现任西南交通大学生
命科学与工程学院教授 ,硕士学位 ,主要从事中药及复方作用机理研究工
作.
峨参对实验性衰老小鼠作用的实验研究
耿　耘 , 李　莉 ,马超英
(西南交通大学生命科学与工程学院 ,四川 成都　610031)
摘要:目的 观察峨参对 D-半乳糖致衰老小鼠的影响。方法 昆明系小鼠 60只 , 除空白组灌胃生理盐水外 , 其余各组以
生理盐水 , 高 、中 、低剂量峨参水煎液 ,白术水煎液灌胃 ,同时每天 120mg/kg注射 D-半乳糖 , 造成衰老模型。测定小鼠
活动次数 、跳台 、迷宫 、脑组织中 SOD、MDA及脏器指数。结果 与模型组相比 , 高剂量峨参水煎液组能显著增加衰老小鼠
的自主活动次数 , 提高学习和记忆能力 , 增加脏器指数以及提高 SOD活力 、降低 MDA含量;其余各组以上作用不明显。
结论 峨参水煎液对减缓衰老有一定的作用。
关键词:峨参;　D-半乳糖;　衰老
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2011.01.070
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2011)01-0144-02
　　峨参 Anthriscussylvestris(L.)Hofm是四川峨眉山道地药材 ,
在峨眉山一带的民间广泛应用于脾虚泄泻 、肾虚水肿 、瘀血疼痛
以及老年体衰等多种病症 , 疗效较好。然而 , 至今尚很少有人对
其作用及其机理进行深入研究。 本实验在国内外首次观察了峨
参对 D-半乳糖致衰老小鼠的影响。现报道如下。
1　材料
1.1　药物 峨参 、白术均购买于峨眉山市医药公司 ,经西南交大
生命科学与工程学院鉴定为四川峨眉山产。
峨参水煎液:取适量峨参粉碎后加水浸泡 1 h, 分两次煎煮 ,
第 1次 40 min, 第 2次 20 min,用纱布过滤 ,合并两次水煎液分别
浓缩成 4g、2 g、1g生药 /10ml, 每只小鼠按 0.6ml/d灌服。药液
4℃保存。白术水煎液:取适量白术粉碎后加水浸泡 1 h, 其余煎
煮方法同上 , 浓缩成 0.2g/10ml, 每只小鼠按 0.6ml/d灌服。药
液 4℃保存。
1.2　动物 选用健康成年清洁级昆明系小鼠 60只 ,雌雄各半 , 体
质量 20 ～ 25 g, 购自成都中医药大学实验动物研究中心 , 常规饲
养。
1.3　试剂 D-半乳糖 , Sigma公司生产 , 上海生化试剂公司分装 ,
批号:070127;超氧化物歧化酶(superoxidedismutase, SOD, 批号
20070404)、丙二醛(malondialdehyde, MDA, 批号 20070407)、考
马斯亮蓝蛋白定量测试盒(批号 20070406), 均购自南京建成生
物工程研究所第一分所。
1.4　仪器 小鼠光电刺激跳台 , 型号:ZH-500, 安徽淮北正华公
司产品;Y型电迷宫 , 型号:MG-2,张家港生物医学仪器厂产品;
多功能小鼠自主活动记录仪 ,型号:YLS-1A, 山东省医学科学院
设备站产品;紫外可见分光光度计 , 型号:TU1901, 北京普析通用
仪器设备有限公司产品。
2　方法
2.1　模型的制备 预选:室内明亮 ,将小鼠放入迷路中 ,观察其自
发活动 3 min, 然后给予电击至其三臂均探索进入为止 , 立即关闭
闸门 , 选择自发活动活跃 , 对电击反应敏感并逃避迅速者供学习
或记忆实验用 [ 1] 。
经挑选的小鼠 60只 , 随机分为 6组:正常对照组 、模型对照
组 、阳性药物对照组及峨参水煎液高 、中 、低剂量组 , 每组 10只。
模型对照组:用生理盐水稀释的 D-半乳糖 , 按 120 mg· kg-1·
d-1剂量 ,小鼠颈背部皮肤下连续注射 42 d,造成衰老模型 [ 2] , 同
·144·
时珍国医国药 2011年第 22卷第 1期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL.22NO.1
时以生理盐水 0.6 ml灌胃;阳性药物治疗组:造模同模型组 , 以
白术水煎液 0.6 ml灌胃;峨参治疗组:造模同模型组 , 以高 、中 、
