全 文 ：·论　著 ·
脱氢紫堇碱在心肌细胞钙调控中的作用
赵昕1 ,汤浩2 ,韩雅玲1 ,闫承慧1
1.沈阳军区总医院全军心血管病研究所 心内科 ,辽宁 110016;
2.中国医科大学基础医学院生理教研室
摘要:背景　已有动物实验表明脱氢紫堇碱(DHC)可能通过阻止心肌细胞内钙超载 ,提高心肌细胞的自我保护作
用 ,但还没有相关实验阐明 DHC 调控心肌细胞保护的分子机制。目的　探讨 DHC 对心肌细胞内 Ca2+超负荷及
Ca2+调控相关蛋白的表达变化。方法　采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对心肌细胞 Ca2+调控相关蛋白 ,
包括钙三磷酸腺苷酶(Ca2+-A TPase)、磷酸受钠蛋白(PLB)、斯里兰卡肉桂碱受体 2(RYR2)、L型钙通道和肌集钙
蛋白(CASQ)的 mRNA 在转录水平的改变进行了检测 , 在此基础上 , 又用 western blot 法做蛋白表达水平的检测。
结果　缺氧导致心肌细胞的 Ca2+-ATPase、PLB、L 型钙通道和 CASQ 的 mRNA 转录水平明显减低(P <0.01), 而
RYR2 的 mRNA 转录水平却升高了(P <0.05)。 DHC 能使正常 、缺氧心肌细胞的 RYR2 转录表达水平明显减低
40%、10%, 但 CAS Q却明显增加 36%、82%(P <0.01)。结论　心肌细胞的 Ca2+-ATPase、CASQ 、L 型钙通道 、
PLB 和 RYR2 的表达异常可能是缺氧引起心肌细胞内 Ca2+超负荷的分子机制;DHC 对缺氧心肌细胞的保护作用
与其降低正常和缺氧心肌细胞 RYR2 及增加 CASQ 基因转录和蛋白表达有关 。
关键词:　钙调相关蛋白;　缺氧;　心肌细胞内游离钙;　脱氢紫堇碱
The effect of dehydeocorydaline on calcium handing
in hypoxia cardiomyocytes
ZHAO Xin＊ , TANG Hao , HAN Ya-ling , YAN Cheng-hui
＊Department of Cardiology , S henyang General Hospital o f Peop les L iberation Army , Liaoning 110016 , China
Abstract:　Background　Ca2+ homeo stasis play s an impo rtant ro le in myoca rdial cell injury induced by hypoxia , and
prevention o f intracellular Ca2+ over lo ad is a key pro cess fo r cardiopr otection.　It has been repor ted that dehydeoc-
orydaline(DHC)prevent intracellular calcium over load and pro tect ca rdiomyocy tes against anoxia injury.　Howev-
er , the detailed mechanism o f DHC on ca rdiopro tection remains unclear.　Objective　To investiga te whether DHC
pro tec ts cardiomyocy tes against hypoxia-induced injury by regulating Ca2+ homeo sta sis.　Methods　 The m RNA
and protein expression of the calcium handling gene s such a s(SR)Ca2+-ATPase , L-ty pe calcium channel , ry anodine
receptor , calsequestrin and phospho lamban w ere measured respec tively by reve rse transcription-polymera se chain r e-
action (RT-PCR)and Weste rn blo tting in hypox ia-induced myocardiac cells induced in vitro.　Fur the rmo re , the im-
munoprecipitate(IP)and immuno fluo rescence staining were used to evaluate the inter action betw een the ry anodine
receptor and calsequestrin.　Results　The mRNA expressions of S R Ca2+-ATPase , calsequestrin , pho spholamban
and cardiac L-type calcium channel we re significantly decreased in prima ry cultured myocardiac cells under hypox ia
condition(P <0.01).I n contr ast , the mRNA level o f ry anodine recepto r w as obviously increased (P <0.05).
