全 文 ：中国中医急症 2014 年 7 月第 23 卷第 7 期 JETCM. July 2014，Vol. 23，No.7
内毒素血症通常导致致死性感染性休克、 多器官
功能衰竭、弥漫性血管内凝血等，病死率极高。 脱氢紫
堇碱（DHC）是中药延胡索块茎中的有效提取物，临床
常用于心血管疾病的治疗。 笔者既往研究发现内毒素
血症早期即可出现心肌损伤，而 DHC对其炎症反应有
明显抑制作用，可以保护受损的心肌组织。本研究拟进
一步观察 DHC 对内毒素血症大鼠核因子-κB （NF-
κB）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）的影响，
从而探讨 DHC对内毒素大鼠心肌损伤保护机制。现报
脱氢紫堇碱对内毒素血症大鼠心肌 NF-κB和
SOD、MDA的影响*
周晶晶 1 黄小民 1 蒋旭宏 1△ 李 杏 2
（1.浙江中医药大学附属第一医院，浙江 杭州 310006；2.浙江中医药大学，浙江 杭州 310006）
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1004-745X（2014）07-1231-03
doi：10.3969/j.issn.1004-745X.2014.07.009
【摘要】 目的 观察脱氢紫堇碱（DHC）对内毒素血症大鼠心肌核因子-κB（NF-κB）、超氧化物歧化酶（SOD）和
丙二醛（MDA）的影响，探讨 DHC 对内毒素血症大鼠心肌损伤的保护作用及其机制。 方法 采用直接尾静脉
注射内毒素的方法建立大鼠内毒素血症心肌损伤模型，50 只 Wistar 大鼠随机分成 5 组：NS 对照组、LPS 模
型组、DHC 低剂量组、DHC 中剂量组、DHC 高剂量组。 采用比色法检测血清 SOD 含量、TBA 法测定血清含
量，免疫组化组检测心肌组织 NF-κB 的表达。 结果 LPS 模型组大鼠血清 SOD 含量明显减低，而 MDA 含量
明显增高，心肌组织中 NF-κB 蛋白水平明显增高，与 NS 对照组比较差异有统计学意义（P < 0.01）；予 DHC
干预后，DHC 低、中剂量组可明显使降低的 SOD 活性升高，而高剂量组与 LPS 模型组差异无统计学意义（P ＞
0.05）；DHC 各剂量组可明显降低血清 MDA 含量，与 LPS 模型组相近（P < 0.01）；DHC 各剂量组大鼠心肌组
织 NF-κB 蛋白水平明显下降，与 LPS 模型组比较差异明显（P < 0.01）。 结论 DHC 可以通过降低内毒素血症
大鼠心肌组织内 NF-κB 活性和提高大鼠抗氧化能力，对心肌产生保护作用。
【关键词】 内毒素血症 脱氢紫堇碱 NF-κB SOD MDA
In fluence of Dehydeocorydaline on the Expression of NF-κB，SOD，and MDA in Myocardium of Rats
with Endotoxemia ZHOU Jingjing，HUANG Xiaomin，JIANG Xuhong，et al. The First Affiliated Hospital of
Zhejiang Chinese Medicine University，Zhejiang，Hangzhou 310006，China
【Abstract】 Objective: To study the influence of dehydeocorydaline on the expression of NF-κB，SOD，and MDA
in myocardium rats with endotoxemia，and to investigate protective mechanism of DHC on myocardial injury mod-
el． Methods： Tail intravenous injection of endotoxin was used to establish myocardial injury model in rats with
endotoxemia. 50 male Wistar rats were randomly divided into 5 groups: NS control group，LPS model group，DHC
low dose group，DHC medium dose group，and DHC high dose group. Colorimetry was applied to detect the con-
tents of serum SOD，Total Bile Acids method to detect the content of serum MDA，and immunohistochemical SP
method to detect myocardial tissue NF-κB. Results： Serum SOD content in LPS model group significantly re-
duced，MDA content obviously increased，and NF-κB protein levels in myocardial tissue significantly increased.
Compared with NS control group，the difference was statistically significant（P < 0.01）. After DHC intervention，ac-
tivities of SOD in DHC low，middle dose groups obviously increased，but difference of high dose group had no sta-
tistical significance with that of LPS model group. Serum MDA content obviously reduced in each DHC dose
group，and there were significant differences compared with LPS model group （P < 0.01）. NF-κB protein levels in
each DHC dose group significantly decreased. Compared with LPS model group，the difference was statistically
significant （P < 0.01）. Conclusion： DHC can reduce activity of NF-κB in myocardial tissue of rats with endotox-
emia and improve the antioxidant ability to protect myocardium.
