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冬青卫矛内生放线菌Streptomyces flavofuscus G1发酵液中抑菌活性成分研究



全 文 :农药学学报 2015,17(5) :616 - 621
Chinese Journal of Pesticide Science http:/ /www . nyxxb. com. cn
收稿日期:2015-07-09;录用日期:2015-08-18.
作者简介:曹艳,女,硕士研究生;E-mail:756929806@ qq. com;* 姬志勤,通信作者 (Author for correspondence) ,男,副研究员,主要从事天
然产物化学研究,E-mail:jizhiqin@ nwsuaf. edu. cn
基金项目:国家自然科学基金资助项目(31371973,31301700) ;中央高校基本科研业务费专项(QN2013009).
·研究简报· DOI:10. 3969 / j. issn. 1008-7303. 2015. 05. 17
冬青卫矛内生放线菌 Streptomyces flavofuscus G1
发酵液中抑菌活性成分研究
曹 艳, 魏少鹏, 姬志勤*
(西北农林科技大学 植物保护学院,陕西 杨凌 712100)
摘 要:从冬青卫矛内生放线菌 Streptomyces flavofuscus G1 的发酵液中分离得到化合物 G13 和
G19。经核磁共振波谱及质谱分析,并结合相关文献,两个化合物分别被鉴定为 phencomycin
(G13)和 4-deacetyl-(-)-griseusin A(G19)。抑菌活性测定结果表明:G19 对水稻白叶枯病菌
Xanthomonas oryzae pv . oryzae、铜绿假单孢菌 Pseudomonas aeruginosa(1. 203 1)、蜡状芽孢杆菌
Bacillus cereus(1. 184 6)及金黄色葡萄球菌 Staphyloccocus aureus(1. 008 9)等供试病原细菌具有
强烈的抑制作用,其最低抑菌浓度(MIC)值均为 1. 56 μg /mL;对苹果树腐烂病菌 Valsa mali 和小
麦赤霉病菌 Fusarium graminearum 菌丝生长亦有明显的抑制作用,其 IC50值分别为 14. 70 和
24. 35 μg /mL。而 G13 对植物病原真菌油菜菌核病菌 Sclerotinia sclerotiorum 和苹果树腐烂病菌
V. mali菌丝生长有强烈的抑制作用,其 IC50值分别为 5. 21 和 4. 82 μg /mL。
关键词:冬青卫矛;内生菌;Streptomyces flavofuscus G1;抑菌活性
中图分类号:S482. 28 文献标志码:A 文章编号:1008-7303(2015)05-0616-06
Investigation on antimicrobial compounds from fermentation
broth of Streptomyces flavofuscus G1,an endophyte isolated
from Euonymus japonicas
Cao Yan, Wei Shaopeng, Ji Zhiqin*
(College of Plant Protection,Northwest A & F University,Yangling 712100,Shaanxi Province,China)
Abstract:Two antimicrobial compounds,G13 and G19,were isolated from fermentation broth of
actinomycete Streptomyces flavofuscus G1,an endophyte isolated from Euonymus japonicas. The
structures of G13 and G19 were identified as phencomycin(G13)and 4-deacetyl-(-)-griseusin A
(G19) ,respectively,based on the 1H NMR and 13C NMR and ESI-MS data,as well as the published
literatures. G19 showed strong antibacterial activity against Xanthomonas oryzae pv . oryzae,
Pseudomonas aeruginosa,Bacillus cereus and Staphylococcus aureuse,with minimum inhibitory
concentration (MIC)value of 1. 56 μg /mL. In addition,G19 could also effectively inhibit the
mycelial growth of plant pathogenic fungi Valsa mali and Fusarium graminearum,and the IC50 values
were 14. 70 and 24. 35 μg /mL,respectively. G13 exhibited strong antifungal activity against the
mycelial growth of Sclerotinia sclerotiorum and V. mali,with IC50 values of 5. 21 and 4. 82 μg /mL,
No. 5 曹 艳等:冬青卫矛内生放线菌 Streptomyces flavofuscus G1 发酵液中抑菌活性成分研究 617
respectively.