Fur the rmore , Western blo tting demonstrated that expr ession o f calsequestrin w as ma rkedly eleva ted 82% in hypox ia
myocardiac ce lls o r 36% in norma l cells when treated by DHC(P<0.01), whereas ry anodine receptor w as observ ed
to reduce 10% in hypoxia myoca rdiac cells o r to 40% in no rmal cells.　Conclusion　Dow n-regula tion expressions of
cardiac(SR)Ca2+-ATPase , L-type calcium channel , calsequestrin and pho spholamban might be the basis of intracel-
lula r Ca2+over load in hypox ia myocardiac cells.　Moreove r , DHC exe rts its cardiopro tection by modula ting the ex-
pression of ry anodine recepto r and calsequestrin.
Key words:　Calcium handling pro tein;　Hypoxia;　I ntracellular fr ee calcium;　Dehydeocor ydaline
通信作者:韩雅玲 , E-mail:hanyaling@263.net
　　100年前 ,人们已经开始注意到 Ca2+在生物学上
的重要性[ 1-2] 。并且许多疾病过程又都与 Ca2+密切相
·75·中华高血压杂志　2011 年 1 月第 19 卷第 1 期　Chin J Hyper tens , January 2011 , Vol.19 No.1DOI :10.16439/j.cnki.1673-7245.2011.01.017
关[ 3] ,因此 ,能调节钙离子通道功能的药物 ,既具有重
要的临床治疗学意义 ,又是重要的研究工具 。在过去
的 30年中 ,许多化学结构不同的钙通道阻断剂被发现
并广泛地用于临床。已被用于治疗心绞痛 、高血压 、心
律失常 、充血性心力衰竭和肢端动脉痉挛等心血管系
统疾病[ 4] 。以往国内外治疗所应用的钙拮抗剂多是针
对外钙内流途径 ,缺乏选择性 。因此 ,从内钙释放途径
研究钙通道药物将为冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠
心病)防治开辟一条新的途径。在既往的研究中我们
发现脱氢紫堇碱(dehydeocorydaline ,DHC)100 μmol/L
可显著减少正常氧和缺氧后心肌[ Ca2+] i ,其作用与经
典的钙通道阻断剂盐酸维拉帕米(verapamil hydro-
chloride ,Ver)作用相似;但影响程度稍弱 ,但其应用疗
效及机制尚不十分清楚 ,为此 ,本实验采用逆转录聚合
酶链反应(Rever se t ranscription-polymerase chain re-
action , RT-PCR)和 Western blot 方法对此进行了
研究 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　动物来源　出生后 1 ～ 4 d的清洁大白鼠乳鼠
150 ～ 200只 ,雌雄均可 ,由中国医科大学动物实验中心
