全 文 ：天然产物研究与开发 NatProdResDev2008, 20:466-468
文章编号:1001-6880(2008)03-0466-03
　
　
　收稿日期:2007-03-20　　　接受日期:2007-05-25
＊通讯作者 E-mail:hufz@nwipb.ac.cn
藏药提宗龙胆和线叶龙胆花中四种苦苷类成分的 HPLC测定
许传梅 1, 2 ,董　琦 1 ,星玉秀 1, 2 ,胡凤祖 1＊
1中科院西北高原生物研究所 , 西宁 810001;2中科院研究生院 , 北京 100049
摘　要:应用 HPLC分析方法同时测定藏药提宗龙胆和线叶龙胆两种植物花中落干酸 、獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷 、
獐牙菜苷 4种苦苷类成分的含量。采用 EconosphereC18色谱柱(250 × 4.6 mm, 5 μm), 以甲醇-0.5%乙酸为流
动相进行梯度洗脱 ,流速为 1.0mL/min;检测波长为 245nm。结果表明 ,除提宗龙胆中未检出獐牙菜苦苷外 ,其
它成分均在两种植物中存在 ,但含量存在一定的差异。
关键词:藏药;提宗龙胆;线叶龙胆;落干酸;獐牙菜苦苷;龙胆苦苷;獐牙菜苷;HPLC
中图分类号:R284.1;Q946 文献标识码:A
DeterminationofFourIridoidGlycosidesinTibetanMedicine
GentianatizuensisFranch.andGentianafarreribyHPLC
XUChuan-mei1, 2 , DONGQi1 , XINGYu-xiu1, 2 , HUFeng-zu1＊
1NorthwestPlateauInstituteofBiology, theChineseAcademyofSciences, Xining810001 , China;
2GraduateUniversityoftheChineseAcademyofSciences, Beijing100049 , China
Abstract:Thecontentsoffouriridoids(loganicacid, swertiamarin, gentiopicroside, sweroside)inGentianatizuensis
Franch.andGentianafarreriwereanalyzedbyHPLC.TheanalysiswasperformedonEconosphereC18(250×4.6 mm, 5
μm)column, withthesolutionof0.5% aceticacidandmethanolasmobilephase, ataflowrateof1.0mL/min.Thede-
tectionwavelengthwas254 nm.TheresultsindicatedthatswertiamarinwasnotdetectedinGentianatizuensisFranch.,
andthecontentsoffouriridoidsinthesetwoplantswerediferent.
Keywords:Tibetanmedicine;GentianatizuensisFranch.;Gentianafarreri;loganicacid;swertiamarin;gentiopicroside;
sweroside;HPLC
　　提宗龙胆(GentianatizuensisFranch.)和线叶龙
胆(Gentianafarreri)被藏医作为 “邦见 ”使用 , 《晶珠
本草》记载:邦见治毒病 ,各种热症 ,喉炎热闭;按花
色分为白 、蓝和黑三类 ,分别是 “邦见嘎保 ”、“邦见
温保”、“邦见那保 ”[ 1] 。提宗龙胆也称白花龙胆 ,线
叶龙胆又称蓝花龙胆 ,在藏药中分别作为邦见嘎保
和邦见温保使用 [ 2] ,以花入药 ,用于治疗气管炎 、咳
嗽 、天花等。对龙胆植物中苦苷类成分的研究由来
以久[ 3-7] ,但多集中于根 、根茎的研究 ,其中有效成分
为环烯醚萜苷类[ 3] ,主要包括龙胆苦苷 、獐牙菜苦
苷等。目前尚未有提宗龙胆 、线叶龙胆花中苦苷类
成分含量测定的报道。本文应用 HPLC法 ,对上述
两种植物花中 4种苦苷类成分 ,即落干酸(loganic
acid)、獐牙菜苦苷(swertiamarin)、龙胆苦苷(genti-
opicroside)、獐牙菜苷(sweroside),进行了定量分析 ,
以期对龙胆花的质量控制提供一定的科学依据。
1　材料与方法
1.1　仪器
Waters515高效液相色谱仪;Waters2996二极