Keywords:Euonymus japonicas;endophytes;Streptomyces flavofuscus G1;antimicrobial activity
农用抗生素是现代农药的重要组成部分,从微
生物中寻找新型农用抗生素则是新农药创制的重要
途径之一[1]。植物内生菌(endophytes)是指在其生
活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种
组织和器官内部的一类微生物,并且不会引起植物
组织出现明显的病变[2]。作为一种重要的微生物
类群,从植物内生菌次生代谢物中发现具有新颖分
子骨架的生物活性化合物,是近年来天然产物药物
研究的一个热点领域[3]。植物内生菌也是筛选抗
菌、杀虫和除草活性物质的一个重要资源[4–5]。在
从内生菌代谢物中寻找具有新的农药活性物质的研
究中,本课题组从冬青卫矛植株中分离出一株具良
好抗菌活性的菌株(编号:G1)。初步抑菌活性研究
表明,G1 菌株发酵液对多种病原菌具有良好的抑制
作用,为明确其发酵液的抑菌活性成分,本研究采用
大孔树脂吸附和硅胶柱层析等技术,从 G1 菌株发
酵液中分离出其主要抑菌活性成分为 G13 和 G19。
通过核磁共振波谱及质谱技术,结合相关文献对其
结构进行了鉴定,并对其抑菌活性进行了初步评价。
1 材料与方法
1. 1 供试材料
1. 1. 1 供试菌株 放线菌 G1,于 2014 年 9 月从西
北农林科技大学校园一株冬青卫矛根部分离获得,
初步鉴定为 Streptomyces flavofuscus G1,保存于西
北农林科技大学农药研究所。
1. 1. 2 培养基 高氏一号培养基(可溶性淀粉
20 g、NaCl 0. 5 g、KNO3 1. 0 g、K2HPO4·3H2O
0. 5 g、MgSO4·7H2O 0. 5 g、FeSO4·7H2O 0. 01 g、琼
脂 15. 0 g、纯净水 1 000 mL,pH值 7. 4 ~ 7. 6) ,用于
G1 菌株斜面及平板培养;小米液体培养基(小米
10. 0 g、葡萄糖 10. 0 g、氯化钠 2. 5 g、蛋白胨 3. 0 g、
碳酸钙 1. 0 g、硫酸铵 1. 0 g、纯净水 1 000 mL) ,用
于 G1 菌株摇瓶发酵;牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(牛
肉膏 3. 0 g、蛋白胨 10. 0 g、氯化钠 5. 0 g、琼脂
15. 0 g、纯净水 1 000 mL,pH 值 7. 2 ~ 7. 4)和
Mueller-Hinton肉汤培养基(杭州大和微生物试剂
有限公司)用于病原细菌培养;PDA 培养基(马铃薯
200 g、葡萄糖 20. 0 g、琼 脂 15. 0 g、纯 净 水
1 000 mL)用于病原真菌培养。所有培养基均在
121 ℃、1 × 105 Pa高压下灭菌 30 min备用。
1. 1. 3 供试病原细菌 枯草芽孢杆菌 Bacillus
subtilis(1. 008 8)、蜡状芽孢杆菌 Bacillus cereus
(1. 184 6)、铜绿假单孢菌 Pseudomonas aeruginosa
(1. 203 1)、金黄色葡萄球菌 Staphyloccocus aureus
(1. 008 9 )、大 肠 埃 希 氏 菌 Escherichia coli
(1. 163 6) ,购自中国普通微生物菌种保藏管理中
心。白菜软腐病菌 Erwinia carotovora 和猕猴桃溃
疡病菌 Pseudomonas syringae pv. actinidiae,由西北
农林科技大学植物病理研究室提供;烟草青枯病菌
Ralstonia solanacearum,由西南大学植物保护学院
提供;水稻白叶枯病菌 Xanthomonas oryzae pv.