提供 。合格证号:SYXK(辽)2003-0016)、(辽)2003-
0005 。
1.1.2　主要试剂和药品　达尔伯克氏改良伊格尔氏
培养基(ulbeccos modif ied eag les medium , DMEM)培
养基;GIBCO 公司;胎牛血清:军事医学科学院;胰蛋
白酶:日本和光纯药工业株式会社;5溴脱氧尿苷(Brd
U):Sigma公司;细菌脂多糖 , Sing 分装 ,邦定公司;钙
三磷酸腺苷酶(Ca2+-adeno sine t ripho sphatase , Ca2+-
ATPase)、磷酸受钠蛋白(phospholamban , PLB)、L 型
钙通道 、斯里兰卡肉桂碱受体 2(ryanodine receptor 2 ,
RYR2)、肌集钙蛋白(calsequest rin , CASQ)、β 肌动蛋
白(β-actin)引物:上海生工生物工程技术服务有限公
司。大鼠 Ca2+-A TPase、RYR2 单克隆抗体(一抗):武
汉博士德公司;碱性磷酸酶标记的小鼠抗大鼠 IgG(二
抗):美国 ZYMED公司。
1.1.3　主要仪器设备　PCR仪:Biometra Unio Ⅱ型
德国;电泳仪:Multiphor Ⅱ Pharmacia Bio tech ,瑞士;
超净工作台:苏州净化设备厂;二氧化碳培养箱:Queue
Bos 1901 PARKBRSBURG , 美国;倒 置显微镜;
O LYMPUS-Ix70 , JAPAN;细胞超声粉碎仪:CPS-Ⅰ
型 ,上海超声波仪器厂;RC-5C 超速离心机(最大离心
力:35 000 g):DU PONT 公司;10/35 恒温水浴震荡
仪;KAMAM TOPT , JAPAN ;电磁搅拌器:北京奥德实
验设备厂;不锈钢筛:孔径 200 μm;恒温离心机(离心
半径为 10 cm):BECKMAN 公司 。
1.2　实验方法
1.2.1　培养原代心肌细胞的制备方法 　参考 Pow ell
Farme并略加改动 。
选取大白鼠乳鼠 20 只 ,雌雄兼用 。开胸 ,迅速取
出心脏(保留主动脉 0.5 cm),立即经主动脉将心脏悬
于 Landendorf f装置上行恒流灌注 ,首先采用无钙液灌
注 5 min ,使心脏停跳;再用酶液消化和分离心肌细胞
15 min;将心室肌剪成宽为 2 cm 条状物 ,放入 K-H 液
10 mL ,搅拌 20 次后 ,通过 200 目筛网过滤;滤液以
1000转/min离心 3 min ,反复 2次后;最后细胞悬浮于
储存液中。
1.2.2　细胞收获数的计数法与细胞存活率计算方法
将细胞的悬液行台盼蓝排斥试验检查 ,细胞存活率在
95%以上 ,在 24孔培养板上培养 ,每孔起始细胞数调
整细胞数为 2×104 个 ,为每组平行计数 3个复孔。细
胞计数及台盼蓝排斥试验细胞存活率计数方法如下:
细胞计数法:取 10 μL 0.3%台盼蓝液混均后 ,再取适
量混合液滴于细胞计数板上 ,计数 4个大格的细胞数 ,
再以下述公式求出细胞数:
细胞数(个/ mL)=(4个大格数÷4)×104 ×2
细胞存活率计数方法:计算计数板中 4个大格内未蓝
染细胞再除以细胞总数 ,即为细胞存活率(%)
细胞存活率(%)=活细胞数÷细胞总数×100%。
1.2.3　实验模型方案　随机取细胞生长密度相同的
原代培养的心肌细胞 4瓶 ,分为:①对照组:未给于任
何干扰因素 。②缺氧组:用不含糖的培养液置换培养
瓶中的正常培养基后 ,再将培养瓶放入缺氧培养箱
(95%N 2 和 5%CO2)中 24 h。 ③给药组:将 DHC 注
入正常培养基中 ,其中终浓度为 1×10-4 mol/L 。④缺
氧给药组:用无糖培养基稀释 DHC 至所需浓度 ,置换
培养基 ,再将培养瓶放入缺氧培养箱 。各组心肌细胞