【Key words】 Endotoxemia；Dehydeocorydaline；NF-κB；SOD；MDA
·研究报告·
*基金项目：浙江省中医药管理局项目（2011za034）
△通信作者
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中国中医急症 2014 年 7 月第 23 卷第 7 期 JETCM. July. 2014，Vol. 23，No.7
表 1 血清 SOD、MDA、含量变化（x±s）
组 别 n NF-κB（MOD）
NS 对照组 10 0.16±0.060*
LPS 模型组 10 0.35±0.014
DHC 低剂量组 10 0.26±0.010*
SOD（U/mL） MDA（nmol/mL）
179.41±4.82* 3.29±0.34*
136.88±4.27 7.04±0.21
158.73±3.45* 4.85±0.43*
DHC 中剂量组 10 0.22±0.015*165.58±6.25* 4.37±0.34*
DHC 高剂量组 10 135.88±2.34 6.33±0.19* 0.31±0.023*
与 LPS 模型组比较，*P＜ 0.01。
告如下。
1 材料与方法
1.1 动物和试剂 清洁级雄性 Wistar 大鼠 50 只由浙
江中医药大学实验动物中心提供， 体质量 200~220 g，
SPF级。脂多糖（LPS）购自美国 Sigma公司试剂，批号：
H20055058；DHC 为大连美仑生物技术有限公司产品，
批号：20120510；SOD （批号：20130622）、MDA （批号：
20130406） 检测试剂盒购自南京建成生物有限公司；
NF-κB p65 抗体购自美国 Santa Cruz 公司， 免疫组织
化学两步法试剂盒、浓缩型 DAB 试剂盒（ZLI-9032）为
北京中杉金桥公司产品。
1.2 造模及给药 50 只 Wistar 大鼠在实验室分笼饲
养 1周，室温维持 25 ℃，自由进食、饮水。 以随机数字
表法将大鼠分为 5 组：NS 对照组、LPS 模型组、DHC
低、中、高（2.5、5、10 mg/kg）剂量组，每组 10只。 LPS模
型组和 DHC 低、中、高剂量组大鼠分别经尾静脉注入
内毒素 5 mg/kg，NS 对照组给予等容积生理盐水。 在
静脉注完内毒素后，DHC 低、中、高剂量组大鼠再经
尾静脉分别注入 DHC 溶液 2.5、5、10 mg/kg。 NS 对照
组、LPS 模型组给予等容积生理盐水，方法同 DHC 干
预组。
1.3 标本采集与检测 给药 1 h 后予 25%的水合氯
醛溶液麻醉大鼠，腹主动脉取血，分离血清，采用比色
法检测血清 SOD含量、TBA 法测定血清含量， 操作严
格按照试剂盒说明书；取左心室心肌组织，以 10%甲
醛固定，NF-κB 的蛋白表达检测采用免疫组化法两步
法，心肌组织石蜡切片经常规脱蜡至水，高压热修复后
予 3% H2O2 溶液阻断内源性过氧化物酶 10 min；PBS
洗 5 min×3 次； 滴加一抗，37 ℃孵育 60 min；PBS 洗
5 min×3次；滴加二抗，37℃孵育 60 min；PBS洗 5 min×
3次；DAB显色、复染、脱水透明后封片。阳性者表现为
心肌胞浆内棕黄色颗粒沉积，染色完成后，进行 400倍
的显微照相和 MetaMorph/BX41 型图象数据分析系统
测定积分吸光度，进行数据分析。
1.4 统计学处理 应用 SPSS 17.0 统计软件。 计量资
料以（x±s）表示，各组均数比较采用单因素方差分析。
P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 各组大鼠血清 SOD、MDA含量比较 见表 1。 LPS
模型组大鼠血清 SOD含量明显减低，而 MDA含量明显
增高，与 NS 对照组比较差异有统计学意义（P < 0.01）；
DHC 低、中剂量组 SOD 水平升高，而高剂量组与 LPS
模型组相近；DHC 各剂量组血清 MDA 含量均明显降
低，与 LPS模型组比较差异有统计学意义（P < 0.01）。
2.2 各组大鼠心肌组织 NF-κB 的表达比较 见表 1，
图 1。 LPS模型组大鼠心肌组织中 NF-κB蛋白水平明