oryzae,由西北农林科技大学无公害农药研究中心
提供。将病原细菌接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养
基,于 37 ℃下培养 1 d。
1. 1. 4 供试病原真菌 番茄灰霉病菌 Botrytis
cinerea、小麦赤霉病菌 Fusarium graminearum、苹果
炭疽病菌 Colletotrichum gloeosporioides、玉米弯孢
病菌 Curvularia lunata、烟草赤星病菌 Alternaria
alternate、茄子黄萎病菌 Verticillium dahlia、西瓜枯
萎病菌 Fusarium oxysporum、苹果树腐烂病菌 Valsa
mali和油菜菌核病菌 Sclerotinia sclerotiorum,由西
北农林科技大学农药研究所提供;棉花枯萎病菌
Fusarium oxysporum f . sp. vasinfectum,由西北农林
科技大学植物病理研究室提供。将病原真菌接种于
PDA 培养基,于 25 ℃下培养 3 ~ 7 d。
1. 1. 5 主要仪器及试剂 HPD-100 大孔吸附树脂,
河北宝恩树脂科技有限公司;甲醇(HPLC 级) ,美国
Tedia公司;柱层析硅胶(粒径 54 ~ 74 μm) ,青岛海
洋化工厂;氨苄青霉素(USP 级) ,国药集团化学试
剂有限公司;95%嘧菌酯(azoxystrobin)原药,先正
达(中国)投资有限公司;石油醚和乙酸乙酯均为市
售分析纯。
分析型 HPLC 系统:Shimadzu LC-6AD 高效液
相色谱仪,具二极管阵列检测器,日本岛津公司;
Bruker RPX 500 MHz 核磁共振仪,德国 Bruker 公
司;Thermo LCQ Advantage MAX 质谱仪,美国
Thermo 公司。
1. 2 试验方法
1. 2. 1 菌株鉴定 参照文献中的方法进行 G1 菌
株基因组 DNA 的提取,并以此为模板进行 PCR 扩
增、扩增产物纯化后测序,利用 16S rDNA 序列对比
618 农 药 学 学 报 Vol. 17
分析对其进行分类鉴定[6]。
1. 2. 2 种子液制备 将 G1 菌株接种于高氏一号
培养基上,于 25 ℃下培养 7 d,接种于 100 mL 小米
液体培养基中,于 180 r /min、28 ℃下振荡培养16 h。
1. 2. 3 发酵液制备 将 20 mL 种子液接种于
80 mL 小米液体培养基中,于 180 r /min、28 ℃下振
荡培养 7 d。
1. 2. 4 活性成分的分离及鉴定 将 20 L 发酵液用
多层纱布过滤后经大孔吸附树脂 HPD-100(1. 0 kg)
吸附,甲醇(3. 0 L)解析,将甲醇解析液减压浓缩至
约 200 mL,浓缩液用少量硅胶拌匀晾干后进行硅胶
柱层析,依次用 V(石油醚)∶ V(乙酸乙酯)= 8∶ 1、
6∶ 1、4∶ 1、2∶ 1、1∶ 1,乙酸乙酯,V(乙酸乙酯)∶ V(甲
醇)= 8 ∶ 1、6 ∶ 1、4 ∶ 1、2 ∶ 1、1 ∶ 1及甲醇梯度洗脱,每
100 mL 收集 1 份,经薄层层析(TLC)检测后合并相
同组分,共得 7 个组分:Fr. 1 (11 mg)、Fr. 2
(90 mg)、Fr. 3(48 mg)、Fr. 4(244 mg)、Fr. 5(291
mg)、Fr. 6(356 mg)和 Fr. 7(387 mg) ,其中 Fr. 3 和
Fr. 4 具有较强的抑菌活性。经 HPLC 检测发现 Fr.
3 为纯化合物,标记为化合物 G13(48 mg) ;Fr. 4 经
进一步硅胶柱层析纯化,得化合物 G19(39mg)。
1. 2. 5 抑菌活性测定
1. 2. 5. 1 对病原细菌的抑制作用 采用肉汤微量
稀释法[7]。从琼脂培养基中挑取 4 ~ 5 个相同形态
的供试菌菌落,接入 1. 0 mL 灭菌的 Mueller-Hinton
肉汤中,于 35 ℃下培养至轻度混浊后转入 0. 9%生
理盐水中,调整到麦氏浊度为 0. 5,再用 Mueller-
Hinton 肉汤稀释 200 倍,其接种量相当于 7. 5 ×
105 CFU /mL。将稀释好的接种液转入 96 孔板中,
每孔加接种液 100 μL,再分别加入 100 μL 不同质
量浓度的药液,使最终浓度分别为 100、50、25、
12. 5、6. 25、3. 13、1. 56、0. 78 和 0. 39 μg /mL,每板
另设不加药剂的空白对照、氨苄青霉素(ampicillin)
阳性对照和加药不接菌阴性对照。每处理重复
3 次。于 35 ℃下培养 20 h,记录药剂对供试细菌的