培养瓶在 37 ℃培养箱培养 24 h ,然后取出心肌细胞进
行检测 ,重复 5次 。
1.2.4　RT-PCR方法扩增引物　如表 1所示 ,心肌细
胞(2×106/瓶),加入 TRIZOL 试剂 2 、0.4 mL 的氯
仿 ,剧烈震荡 15 s ,再加入 75%乙醇 2 mL ,涡旋振荡漂
洗一次 ,将管内剩下的白色沉淀进行干燥 ,取少量总
RNA 以 260 nm 紫外光吸收率测定 RNA(核糖核酸 ,
ribonucleic acid)含量 ,整个反应在 20 μL 总体积中进
行合成逆转录 cDNA , 以逆转录合成 cDNA 为模板 ,
PCR扩增 Ca2+-A TPase 、 PLB 、L 型钙通道 、RYR2 、
CASQ 、β-actin基因 ,引物序列如下。
·76· 中华高血压杂志　2011 年 1月第 19 卷第 1 期　Chin J H yper tens , Januar y 2011 , Vo l.19 No.1
表 1　PCR 扩增基因引物序列
　　基　因 　　　　　　　引物序列 长度(bp) 扩增温度(℃)
Ca2+-A TPase Forward 5-T TGCAT TGCAGTCTGGATCA-3
Revers e 5-TCCAAAGCAGAGTCAT TACA-3 477 58
磷酸受钠蛋白 Forward 5-ACCT CTAGA TCTGCAGCT TG-3
Revers e 5-GT TAGGCTGGAATGGAAGAC-3 926 56
L型钙通道 Forward 5-GTACAAGAACTGAGCTGG-3
Revers e 5-GATCACCGCGT AGA TGAAGA-3 603 56
肌集钙蛋白 Forward 5-AT AGGCT T TGTGAT GG TGGA-3
Revers e 5-GCAACAAGCAGAGGAAAGTC-3 682 56
RYR Forward 5-AAGTGCCAGAGTCAGCA TTC-3
Revers e 5-AGTAGT ATCCA ATGAGCAG-3 453 55
β-actin Forward 5-ACCAACTGGGACGACATGGAAAA-3
Revers e 5-GTCAGGATCTT CATGAGGTAGT C-3 353 62
　　注:RT-PCR:逆转录聚合酶链反应技术;Ca2+-AT Pase:钙三磷酸腺苷酶;RYR:斯里兰卡肉桂碱受体。
1.2.5　免疫荧光法共定位测定心肌细胞　分别用抗
RYR2 和抗 CASQ抗体标记原代培养的心肌细胞 。用
不同荧光素标记的二抗进行免疫荧光双染色 ,共聚焦
显微镜下观察 RYR2和 CASQ 在细胞内的定位关系。
1.2.6　Western blo t(IB)方法提取蛋白　将培养原
代心肌细胞(2 ×106/瓶), 采用 Low ry 法定蛋白;
SDS-PAGE电泳分离蛋白的各组分 ,然后转印蛋白 ,免
疫检测目标蛋白 ,分用标记异硫氰酸荧光素(fluo res-
cein isothio cyanate ,FITC)化学发光检测 , X 片感光。
混合 A 和 B液 ,按照 0.125 mL/cm2 的标准 。磷酸盐
缓冲溶液(phosphate buf fered solution , PBS)洗后的
膜放在混合液中 ,蛋白面向上 ,室温下 1 min 。暗室中
X光片曝光 1 min至几十分钟 ,洗片 。
1.2.7　免疫共沉淀(IP)检测心肌细胞中 CASQ 与
RYR2 直接相互作用　将培养原代心肌细胞(2×106/瓶),
应用 anti-CASQ 抗体和 Sephrase 4B beads和免疫共
沉淀试剂盒提取细胞总蛋白中与 CASQ 相互作用的
蛋白质 ,行Western blo t检测 ,检测方法同上所述 。一
