全 文 ：＊通讯作者
文章编号：１００７－４２８７（２０１４）１１－１７５２－０３
岩大戟内酯Ｂ对小鼠内毒素血症模型的
保护作用研究
王　慧１，李晓鸥２，张晓伟２，潘晨宇３，刘　宁３＊
（１．吉林省疾病预防控制中心，吉林 长春１３００６２；２．吉林省肿瘤医院，吉林 长春１３００１２；
３．吉林大学第二医院，吉林 长春１３００４１）
摘要：目的　研究岩大戟内酯Ｂ（ｊｏｌｋｉｎｏｌｉｄｅ　Ｂ，ＪＢ）对内毒素血症模型小鼠的治疗作用。方法　采用腹腔注射内
毒素制备小鼠内毒素血症模型，观察不同脓毒ＪＢ（１０、５和２．５ｍｇ／ｋｇ）对内毒素血症模型小鼠的治疗效果。用ＥＬＩＳＡ
法检测ＬＰＳ刺激后８ｈ小鼠血清中炎性细胞因子ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＩＬ－６的含量并检测腹腔灌洗液中白细胞数目。结
果　ＪＢ以浓度依赖的方式降低内毒素血症模型小鼠死亡率，并显著降低血清中炎性细胞因子ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＩＬ－６
含量以及腹腔灌洗液中白细胞数目。结论　ＪＢ通过抑制内毒素血症小鼠炎性细胞因子表达以及炎性细胞浸润发挥
其保护作用，可以成为内毒素血症治疗的候选药物。
关键词：岩大戟内酯Ｂ；内毒素血症；肿瘤坏死因子－α；白介素－１β；白介素－６
中图分类号：Ｒ３９２ 文献标识码：Ａ
Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｊｏｌｋｉｎｏｌｉｄｅ　Ｂ　ｏｎ　ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ　ＷＡＮＧ　Ｈｕｉ，ＬＩ　Ｘｉａｏ－ｏｕ，ＺＨＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｗｅｉ，ｅｔ
ａｌ．（Ｊｉｌｉｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ａｎｄ　Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００６２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｊｏｌｋｉｎｏｌｉｄｅ　Ｂ　ｏｎ　ｍｏｕｓｅ　ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ
ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｉｎｔｒａ－ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｎｇ　ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ
ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＪＢ　ａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　１０，５ａｎｄ　２．５ｍｇ／ｋｇ　ｏｎ　ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｂｌｏｏｄ
ｗａｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ＴＮＦ－α，ＩＬ－１βａｎｄ　ＩＬ－６ｌｅｖｅｌｓ　ｂｙ　ＥＬＩＳＡ　ａｔ　８ｈａｆｔｅｒ　ＬＰＳ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ
ｗｈｉｔｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｈｅｍｏｃｙｔｏｍｅｔｅｒ　ｃｏｕｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｔｏｎｅｕｍ　ｗａｓｈ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ　ｒａｔｅ　ｏｆ
ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ　ｗａｓ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｂｙ　ＪＢ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｉｎ　ａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ．Ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ
ｗｈｉｔｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｓｕｃｈ　ａｓ　ＴＮＦ－α，ＩＬ－１βａｎｄ　ＩＬ－６ｗｅｒｅ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｂｙ　ＪＢ　ｉｎ　ａ
ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＪＢ　ｅｘｅｒｔｓ　ｉｔｓ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ　ｍｏｕｓｅ　ｂｙ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　ａｎｄ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｃｅｌｓ　ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｊｏｌｋｉｎｏｌｉｄｅ　Ｂ　ｗｉｌ　ｂｅ　ｔｈｅ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｄｒｕｇ　ｃａｎｄｉｄａｔｅ
ｆｏｒ　ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ．．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｊｏｌｋｉｎｏｌｉｄｅ　Ｂ；ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ；ＴＮＦ－α；ＩＬ－１β；ＩＬ－６
（Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｄｉａｇｎ，２０１４，１８：１７５２）
　　内毒素血症（ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ）是由血中细菌或病
灶内细菌释放出大量内毒素至血液，或输入大量内
毒素污染的液体而引起的一种病理生理表现。内毒
素血症是造成临床危重病例死亡的重要原因之一，
也是至今尚未攻克的医学难题［１，２］。内毒素血症可
导致脓毒性休克（ｓｅｐｓｉｓ　ｓｈｏｃｋ）、全身炎症反应综合
征（ＳＩＲＳ）或多功能器官衰竭（ＭＯＤＳ），死亡率极
高，仅美国全年就有３００００－１０００００病人因患内毒素
血症得不到有效治疗而死亡［３］。
大戟属药用植物常常用于治疗关节炎、水肿、结
核、牛皮癣、疥疮、无名肿毒等疾患［４］。大戟属植物
化学成分十分复杂，但其最主要的成分为二萜类成
分。该属植物所具有的多种活性，如抗肿瘤、抗炎
等，多与其所含的二萜类成分密切相关［４－６］，因而引
起了国内外许多学者对该属植物种活性成分研究的
极大重视。最近的几项研究表明，自狼毒中分离出
的几种松香烷二萜化合物ｊｏｌｋｉｎｏｌｉｄｅ　Ｂ、１７－Ｈｙ－
ｄｒｏｘｙ－ｊｏｌｋｉｎｏｌｉｄｅ　Ｂ、１７－Ｈｙｄｒｏｘｙ－ｊｏｌｋｉｎｏｌｉｄｅ　Ａ及其
衍生物 ＨＪＢ－１通过抑制 ＮＦ－ＫＢ以及 ＭＡＰＫ激酶
磷酸化的方式下调ＬＰＳ引起的小鼠巨噬细胞炎性
细胞因子以及炎性介质表达［７，８］，但是尚没有体内
实验的研究报道。
本研究中我们通过给小鼠预先注射不同剂量的
ＪＢ研究了ＪＢ对内毒素血症小鼠模型的保护作用。
１　材料与方法
１．１　实验试剂与材料　６周龄雄性Ｃ５７／６小鼠购
—２５７１— Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｄｉａｇｎ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２０１４，Ｖｏｌ　１８，Ｎｏ．１１
自吉林大学实验动物中心，岩大戟内酯Ｂ自狼毒大
戟根部分离（纯度９９％），小鼠ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＩＬ－６
ＥＬＩＳＡ检测试剂盒购自ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ。
１．２　实验动物分组及模型制备　取１０８只６周龄
体重２０ｇ左右的雄性Ｃ５７／６小鼠，随机分为５组，
正常对照组、ＬＰＳ单独刺激组，ＪＢ高剂量组（１０ｍｇ／
ｋｇ），ＪＢ中剂量组（５ｍｇ／ｋｇ）、ＪＢ低剂量组（２．５ｍｇ／
ｋｇ），地塞米松对照组（５ｍｇ／ｋｇ），每组１８只小鼠。
ＬＰＳ单独刺激组及给药组小鼠分别腹腔注射５０
ｍｇ／ｋｇ的ＬＰＳ（Ｅ　ｃｉｌｉ　Ｏ１１１：Ｂ４），正常对照组给予同
等剂量的ＰＢＳ。ＬＰＳ刺激前１ｈ，分别腹腔注射不
同剂量的ＪＢ或地塞米松。饲养并密切观察５天。
观察期间，自第一次给药开始，每隔１２ｈ给药一次。
１．３　细胞因子检测　ＬＰＳ刺激小鼠８ｈ后，每组随
机选取５只小鼠，麻醉后活杀，无菌取心脏血，１　０００
ｇ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，分离血清做细胞因子检测。待检