最低抑菌浓度(MIC)。
1. 2. 5. 2 对病原真菌的抑制作用 采用菌丝生长
速率法[8]。准确称取 10 mg 待测化合物,先用
500 μL 二甲基亚砜(DMSO)溶解后,用无菌水配制
成 10 mg /mL 的母液,再用无菌水梯度稀释得到系
列浓度药液。将 1. 0 mL 不同质量浓度的供试药液
与 9. 0 mL 融化的 PDA 培养基混匀,倒入无菌培养
皿中制成带药培养基平板。待培养基凝固后,接入
直径为 4 mm 的菌饼,菌丝面朝下。以嘧菌酯
(azoxystrobin)作为阳性对照。每处理设 3 次重复。
于 25 ℃恒温箱中培养 72 ~ 96 h,用十字交叉法测量
菌落生长直径,按(1)式计算菌丝生长抑制率。
菌丝生长抑制率 /% =[(对照菌落直径 -处理
菌落直径)/(对照菌落直径 -菌饼直径) ]× 100
(1)
所得数据用 SPSS 软件求出毒力回归方程及抑
制中浓度(IC50值) ,并进行相关性分析。
2 结果与分析
2. 1 G1 菌株的分类鉴定
序列分析结果表明,菌株 G1 的 16S rDNA 序列
长度为 1 457 bp,将该序列上传至 NCBI GenBank,
获得登记号 KT252874,与 GenBank 中的序列进行
相似性比较发现,其与 Streptomyces flavofuscus
(EU593623. 1)的亲缘关系最近,因此初步鉴定其为
Streptomyces flavofuscus G1。
2. 2 活性成分分离及结构鉴定
以活性追踪为指导,经大孔吸附树脂吸附,甲醇
解析,硅胶柱层析等方法从菌株 S. flavofuscus G1
发酵液中分离鉴定出 2 个活性化合物 G13(48 mg)
和 G19(39 mg)。
G13,黄色结晶,熔点:260. 1 ~ 262. 4 ℃(文献
值[9]:263 ℃) ;UV (λMeOH) :251,365 nm;ESI-MS:
[M + H]+,m/z 283,相对分子质量为 282。1H NMR
(CDCl3,500 MHz) ,δ:4. 13 (s,3H) ,8. 01 ~ 8. 08
(m,2H) ,8. 35 (d,J = 7. 0 Hz,1H) ,8. 40 (d,J =
7. 0 Hz,1H) ,8. 60 (dd,J = 1. 0,7. 5 Hz,1H) ,
9. 00 (dd,J = 1. 0,7. 5 Hz,1H) ,15. 17 (br s,
1H) ;1 3C NMR (CDCl3,125 MHz) ,δ:52. 9,125. 1,
130. 8,131. 5,131. 8,132. 1,133. 0,135. 7,138. 2,
139. 3,140. 0,141. 5,143. 6,165. 5,166. 2。1H、13 C
NMR 数据与 Chatterjee 等[10]报道的 phencomycin
基本一致,故将化合物 G13 鉴定为 phencomycin(图
式 1)。
G19,橘黄色粉末,熔点:169. 4 ~ 171. 2 ℃ (文
献值[11]:172 ~ 174 ℃) ; [α] D
24 = - 201(c0. 1,
MeOH) [文献值[11][α]D
24 = - 198(c0. 1,MeOH) ];
UV (λMeOH) :252,430 nm;ESI-MS: [M + H]
+,m/z
403,相对分子质量为 402。1H NMR (CDCl3,
500 MHz) ,δ:1. 25 (d,J = 6. 0 Hz,3H) ,1. 94 ~
1. 96 (m,1H) ,2. 07 ~ 2. 08 (m,1H) ,2. 61 ~ 2. 62
(m,1H) ,2. 70 ~ 2. 72 (m,1H) ,2. 75 ~ 2. 76 (m,
1H) ,3. 03 (dd,J = 5. 0,18. 0 Hz,1H) ,4. 16 ~ 4. 18
No. 5 曹 艳等:冬青卫矛内生放线菌 Streptomyces flavofuscus G1 发酵液中抑菌活性成分研究 619
图式 1 化合物 phencomycin (G13)和 4-deacetyl-
(-)-griseusins A (G19)的结构
Scheme 1 Structure of phencomycin (G13)and
4-deacetyl-(-)-griseusins A (G19)
(m,1H) ,4. 22 ~ 4. 23 (m,1H) ,4. 82 ~ 4. 84 (m,
2H) ,5. 27 (d,J = 2. 5 Hz,1H) ,7. 27 ~ 7. 29 (m,