抗分别为:anti-CASQ 抗体和 ant i-RYR2 抗体。
1.2.8　统计学方法　计量数据均采用均数±标准差
( x±s)表示 ,应用 SPSS 16.0 统计分析软件对数据进
行处理 ,多组间比较采用单因素方差分析 ,组间两两比
较采用 LSD检验。以 P<0.05为差异有统计学意义。
2　结　果
2.1　DHC 对 Ca2+调控相关蛋白的 mRNA 转录的
影响
2.1.1　Ca2+调控相关蛋白的 mRNA 的半定量检测
为检测 DHC 对 Ca2+调控相关蛋白在转录水平的影
响。通过电泳成像分析系统扫描 ,作半对数曲线。随
着循环次数的增加 , Ca2+-A TPase 、 PLB 、L 型钙通道 、
RYR2 和 CASQ的含量增加 ,在 29 ～ 35个循环间呈线
性关系 ,35个循环进入平台期;而 β-act in的扩增为 28
个循环开始增加 ,在 29 ～ 37个循环间呈线性关系 ,因
此我们选择 35个循环进行 PCR扩增 ,使扩增过程在
指数增长阶段 ,此时 PCR含量与模板含量成正比。
Ca
2+-AT Pase 、PLB 、L 型钙通道 、RYR2 和 CASQ 的
与内部参考 β-act in的成直线相关 ,相关性良好。
2.1.2　Ca2+调控相关蛋白的 mRNA 转录水平的变
化(n=5)　如图 1所示 , ①Ca2+-A TPase 、PLB 、L 型
钙通道 、RYR2 和CASQ mRNA 转录的 cDN A条带位
置与理论值相符。②缺氧组与对照组相比 ,Ca2+-ATPase 、
PLB 、L 型钙通道和 CASQ 的 mRNA转录水平明显减
低 , 分别 降低 36.1%、 31.2%、 37.1%和 38.2%
(P<0.01),然而 RYR2 的 mRNA 转录水平却升高了
(P<0.05)。 ③给药组与对照组相比 , RYR2 与 CASQ
的 mRNA 转录水平明显变化(P<0.01),其中 RYR2
转录水平明显减低 40%,而 CASQ 的 mRNA 转录水
平明显增加 36%。④缺氧给药组与缺氧组相比 ,缺氧
后的 CASQ 的 mRNA 转录水平在给药后却明显增加
82%(P<0.01)。与之相反 ,给药后 RYR2 使缺氧引
起的 mRNA 转录水平有所降低 10%(P<0.05)。
⑤给药后 , CASQ mRNA 转录水平的增加与 RYR2
mRNA 转 录水 平的 下调 显著 相关 (r =0.78 ,
P<0.05)。
2.2　DHC对 RYR2 和 CASQ表达水平的变化　在
mRNA 转录水平的变化的基础上 ,图 2 Westerm blot
检测结果显示 , DHC能使正常和缺氧状态下的 CASQ
的蛋白表达相对含量明显增加 ,同时 RYR2 的蛋白表
·77·中华高血压杂志　2011 年 1 月第 19 卷第 1 期　Chin J Hyper tens , January 2011 , Vol.19 No.1
达降低 ,并与对照组相比 , 差异有统计学意义(P <
0.05 ,n=5)。这一结果与 RT-PCR 结果一致 , 提示
RYR2 和 CASQ间存在相互作用 。
为进一步阐明两种蛋白的相互作用关系 ,我们分
别应用免疫双荧光染色分析和免疫共沉淀两种方法检
测这两种蛋白在心肌细胞内的定位及表达关系。通过
荧光显微镜测定的两种蛋白在心肌细胞内的双荧光染
色证实:CASQ与 RYR2 具有明确的共定位关系(图 3)。
同时 ,应用免疫共沉淀实验也进一步证实了两种蛋白
在心肌细胞内存在明确的相互作用关系(图 4)。
　　注:M 为分子量标准;1 、5 、9为对照组;2 、6 、10为缺氧组;3 、7 、11为缺氧组;4 、8 、12为缺氧给药组。 Ca2+-ATPase:钙三磷酸腺苷酶;PLB:磷