显增高，与 NS对照组比较差异有统计学意义（P<0.01），
而 DHC低、中、高剂量均能使心肌组织中 NF-κB 蛋白
水平明显下降，与 LPS 模型组比较差异有统计学意义
（P < 0.01）。
3 讨 论
近年来， 大量研究表明氧化应激是导致心血管系
统结构功能异常的重要原因之一。内毒素血症过程中，
单核巨噬细胞在收到病原体刺激后，产生呼吸爆发，可
以产生大量活性氧（ROS）。 ROS 是指由氧化还原反应
产生，具有化学性质活泼的含氧功能基团的化合物，其
参与生成 ONOO-及 H2O2，ONOO-可激活核聚酶聚合
酶，从而造成心肌收缩力的下降 ［1］。 MDA 是机体脂质
过氧化代谢的毒性产物， 是判断自由基损伤的重要指
标。 测定组织 MDA 含量可估计组织脂质过氧化损伤
程度和氧自由基的生成情况，而 SOD 是体内最重要的
自由基清除剂之一， 能够催化超氧阴离子自由基发生
歧化反应，消除体内自由基链式反应对机体的损害，减
轻自由基链式反应对机体的损害。 NF-κB是一类能与
多种基因启动子部位的 κB 位点特异结合， 并促进转
录的蛋白质总称， 静息状态下通过 I-κB 紧密结合以
无活性的形成存在于细胞浆中，对细胞的生长、分化、
黏附、凋亡及炎症反应等具有十分重要的调节作用 ［2］，
NF-κB 是第一个被证明能被 ROS 激活的真核细胞转
录因子，并且两者之间存在正反馈效应［3］。 内毒素血症
发生时，NF-κB 亦能被 LPS 刺激激活， 刺激信号可使
I-κB 磷酸化，从而与 NF-κB 解离，研究显示 LPS 刺
激后可在 1h 内引起 NF-κB 的大量激活［4-5］，激活后的
DHC 中剂量组 DHC 高剂量组
图 1 各组大鼠心肌组织 NF-κB 的表达
NS 对照组 LPS 模型组 DHC 低剂量组
（下转第 1288页）
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中国中医急症 2014 年 7 月第 23 卷第 7 期 JETCM. July. 2014，Vol. 23，No.7
NF-κB 能诱导表达血管内皮细胞黏附分子和肿瘤坏
死因子， 这些细胞因子可直接引起血管内皮细胞和心
肌细胞的损伤。
本研究采用尾静脉注射 LPS 建立内毒素血症大
鼠模型，不同剂量 DHC进行干预，研究结果显示，DHC
低、中、高各剂量均可明显降低血清 MDA 含量，降低
心肌组织中 NF-κB 含量，与模型组相比差异明显（P <
0.01），中、高剂量 DHC 可显著升高 SOD 活性，而高剂
量组与模型组水平相近。因此笔者认为 DHC可能是通
过降低大鼠氧化应激，增加 SOD 活性，保护自由基清
除系统， 减轻脂质过氧化反应及有害代谢产物对心肌
细胞的损伤，并且联合调控 NF-κB 活化，降低 NF-κB
活性，抑制细胞因子激活，从而减轻炎症反应，减轻细
胞因子对心肌细胞的损伤， 达到对内毒血症大鼠心肌
保护作用。
参 考 文 献
［1］ Francisco G Soriano，Antonio C． Nogueira，et al. Potential
role of poly （adenosine 5′ -diphosphate -ribose）polymerase
activation in the pathogenesis of myocardial contractile dys-
function associated with human septic shock ［J］ ． Crit Care
Med，2006，34（8）：1073-1079.
［2］ Clermonte，vrgelyc V，Girard C，et al. Cellula rinjury accoiat-
ed with extracorporeal circulation ［J］ . Ann Catdiol Angeiol
（Paris），2002，51（12）：3843-3846.
［3］ 游琪，蔡久英. 氧化应激与心肌损伤的研究进展［J］. 临床
荟萃，2005，20（19）：1127-1128.
［4］ 罗斌，张斌，何韵，等.大鼠急性心肌缺血后心肌 NF-kB的检
测及其法医学意义［J］.中国法医杂志，2005，20（5）：257-259.