1H) ,7. 62 (d,J = 4. 5 Hz,2H) ,11. 9 (s,1H) ;
1 3C NMR (CDCl3,125 MHz) ,δ:20. 6,36. 4,39. 1,
62. 7,66. 4,68. 1,68. 3,68. 7,98. 5,115. 4,119. 4,
125. 4,131. 2,136. 9,138. 4,143. 1,162. 1,174. 0,
181. 8,187. 4。1H、13C NMR 数据与 Igarashi 等[11]报
道的 4-deacetyl-(-)-griseusins A 基本一致,故将
化合物 G19 鉴定为 4- deacetyl-(-)-griseusins A
(图式 1)。
2. 3 化合物的抑菌活性
2. 3. 1 对病原细菌的抑制作用 由表 1 可以看出:
化合物 G19 对 9 种供试病原细菌均有明显的抑制
作用,对水稻白叶枯病菌、铜绿假单孢菌、蜡状芽孢
杆菌及金黄色葡萄球菌的抑菌活性尤为突出,其
MIC 值均为 1. 56 μg /mL;而化合物 G13 仅有微弱
的抗细菌活性。
表 1 化合物 G13 和 G19 对 9 种供试病原细菌的MIC值
Table 1 MIC values of G13 and G19 against nine strains of bacteria
供试病原细菌
Tested bacteria
最低抑菌浓度 MIC /(μg /mL)
G1-13 G1-19 氨苄青霉素钠 ampicillin
大肠埃希氏菌 E. coli 100 12. 5 3. 13
水稻白叶枯病菌 X. oryzae pv. oryzae 50 1. 56 6. 25
铜绿假单孢菌 P. aeruginosa > 100 1. 56 > 100
猕猴桃溃疡病菌 P. syringae pv. actinidiae 100 6. 25 12. 5
烟草青枯病菌 R. solanacearum 100 3. 13 12. 5
白菜软腐病菌 E. carotovora > 100 50 6. 25
蜡状芽孢杆菌 B. cereus 50 1. 56 6. 25
枯草芽孢杆菌 B. subtilis > 100 50 1. 56
金黄色葡萄球菌 S. aureus 100 1. 56 6. 25
2. 3. 2 对病原真菌的抑制作用 由表 2 可以看
出:化合物 G13 对油菜菌核病菌和苹果树腐烂病
菌菌丝生长有强烈的抑制作用,在 50 μg /mL 下
抑制率分别为 94. 7% 和 87. 5%;对番茄灰霉病
菌抑菌活性次之,抑制率为 57. 1%。化合物 G19
对苹果树腐烂病菌、小麦赤霉病菌和玉米弯孢病
菌菌丝生长的抑制效果较明显,在 50 μg /mL 下
抑制率分别为 70. 8%、60. 0% 和 54. 2%。进一
步毒力测定结果(表 3)表明:化合物 G13 对油菜
菌核病菌、苹果树腐烂病菌和番茄灰霉病菌 IC50
值分别为 5. 21、4. 82 和 41. 56 μg /mL;化合
物 G19对苹果树腐烂病菌、小麦赤霉病菌和
玉米弯孢病菌的 IC50值分别为 14. 70、24. 35 和
32. 35 μg /mL。
3 讨论
Phencomycin最初由 Chatterjee等[10]于 1995 年
从印度土壤放线菌 Streptomyces sp. HIL Y-9031725
代谢产物中首次分离获得。抑菌研究结果表明:
Phencomycin 对革兰氏阳性细菌表现出较弱的活
性,且无任何抗真菌活性;1997 年,德国学者
Pusecker等[9]从一株海洋链霉菌发酵液中再次分离
到该化合物,仅测定了其对两种革兰氏阳性菌的抑
菌活性;2009 年,我国学者韩晓等[12]从经核糖体工
程改造的野生放线菌菌株代谢物中分离得到
phencomycin,并研究了其抗肿瘤活性;2014 年,韩国
学者 Han等[13]从 Burkholderia glumae strain 411 gr-
6 代谢产物中分离到该化合物,评价了其对革兰氏
620 农 药 学 学 报 Vol. 17
阳性细菌抑菌活性。本研究首次从冬青卫矛内生放
线 菌 Streptomyces flavofuscus G1 分 离 获 得
phencomycin,系统评价了其对多种农用致病细菌和
致病真菌的抑菌活性,结果表明,phencomycin 对油
菜菌核病菌和苹果树腐烂病菌的菌丝生长具有强烈
抑制作用,但对供试细菌仅表现出微弱的抑菌活性。
表 2 化合物 G13 和 G19 对 10 种供试病原真菌菌丝生长的抑制作用(50 μg /mL)