酸受钠蛋白;RYR2 ;斯里兰卡肉桂碱受体 2;CASQ:肌集钙蛋白。
图 1　脱氢紫堇碱对离体心肌细胞的 Ca2+调控相关蛋白的 mRNA 水平影响(n=20)
　　注:RYR2 :斯里兰卡肉桂碱受体 2;CASQ:肌集钙蛋白。
图 2　RYR2 和 CASQ 蛋白表达水平的变化(n=5)
3　讨　论
心肌的收缩和舒张受细胞内的 Ca2+浓度的控制。
Ca
2+从胞外内流主要通过质膜钙离子通道 ,可分为两
种 T 、L 型。其中 L 型是一种高阈值 ,形成的电流值最
大 ,开放时间长的慢通道 ,而 T 型钙通道是一种低阈
·78· 中华高血压杂志　2011 年 1月第 19 卷第 1 期　Chin J H yper tens , Januar y 2011 , Vo l.19 No.1
值 ,单通道电流滞销 ,开放时间短 ,呈瞬时状态的快通
道 ,因此 , L 型钙通道是主要调控细胞外 Ca2+进入细
胞内的调控因子[ 7] 。本实验结果表明:缺氧后 L 型钙
通道 mRNA 转录水平明显减低(P<0.01),说明缺氧
后 ,心肌细胞收缩舒张功能下降 ,细胞内钙超载 ,通过
负反馈机制导致 L 型钙通道 mRNA 转录下降 。
　　注:A 、B为缺氧组;C 、D为缺氧给药组。RYR2:斯里兰卡肉桂碱受体 2;CASQ:肌集钙蛋白;DHC:脱氢紫堇碱。DHC使缺氧状态下的肌集
钙蛋白荧光强度表达增加 ,但是斯里兰卡肉桂碱受体 2的表达却显著降低。
图 3　RYR2 和 CASQ 蛋白表达水平的变化
　　注:RYR2 :斯里兰卡肉桂碱受体 2;CASQ:肌集钙蛋白。
图 4　缺氧及给药组 RYR2-CASQ-RYR2 免疫共沉淀反应(n=5)
　　心肌细胞内钙库的钙释放的调节因子 ,目前已经
定位发现的 RYR2 受体和 IP3受体。 IP3受体受质膜
肌醇磷脂分解产物 IP3调节 。然而对于心肌细胞更发
达是 RYR2 受体 ,这种 Ca2+通道因为对以种植物碱
ryanodine敏感 ,称为 ry anodine 受体(RYR2)钙通道。
RYR2 是引起细胞内钙释放而引起细胞内钙增高的主
要机制[ 8] 。本实验结果表明:本研究中显示缺氧后 ,
RYR2 的 mRNA 转录水平上调 , 并具有统计学意义
(P<0.05)。说明缺氧使 RYR2 作用加强 ,使胞内钙
释放增加 ,引起钙超载。
细胞内的钙库 Ca2+储存能力主要是由于存在一
类对 Ca2+高容量 、低亲和力的贮存蛋白 ,其中集肌钙
蛋白的贮存能力最强[ 9] 。本实验结果表明:缺氧后
CASQ 的 mRNA转录水平明显减低(P <0.01),说明
肌浆网中的贮钙蛋白-集肌钙蛋白结合 Ca2+的能力
下降 ,使细胞内游离钙增加 ,这也是造成细胞钙超载的
原因 。
引起心肌细胞质膜上的钙外排机制主要有两个
Ca
2+转移系统:普遍存在的高亲和力和低容量的钙泵
Ca
2+-AT P酶和低亲和力高容量的 Na+-Ca2+交换器。
Ca2+-AT P酶是一种灵敏的微调作用[ 10] 。本实验结果
表明:缺氧后 Ca2+-A TPase mRNA 转录水平明显减
低(P<0.01),显示缺氧后 ,激活钙调素 ,使 Ca2+-ATPase
对胞浆内 Ca2+的再摄取下降 ,引起质膜外排钙的能力
下降 ,这也是造成细胞钙超载的原因之一。
但是在细胞内肌浆网中运送 Ca2+的能力大 ,远远
超过细胞膜。肌浆网中的钙泵调节 ,不是直接作用于
Ca2+泵分子 , 而是通过与屏蔽 Ca2+泵活性中心的
·79·中华高血压杂志　2011 年 1 月第 19 卷第 1 期　Chin J Hyper tens , January 2011 , Vol.19 No.1
PLB ,使其磷酸化而令其从 Ca2+泵活性中心移开 ,而