［5］ Han SJ，Ko HM，Choi JH，et a1． Molecular mechanisms for
lipepelys accharide -induced biphasie activation of nuclear
factor-kappa B （NFKB） ［J］． J Biol Chem，2002，277 （47）：
44715-44721．
（收稿日期 2014-04-08）
（上接第 1232页）
提高临床疗效，甚至达到立竿见影的效果。
3.2 胸胁岔气针刺鱼际用咳气法案 患某， 男性，56
岁，大学教师。 因搬书上架，右胁岔气疼痛伴功能活动
受限 1 d 求诊。 查患者胸背略向右屈曲，转侧不利，语
音低沉压抑，右胁下第 4～6肋压痛。 遂针右鱼际，针尖
略向上臂倾斜，得气后轻捻转使针感向上传导至腋。留
针，令患者留意痛处，轻咳送气，每分钟内约 4～5 次。
开始不必用力，渐次加重咳的力量，随咳捻针，约 5 min
后，患者感疼痛明显缓解，试作上半身转侧及伸展，10
余分钟，活动自如，呼吸均匀，痊愈而归。
按：手太阴肺经起于中焦下络大肠，还循胃口，上
膈属肺，从肺系横出腋下。 经脉所过处，因用力而岔气
失于升降。针刺鱼际穴并咳气以促流通上下，气滞解而
功成。此病取内关也可。 总当针刺得气后留针，令患者
作如清嗓动作般的下意识咳气，但不咯出痰，使咳闷而
声重，使胸廓呼吸肌产生运动、胸腔内气机为之震动，
促进胸胁部气机调畅的方法用于胸胁部岔气机髓，胸
胁疼痛诸证。
3.3 咽喉疼痛针两合谷吞津利咽案 患某， 男性，30
岁，吹奏乐师。 慢性咽炎，每因感冒或作业后咽炎痛复
发。来诊时，声音嘶哑，咽中疼痛而干，自觉咽部不顺。查
咽部殷红充血，有少许滤泡。遂针两合谷得气后留针，令
患者吞津咽气 （气通过咽中阻滞部位）。 每分钟吞 5～6
次，开初患者尚觉咽中若有阻滞，第 4、5次时自觉减轻，
以后更有缓解，至症状消失而去，每发，皆照此法取效。
按：“四总穴”谓“面口合谷收”。 本证病在咽喉，与
手足少阴经，阴跷脉均有关系。针刺时可取内关、照海，
或太阴肺鱼际等均可。本案直取合谷，取其简也。 要紧
处在得气留针后令患者炼津吞咽， 待口腔内有唾液时
慢咽唾液。任其徐徐顺咽而下，不可以急下。 屡炼无唾
液者则咽气，让唾液或气徐徐经过喉咽部病所而下，使
咽喉部顺畅，本法适用于咽喉部疾患，如扁桃体炎、咽
炎，喉炎及梅核气。
3.4 脘腹疼痛针两足三里留针深呼吸案 患某，女
性，47 岁。 忽腹中急痛，自觉气机胀滞失于流转，接诊
时， 已有人刺双侧足三里穴未效。 查见患者两腿伸直
平卧于床，痛在大腹胃肠，气滞未通，不通则未效。嘱患
者屈膝，复针足三里、并慢慢作腹式呼吸，由浅入深。即
渐觉腹中气窜，嗳气及矢气后而舒。
按：“四总穴”谓，“肚腹三里留”。腹痛针刺足三里应
属正统的穴法。其先刺未效者，良由胃肠气机未畅。再刺
时，作腹式呼吸并逐渐加大幅度，使肠腑气机由浅入深，
逐步运动而畅达，故效。 施行本法，以屈膝仰卧为佳。 若
患者疼痛明显，深呼吸运动受限可选用摩腹运动法。
3.5 膀胱下垂气陷用升提穴法并提肛案 患某，女
性，干部，67 岁。 患膀胱下垂，反复发作尿频、尿急，严
重时膀胱下垂至尿道口，行走不适。 予针双足三里、百
会，双提托，令患者作提肛收腹动作每分钟 6 次，自觉
气畅膀胱升，治疗效果优于平素针刺静留针术法。
按：中气下陷可致内脏下垂，如胃下垂、肾下垂等。
治疗基本上主张采取升提之穴法，或针或灸。本案妙在
针刺得气后， 令患者着力收小腹或上腹， 并作提肛运
动，使腹内脏器随意念上升。 其节奏要缓，每三五次均
匀呼吸后提肛 1次，适用于脏器下垂诸症。施行本法时
亦以平卧屈膝位为好。
（收稿日期 2014-02-19）
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