Table 2 Inhibition of G13 and G19 against the mycelial growth of ten tested fungi (50 μg /mL)
供试病原真菌
Tested fungi
抑制率 Inhibition rate /%
G13 G19 嘧菌酯 azoxystrobin
番茄灰霉病菌 B. cinerea 57. 1 47. 6 85. 7
苹果树腐烂病菌 V. mali 87. 5 70. 8 100. 0
小麦赤霉病菌 F. graminearum 35. 0 60. 0 80. 0
玉米弯孢病菌 C. lunata 37. 5 54. 2 58. 3
烟草赤星病菌 A. alternate 33. 3 23. 8 71. 4
茄子黄萎病菌 V. dahliae 31. 6 31. 6 52. 6
油菜菌核病菌 S. sclerotiorum 94. 7 52. 6 100. 0
西瓜枯萎病菌 F. oxysporum 25. 0 25. 0 75. 0
苹果炭疽病菌 C. gloeosporioides 29. 4 29. 4 94. 1
棉花枯萎病菌 F. oxysporum f. sp. vasinfectum 29. 4 17. 7 58. 8
表 3 化合物 G13 和 G19 对供试病原真菌毒力
Table 3 Toxicity of G13 and G19 against tested fungi
化合物
Compounds
供试真菌
Pathogenic fungi
回归方程
Regression equation R
2 IC50(95% CL)/
(μg /mL)
G-13 苹果树腐烂病菌 V. mali y = - 0. 69 + 1. 07x 0. 991 4. 82(2. 11 ~ 7. 65)
番茄灰霉病菌 B. cinerea y = - 2. 45 + 1. 51x 0. 993 41. 56(28. 20 ~ 71. 73)
油菜菌核病菌 S. sclerotiorum y = - 1. 21 + 1. 69x 0. 993 5. 21(2. 63 ~ 7. 80)
G-19 苹果树腐烂病菌 V. mali y = - 1. 15 + 0. 98x 0. 997 14. 70(8. 04 ~ 24. 96)
玉米弯孢病菌 C. lunata y = - 1. 20 + 0. 80x 0. 996 32. 35(17. 46 ~ 91. 51)
小麦赤霉病菌 F. graminearum y = - 1. 13 + 0. 81x 0. 995 24. 35(12. 16 ~ 63. 61)
嘧菌酯
azoxystrobin
苹果树腐烂病菌 V. mali y = - 0. 85 + 1. 84x 0. 985 2. 91(2. 09 ~ 4. 80)
番茄灰霉病菌 B. cinerea y = - 2. 41 + 1. 97x 0. 981 17. 12(12. 45 ~ 24. 87)
油菜菌核病菌 S. sclerotiorum y = - 0. 64 + 1. 98x 0. 996 2. 13(1. 52 ~ 3. 33)
玉米弯孢病菌 C. lunata y = - 1. 27 + 0. 88x 0. 993 27. 76(15. 81 ~ 61. 85)
小麦赤霉病菌 F. graminearum y = - 2. 66 + 2. 00x 0. 991 21. 87(15. 77 ~ 33. 72)
4-Deacetyl-(-)-griseusin A 最初由日本学者
Igarashi等[11]于 1995 年从放线菌 MJ932-SF3 的发
酵液中分离得到,并报道了其抑菌活性,发现其对革
兰氏阳性菌具有良好的抑制作用。2009 年,土耳其
学者 Urgen 等[14] 从 Streptomyces griseus strain
M-33-5 的代谢产物中再次分离到该化合物,报道其
对两种革兰氏阳性细菌和两种肿瘤细胞表现出显著
的抑制效果。4-deacetyl-(-)-griseusin A 对植物
病原菌抑菌活性的研究未见报道。本研究结果表
明,4-deacetyl-(-)-griseusin A 对供试 10 种病原
真菌具有一定的抑制作用,其对苹果树腐烂病菌和
小麦赤霉病菌菌丝生长的抑制效果尤为突出;对水
稻白叶枯病菌、铜绿假单孢菌、蜡状芽孢杆菌、金黄
色葡萄球菌及烟草青枯病菌均有强烈的抑制作用。
参考文献(Reference):
[1] 赵娜,王海丽,魏少鹏,等. 放线菌 C-411 发酵液抑菌活性
及活性成分[J]. 植物保护学报,2013,40(1) :73 - 77.