使钙泵起作用———将细胞质中 Ca2+泵入肌浆网中 ,与
高亲和力的 CASQ 结合 , CASQ 可以富集总钙高达
5 mmol/L ,本实验结果表明:缺氧后 PLB mRNA 转
录水平明显减低(P<0.01),进一步证明缺氧后 ,抑制
PLB的作用 ,使胞内的 Ca2+进入肌浆网减少[ 11] 。
综上所述 ,调控心肌细胞的钙浓度是一个复杂的
过程[ 12] 。本实验结果表明:缺氧引起细胞内钙超载与
Ca
2+-AT Pase 、 PLB 、RYR2 、L 型钙通道和 CASQ 密
切相关 ,同时 ,因此 ,缺氧时 ,Ca2+-ATPase、 PLB 、L 型
钙通道和 CASQ的 mRNA 转录水平减低和 RYR2 的
mRNA 转录水平增加是导致细胞内钙超载和细胞损
伤发生的重要机制之一。
Ca2+在细胞生命活动的调节中扮演了重要的角
色 ,Ca2+又与许多疾病的发生密切相关 , 应用钙通道
阻断剂可明显减轻心肌细胞损伤 ,降低梗死面积。因
此 ,钙离子在冠心病发生过程中起重要作用 ,可以认为
冠心病同时是一种钙离子依赖性疾病。所以治疗冠心
病有效的药必须同时考虑到降低细胞内钙离子浓度。
DHC治疗冠心病的药理研究已有报道 ,目前临床上应
用 DHC醇浸膏治疗心绞痛 、心肌梗死有效;但目前临
床上多见用于治疗胃溃疡 ,治疗各种急性 、慢性炎症性
疾病及抗过敏反应;治疗血栓性疾病 ,对兔主动脉内的
血栓形成起到明显抑制作用。而对 DHC 在心血管方
面的机理研究甚少 ,尤其在分子生物学水平的研究国
内 、外尚未见报道 ,本人既往的实验结果[ 13] 认为 DHC
100 μmol/ L可显著减少正常氧和缺氧后心肌[ Ca2+] i ,
说明 DHC 通过降低钙超载 ,从而对心肌缺血有保护
作用 。本实验结果表明 , DHC是通过降低 RYR2 和升
高 CASQ 转录和蛋白表达 ,抑制了 RYR2 的功能 ,使
细胞内Ca2+释放减少 ,同时增加CASQ 对胞浆内游离
Ca
2+的再摄取功能 ,从而达到降低心肌细胞内 Ca2+浓
度 ,这样 DHC 就缓解了缺氧所致的心肌细胞钙超载 ,
提高心肌细胞抗缺氧的能力。本实验又观察到 ,
CASQ mRNA 转录水平的增加与 RYR2 的 mRNA 转
录水平下调显著相关 ,提示这两个基因表达受到协同
调节 。
综上所述 ,本研究从细胞水平提供缺氧导致心肌
细胞损伤作用机理的实验基础 ,并发现 DHC 通过作
用于 RYR2 和 CASQ 有效的降低细胞内的钙超载 ,保
护心肌细胞;提高正常心肌细胞的抗缺血的能力。同
时 ,有效地抑制缺氧导致的心肌细胞损伤 ,这就为缺氧
引起的心肌细胞损伤的防止提供了新的思路。同时 ,
DHC对缺氧的心肌细胞具有良好的钙拮抗作用 ,这为
临床上推广应用该药物提供有利的理论依据 。
本主题国内外已有的结论
　　·缺氧可以引起[ Ca2+] i增加 ,调控[ Ca2+] i增加
是通过外钙内流和内钙释放两方面的机制实现的 ,钙
调相关蛋白对细胞内钙稳态密切相关。
　　· 心肌细胞内的平衡取决于 Ca2+-A TPase、
PLB 、RYR2 、L 型钙通道和 CASQ 主要的调控因子 ,
它们是维持心肌细胞内钙稳态和心肌细胞正常活动的
基础 。
本文的新发现/新见解
　　·DHC 通过作用于 RYR2 和 CASQ 有效的降低
细胞内的钙超载 ,保护心肌细胞;提高正常心肌细胞的
抗缺血的能力。
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收稿日期:2010-03-04　　责任编辑:陈小明
·80· 中华高血压杂志　2011 年 1月第 19 卷第 1 期　Chin J H yper tens , Januar y 2011 , Vo l.19 No.1