低剂量峨参煎液(4g, 2g, 1 g生药 /10ml)0.6 ml灌胃。正常对照
组颈背部皮下注射生理盐水 0.1 ml/d, 同时以生理盐水 0.6 ml
灌胃。
2.2　检测指标
2.2.1　小鼠自主活动次数测定 于末次给药后测定自主活动次
数。
2.2.2　小鼠被动回避性跳台试验 于第 43天进行学习实验 ,将
小鼠放入反映箱内适应环境 3 min, 然后立即通以 36 V交流电。
小鼠遭到电击后逃到安全区 , 从台上跳下 , 双足接触铜栅为错误
反映。记录 3 min内出现的错误反映次数。 24 h后重作测验 ,即
记忆保持测验。记录受到电击的小鼠第 1次跳下平台的潜伏期
和 3 min内的错误总数。以小鼠第 1天学习和第 2天重测试过
程中出现的错误反映次数来评价学习和记忆能力。
2.2.3　Y型迷路空间分辨能力测试实验 第 45天进行迷宫实
验 , 该装置分为 3等份 ,分别称为Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ臂。以Ⅰ臂为起步区 ,
则Ⅱ臂(右侧)为电击区 , Ⅲ臂(左侧)为安全区。将小鼠放入起
步区 , 操纵电击控制期训练小鼠获得电击时直接逃避至左侧安全
区为正取反应 , 反之则为错误反应。连续 10次中有 9次正确为
学会 , 纪录总的次数。 24 h后测验记忆成绩。
2.2.4　脑组织 SOD、MDA的检测 在前项实验期间仍然坚持给
药 , 用药 52 d后 , 30 min断颈处死小鼠 ,立即取脑组织 , 用冷生理
盐水冲洗后称重 , 于 0.9%冰生理盐水中进行冰浴匀浆 , 制成
10%脑浆液。 4℃, 3 000 r/min, 离心 10 min, 取上清液备用。参
照试剂盒说明测定脑组织 SOD(黄嘌呤氧化酶法)、MDA(硫代巴
比妥法)的含量。
2.3　统计学方法 实验采用完全随机设计。结果以 x±s表示 ,
用 SPSS11.5软件分析 ,并对各指标进 t检验。
3　结果
3.1　各组对小鼠自主活动次数 、胸腺指数 、脾脏指数的影响 结
果见表 1。
表 1　各组对小鼠自主活动次数 、胸腺指数 、脾脏指数的影响( x±s)
组别 活动次数 胸腺指数 脾脏指数
正常对照 148.5±24.48 0.3184±0.08 0.5494±0.10
模型对照 100.1±37.90＊ 0.2440±0.07＊ 0.4547±0.07＊
阳性药物 148.2±33.56☆ 0.3800±0.14☆☆ 0.5574±0.08☆
峨参高剂量 138.4±24.10☆ 0.3333±0.07☆ 0.5387±0.19
峨参中剂量 110.1±15.86＊＊# 0.3490±0.07☆ 0.5300±0.10☆
峨参低剂量 112.4±22.08＊# 0.3224±0.12 0.6344±0.12☆☆
　　与空白对照组比较 , ＊＊P<0.01, ＊P<0.05;与阳性药物组比较 , ##P<0.01, #P
<0.05;与模型组比较 , ☆☆P<0.01, ☆P<0.05;n=10
3.2　各组对小鼠跳台的影响 结果见表 2。
3.3　各组对小鼠迷宫 、SOD、MDA的影响 结果见表 3。
4　讨论
D-半乳糖在代谢过程中能影响糖代谢而形成过量的超氧
阴离子自由基 , 诱导实验动物产生衰老的一系列变化 ,这种作用
接近或相当于自然衰老。因此 , D-半乳糖拟衰老动物模型被广
泛引用于衰老研究中 。所以本实验采用 D-半乳糖造模。
衰老小鼠体力和免疫能力都会降低 ,所以通过测定自主活动
次数来反映衰老小鼠的体力 ,测定胸腺指数和脾脏指数来放映衰
老小鼠的免疫能力。从本实验活动次数来看 ,模型组小鼠活动次
数明显低于空白对照组。 阳性药物和高剂量峨参治疗组与模型
组比较有明显的差异 , 中 、低剂量组虽然有一定的差异 ,但没有统
计学意义 ,说明阳性药物和高剂量峨参治疗组有明显的疗效 , 能
使衰老小鼠恢复到正常水平 ,剂量增加疗效也增强。胸腺指数阳
性药物和高 、中剂量与模型组比较有明显差异 , 且中剂量组略高
于高剂量组;脾脏指数表明阳性药物和中 、低剂量峨参治疗组有
效 , 且低剂量组高于中剂量组 ,高剂量组虽然平均值大于中剂量