Zhao Na,Wang Haili,Wei Shaopeng,et al. Antibacterial
activity and active ingredients of Streptomyces albus C-411
No. 5 曹 艳等:冬青卫矛内生放线菌 Streptomyces flavofuscus G1 发酵液中抑菌活性成分研究 621
[J]. Acta Phytophy Sin,2013,40(1) :73 - 77. (in Chinese)
[2] Strobel G,Daisy B. Bioprospecting for microbial endophytes
and their natural products[J]. Microbiol Mol Biol Rev,2003,
64(7) :491 - 502.
[3] 俞晓平,陈列忠,申屠旭萍. 植物内生菌及其代谢物在生物
农药创制中的应用 [J]. 浙江农业学报,2006,18(5) :
289 - 293.
Yu Xiaoping,Chen Liezhong,Shentu Xuping. Review on
plant endophyte and its secondary metabolites in the application
of producing bio-pesticides[J]. Acta Agri Zhejiangensis,
2006,18(5) :289 - 293. (in Chinese)
[4] 李海燕,刘丽. 产生物活性物质植物内生菌的研究进展
[J]. 天然产物研究与开发,2004,16(5) :482 - 485.
Li Haiyan,Liu Li. Recent advances on bioactive com pounds
producing endophytes[J]. Nat Prod Res Dev,2004,16(5) :
482 - 485. (in Chinese)
[5] 功能. 生物农药发展的机遇与挑战[J]. 中国生物防治,
2001,17(4) :184 - 185.
Gong Neng. Opportunities and challenges in the development of
biological pesticides[J]. Chin J Biolog Contr,2001,17(4) :
184 - 185. (in Chinese)
[6] 奥斯伯,金斯顿,塞德曼等. 精编分子生物学实验指南
[M]. 第 4 版. 北京:科学出版社,2005.
Ausubel F M,Kingston R E,Seidman J G,et al. Short
Protocols in Molecular Biology [M]. 4th ed. Beijing:
Scientific Press,2005. (in Chinese)
[7] National Committee for Clinical Laboratory Standards. CLSI
document M7-A8 Methods for dilution antimicrobial
susceptibility tests for Bacteria that grow aerobically;approved
standard [S]. 8th ed. Wayne, PA, USA: Clinical and
Laboratory Standards Institute,2009.
[8] 吴文君. 植物化学保护实验技术导论[M]. 西安:陕西科学
与技术出版社,1987.
Wu Wenjun. Introduction to Experimental Techniques of Plant
Chemical Protection [M]. Xi an: Shanxi Scientific &
Technical Press,1987. (in Chinese)
[9] Pusecker K, Laatsch H, Helmke E, et al.
Dihydrophencomycin methyl ester,a new phenazine derivative
from a marine streptomycete[J]. J Antibiot,1997,50(6) :
479 - 483.
[10] Chatterjee S,Vijayakumar E K S,Franco C M M,et al.
Phencomycin,a new antibiotic from a Streptomyces species HIL
Y-9031725[J]. J Antibiot,1995,48(11) :1353 - 1354.
[11] Igarashi M,Chen W,Tsuchida T,et al. 4-Deacetyl-(- )-
griseusins A and B,new naphthoquinone antibiotics from an
actinomycete[J]. J Antibiot,1995,48(12) :1502-1505.
[12] 韩晓,崔承彬,韩小贤,等. 放线菌野生株代谢功能的核糖
体工程改造与新产抗肿瘤活性产物研究[J]. 国际药学研究
杂志,2009,36(6) :435 - 446.
Han Xiao,Cui Chengbin,Han Xiaoxian,et al. Alteration of
metabolic function of wild-type actinomycete strain by ribosome
engineering and the metabolites newly produced with antitumor
activity[J]. J Int Pharm Res,2009,36(6) :435 - 446. (in
Chinese)
[13] Han J W,Kim J D,Lee J M,et al. Structural elucidation and
antimicrobial activity of new phencomycin derivatives isolated
from Burkholderia glumae strain 411 gr-6 [J]. J Antibiot,
2014,67(10) :721 - 723.
[14] Urgen M,Kocaba爧 F,Nalbantsoy A,et al. Bioassay-guided
isolation of antibacterial and cytotoxic compounds from the
mesophilic actinomycete M-33-5 [J]. Nat Prod Commun,
2010,5(2) :249 - 252.
(责任编辑:金淑惠)