血清样本以ＰＢＳ缓冲液１∶４稀释后按照试剂盒说
明书所提供的方法检测小鼠血清中 ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β
和ＩＬ－６的含量。
１．４　白细胞检测　在小鼠死亡３０ｍｉｎ内或ＬＰＳ
刺激５天后，存活的小鼠麻醉处死。用２ｍｌ冰冷的
ＰＢＳ灌洗小鼠腹腔，并收集灌洗液。灌洗液经４２０
ｇ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ后，用ＰＢＳ重悬，使用血球计数版
检测腹腔灌洗液中的白细胞数目。
１．５　统计学处理　计量结果以均数±标准差表示，
数据使用ＰＲＩＳＭ 分析软件处理（Ｇｒａｐｈｐａｄ），Ｐ＜
０．０５表示差异具有统计学意义。
２　结果
２．１　ＪＢ对内毒素血症模型小鼠生存率的影响　如
图１所示，ＪＢ以浓度依赖的方式提高内毒素血症小
鼠的生存率，在１０ｍｇ／ｋｇ的浓度下，ＪＢ几乎对内毒
素血症小鼠具有完全的保护作用，其保护效果略低
于地塞米松，但没有明显的统计学差异。在５ｍｇ／
ｋｇ这一较低的浓度下，ＪＢ也明显的改善内毒素血
症小鼠的生存率。ＪＢ在１０ｍｇ／ｋｇ和５ｍｇ／ｋｇ浓度
下与ＬＰＳ单独刺激组相比较均有统计学差异（Ｐ＜
０．０００１和Ｐ＜０．０５）。
图１　ＪＢ对内毒素血症模型小鼠生存率的影响
２．２　ＪＢ对内毒素血症模型小鼠炎性细胞因子表达
以及小鼠腹腔白细胞聚集的影响　如表１所示，和
ＬＰＳ单独刺激组相比，ＪＢ以浓度依赖的方式降低血
清中ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＩＬ－６的含量以及小鼠腹腔中
的白细胞聚集。１０ｍｇ／ｋｇ的ＪＢ对血清中炎性细胞
因子表达以及腹腔灌洗液中白细胞聚集的效应与地
塞米松相当。
表１　ＪＢ对内毒素血症模型小鼠血清炎性细胞因子表达及腹腔白细胞聚集的影响
ＴＮＦ－α（ｐｇ／ｍｌ） ＩＬ－１β（ｐｇ／ｍｌ） ＩＬ－６（ｐｇ／ｍｌ） ＷＢＣ／ｍｌ
正常对照组 ２７４．６±１６．８　 １３４．３±５．６　 ３０１．２±１８．９　 ５２４±１３２
ＬＰＳ单独刺激组 ４７８４．３±２１１．２ａ ２６９０．２±２９０．４ａ ６７２０．１±４９２．５ａ ３２３５±２１０
ＪＢ　２．５ｍｇ／ｋｇ　 ３１５２．５±４３１．４ａ ２１７６．３±３４７．９ａ ５８２２．５±３１６．９ａ ２８５４±１４３ａ
ＪＢ　５ｍｇ／ｋｇ　 ７９３．７±５１．３ａ，ｂ　 ８４５．６±３０．８ａ，ｂ　 ７７０．９±５４．５ａ，ｂ　 ２１０８±３２１ａ
ＪＢ　１０ｍｇ／ｋｇ　 ３８７．３±２３．５ｂ　 １２７．２±１３．６ｂ　 ２９９．８±４５．３ｂ　 ９４２±１７６ｂ
Ｄｅｘ　５ｍｇ／ｋｇ　 １９３．７±５１．３ｂ　 １４５．６±３０．８ｂ　 ２７０．９±５４．５ｂ　 ７６５±１２１ｂ
　　注：与正常对照组相比，ａＰ＜０．０５；与ＬＰＳ单独刺激组相比，ｂ　Ｐ＜０．０５。
３　讨论
内毒素血症的发病机制至今尚不十分清楚，研
究表明，机体天然及获得性免疫应答过度活化在内
毒素血症的病理进程中占有重要地位。内毒素及其
活化的 ＴＬＲ４－ＭｙＤ８８信号传导通路在内毒素血症
相关的疾病病理进程中起着重要作用，靶向内毒素
及ＴＬＲ４－ＭｙＤ８８信号传导通路的治疗策略得到广
泛的研究并取得一些重要进展。当前基于这一策略
的治疗手段主要分为两大类：内毒素的去除和抑制
ＴＬＲ活化引起的过度炎症反应［９，１０］。
狼毒用于炎症性疾病的治疗已经有悠久的历
史，此前的研究进一步表明岩大戟内酯Ｂ（ＪＢ）等狼
毒活性单体组分对通过ＬＰＳ－ＴＬＲ４－ＭｙＤ８８通路诱
导产生的炎性细胞因子和炎性介质如 ＴＮＦ－α、ＩＬ－
１β、ＩＬ－６、ＰＧＥ２以及 ＮＯ等的表达有很好的抑制效
应［７，８］，因此，我们推测ＪＢ可能对内毒素血症也有保
—３５７１—中国实验诊断学　２０１４年１１月　第１８卷　第１１期
护或治疗效应。为了证实这一假设，通过预先给予
内毒素血症小鼠不同剂量的ＪＢ，我们发现ＪＢ以浓度
依赖的方式对内毒素血症小鼠具有保护作用，并且
这一保护作用可能是通过抑制ＬＰＳ引起的小鼠血
清炎性细胞因子如 ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６等表达以及
炎性细胞浸润实现的。我们的研究表明ＪＢ可能成
为一种潜在的内毒素血症等炎症性疾病的治疗药
物。
参考文献：
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［１０］Ｗｉｅｒｓｉｎｇａ　ＷＪ．Ｃｕｒｒｅｎｔ　ｉｎｓｉｇｈｔｓ　ｉｎ　ｓｅｐｓｉｓ：ｆｒｏｍ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｔｏ
ｎｅｗ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｔａｒｇｅｔｓ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ　Ｏｐｉｎ　Ｃｒｉｔ　Ｃａｒ，２０１１，１７（５）：４８０．
［１１］唐　虹，刘　群，孙国德．内毒素及内毒素血症治疗研究进展
［Ｊ］．医学综述，２００５，１１（２）：１０９．
（收稿日期：２０１４－０３－２０）
基金基金：新疆维吾尔自治区自然基金（２０１２２１１Ａ０６４）
＊通讯作者
文章编号：１００７－４２８７（２０１４）１１－１７５４－０５
炙甘草汤减缓兔右心房颤所致心肌纤维化作用
娜几娜·吾格提＊，艾力曼·马合木提，王　坤，冯　艳，赵　利，杨　志
（新疆医科大学第一附属医院 心衰科，新疆 乌鲁木齐８３００５４）
摘要：目的　研究炙甘草汤逆转快速起搏兔右心房（ＲＡＰ）诱导心房颤动（ＡＦ）致右心耳心肌心肌纤维化的作用。
方法　新西兰大白兔动物模型随机分为假手术组（Ａ组）：植入电极不行快速起搏；起搏组（Ｂ组）：行短期快速起搏兔
右心房１２ｈ致ＡＦ模型；炙甘草汤水煎液阴性方组（Ｃ组）：给予炙甘草汤阴性方水煎液灌胃２次／ｄ，连续３０ｄ后行短
期快速起搏兔右心房１２ｈ致ＡＦ模型；炙甘草汤组（Ｄ组）：给予炙甘草汤水煎液灌胃２次／ｄ，连续３０ｄ后行短期快速
起搏兔右心房１２ｈ致ＡＦ模型；每组实验动物各８只。建立房颤兔模型，行兔右心耳 Ｍａｓｓｏｎ染色和免疫组化方法检
测基质金属蛋白酶－９（ＭＭＰ－９）蛋白表达。检测右心耳组织场电位时程（ｆＡＰＤ），并观察炙甘草汤对右心耳ｆＡＰＤ的作
用。结果　成功建立快速起搏右心房诱导房颤兔模型，Ｍａｓｓｏｎ染色显示Ｂ组和Ｃ组心肌纤维化明显增加，Ｄ组心肌
纤维化减弱。ＭＭＰ－９结果显示，Ｂ组和Ｃ组 ＭＭＰ－９呈强阳性，Ｄ组呈弱阳性。Ｂ组和Ｃ组ｆＡＰＤ明显缩短，差异有
统计学意义（Ｐ＜０．０５）。给予炙甘草汤水煎液之后，可作用于房颤兔右心耳组织ｆＡＰＤ导致ｆＡＰＤ延长（Ｐ＞０．０５）。
结论　炙甘草汤可逆转房颤兔心肌纤维化，同时缩短ｆＡＰＤ的时程。
关键词：快速起搏右心房；心房颤动；微电极芯片；炙甘草汤
中图分类号：Ｒ５４１ 文献标识码：Ａ
Ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｚｈｉｇａｎｃａｏ　Ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ｒｉｇｈｔ　ａｔｒｉａｌ　ｆｉｂｒｉｌａｔｉｏｎ　Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ　ｒａｂｂｉｔｓ
　Ｎａｊｉｎａ·Ｗｕｇｅｔｉ，Ａｉｌｉｍａｎ·Ｍａｈｅｍｕｔｉ，ＷＡＮＧ　Ｋｕｎ，ｅｔ　ａｌ．（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｈｅａｒｔ　Ｆａｉｌｕｒｅ，ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３００５４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　Ｚｈｉｇａｎｃａｏ　Ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｒｉｇｈｔ　ａｔｒｉａｌ　ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ　ｏｆ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ
ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｒａｐｉｄ　ａｔｒｉａｌ　ｐａｃｉｎｇ（ＲＡＰ）ｉｎ　ｒａｂｂｉｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ　ｗｈｉｔｅ　ｒａｂｂｉｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｓｈａｍ
ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ（Ａ　ｇｒｏｕｐ）ｗｉｔｈ　ｉｍｐｌａｎｔｅｄ　ｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓ，ｎｏ　ｒａｐｉｄ　ｐａｃｉｎｇ；ｐａｃｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ（Ｂ　ｇｒｏｕｐ）ｗｉｔｈ　ＡＦ　ｍｏｄｅｌ　ｉｎｄｕｃｅｄ
—４５７１— Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｄｉａｇｎ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２０１４，Ｖｏｌ　１８，Ｎｏ．１１