组 , 但偏差较大 , 仍然没有统计学意义。可能是不同的个体对药
物的敏感程度不同 ,造成偏差较大。
表 2　各组对小鼠跳台的影响( x±s)
组别 跳台学习潜伏期 t/s 错误次数
跳台记忆
潜伏期 t/s 错误次数
正常对照 17.8±9.0 3.6±3.2 108.7±51.5 1.2±1.4
模型对照 7.3±5.1＊ 4.1±1.5＊＊ 56.9±37.4＊ 2.9±1.1＊
阳性药物 13.6±5.1☆ 3.6±1.3☆ 100.9±44.6☆ 1.3±1.6☆☆
峨参高剂量 12.1±6.0☆ 2.5±1.3☆☆ 114.0±53.0☆ 1.3±1.8☆
峨参中剂量 11.2±10.41 3.7±1.16☆ 116.7±70.01☆ 1.0±1.15☆
峨参低剂量 8.1±6.7 3.9±1.5☆ 141.5±50.6☆☆ 0.6±0.8☆☆
　　与空白对照组比较 , ＊＊P<0.01 , ＊P<0.05;与阳性药物组比较 , ##P<0.01, #P
<0.05;与模型组比较 , ☆☆P<0.01, ☆P<0.05;n=10
表 3　各组对小鼠迷宫 、SOD、MDA的影响( x±s)
组别 迷宫学习次数 迷宫记忆次数 SOD/U· mgprot-1
MDA/
nmol· mgprot-1
正常对照 26.8±9.9 16.9±5.8 0.47±0.08 13.3±1.4
模型对照 57.8±19.5＊＊ 33.8±19.7＊ 0.41±0.05＊ 14.6±2.9＊
阳性药物 38.4±13.2☆ 17.2±5.5☆ 0.62±0.08☆☆ 11.7±2.4☆
峨参高剂量 36.3±16.4☆ 17.1±5.7☆ 0.55±0.10☆ 15.3±1.9
峨参中剂量 38.4±11.9＊☆ 21.5±7.8 0.49±0.06☆ 11.1±1.4☆☆
峨参低剂量 47.0±17.0＊ 26.2±13.0 0.47±0.03☆ 13.1±1.9
　　与空白对照组比较 , ＊＊P<0.01, ＊P<0.05;与阳性药物组比较 , ##P<0.01,
#P<0.05;与模型组比较 , ☆☆P<0.01, ☆P<0.05;n=10
跳台和迷宫实验反映的是小鼠的学习和记忆能力。实验研
究表明 , 模型组的跳台学习和记忆能力都较低 , 迷宫错误次数较
多 , 说明造模成功。阳性药物有明显的治疗效果 , 峨参各剂量治
疗组 , 虽然与模型组都有差异 , 但和剂量没有明显的关系 ,说明小
剂量峨参就有明显改善记忆能力的作用。
SOD是机体内重要的抗氧化酶之一 , 其活力和含量反映了机
体清除自由基的能力。研究表明 ,随年龄的增长 , SOD清除自由
基的能力逐渐降低 ,所以 SOD水平的高低是衡量衰老的重要指
标之一 。本实验结果表明 , 峨参各剂量组与模型组比较有差异 ,
且与剂量相关 , 随剂量的增加 , 清除自由基能力增强。机体衰老 ,
体内组织细胞中的自由基代谢会失去平衡 ,机体对自由基的防御
能力下降。脂褐质在细胞组织中的沉积是机体老化的重要特征。
MDA作为脂褐质形成的中间产物 , 其含量能间接反映机体内自
由基的产生情况和机体组织细胞对脂质的过氧化程度 ,所以可以
把 MDA作为评价衰老的指标之一 。高剂量组的 MDA值高于模
型组 , 说明高剂量组治疗没有效果 , 中剂量组与模型组比较有显
著差异 ,低剂量组虽然平均值和空白组相近 , 但偏差较大 ,没有统
计学意义。SOD与 MDA在各剂量组间没有表现出一定的规律
性 , 但中剂量组的疗效较为稳定。
综上所述 ,峨参水煎液能增加衰老小鼠的自主活动次数 , 提
高学习和记忆能力 ,增加脏器指数 , 提高脑组织 SOD活力 , 降低
MDA含量 , 对减缓衰老有一定的作用。
参考文献:
[ 1 ] 　张均田.现代药理实验方法学 ,第 1版 [ M] .北京:北京医科大学和
中国协和医科大学联合出版社 , 1982:1020.
[ 2 ] 　徐叔云.药理实验方法学 , 第 3版 [ M] .北京:人民卫生出版社 ,
2002:826.
·145·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL.22NO.1 时珍国医国药 2011年第 22卷第 1期