管阵列检测器;KQ-100E型超声波清洗器(昆山超
声仪器科技有限公司);MOLELEMENT元素型超纯
水机(上海摩勒生物科技有限公司)。
1.2　试剂与材料
落干酸 、獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷 、獐牙菜苷对照
品(中国药品生物制品检定所),超纯水 ,甲醇(色谱
纯),乙酸(分析纯)。
样品购自西藏 ,经本所何廷农研究员鉴定为提
宗龙胆和线叶龙胆 。
1.3　色谱条件
色谱柱:EconosphereC18 (250 × 4.6 mm, 5
μm)。流动相 A:水(含 0.5%乙酸),流动相 B:甲
醇 。梯度洗脱程序为:0 ～ 20 min, B为 19%;20 ～
35 min, B为 19% ～ 25%;35 ～ 40 min, B为 25% ～
19%。流速:1.0 mL/min;检测波长为 245 nm;柱
温:30 ℃;进样量:10 μL。该色谱条件下对照品及
样品的 HPLC色谱分离图见图 1。
图 1　对照品(A)、线叶龙胆(B)、提宗龙胆(C)的色谱图
Fig.1　HPLCchromatogramofstandards(A), Gentianafarreri(B)andGentianatizuensisFranch.(C)
注:1 ～ 4分别代表落干酸 、獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷 、獐牙菜苷。 1-4referstologanicacid, swertiamarin, gentiopicrosideandsweroside, respectively.
1.4　对照品溶液的制备
分别精密称取落干酸 、獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷 、
獐牙菜苷对照品适量 ,置于 10mL容量瓶中 ,加入甲
醇溶解 ,并定容至刻度 ,作为贮备液。分别精密量取
上述贮备液各 1 mL至 10mL容量瓶中 ,用甲醇稀释
至刻度 ,摇匀 ,作为混合对照品溶液 ,其浓度为:落干
酸 1.30 mg/mL,獐牙菜苦苷 0.44 mg/mL,龙胆苦苷
2.12mg/mL,獐牙菜苷 0.023mg/mL。
1.5　供试品溶液的制备
精密称取干燥的龙胆花粉末(过 60目筛 ,石油
醚脱脂 ,干燥)0.2g,置具塞锥形瓶中 ,加入甲醇 20
ml, 40 ℃超声处理 30 min,冷却至室温 ,过滤 ,滤液
置于 25 mL容量瓶中 ,用甲醇定容 ,摇匀。
2　结果与讨论
2.1　线性关系的考察
取混合对照品溶液 ,用甲醇逐级稀释一倍 ,按上述
色谱条件测定 4种成分各自的峰面积。以对照品浓度
为横坐标(X),相对应的峰面积为纵坐标(Y)绘制标准
曲线 ,得到 4种苦苷类的回归方程(见表 1)。
表 1　4种苦苷类成分的回归方程及参数
Table1　Linerequationsandfactorsoffouriridoidglycosides
对照品
Standard
线性方程
Linerequation
相关系数
r
落干酸 Loganicacid Y=5033.5X– 29213 0.9994
獐牙菜苦苷 Swertiamarin Y=3675.3X– 16237 0.9997
龙胆苦苷 GentiopicrosideY=8566.3X– 355955 0.999
獐牙菜苷 Sweroside Y=16634X– 11409 0.9991
2.2　精密度实验
精密吸取混合对照品溶液 ,进样 10 μL,连续进
样 5次 ,进行精密度试验 。测得落干酸峰面积的
RSD为 1.14%,獐牙菜苦苷为 1.02%,龙胆苦苷为
1.23%,獐牙菜苷为 1.37%。
2.3　重复性实验
平行称取线叶龙胆花粉末 5份 ,每份 0.2 g,按
“2.3”项下方法制备溶液 ,按上述色谱条件测定峰
面积 ,测得落干酸 RSD为 1.21%, 獐牙菜苦苷为
1.60%,龙胆苦苷为 0.79%,獐牙菜苷为 1.55%。
2.4　加样回收率实验
平行称取线叶龙胆花粉末 3份 ,每份 0.2 g,分
别加入混合对照品溶液 0.5、1、1.5 mL,按 “ 2.3”项
下方法制备溶液 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,计算
回收率 ,得到落干酸 、獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷 、獐牙菜
苷的回收率分别为 94.61%、 98.24%、100.05%、
98.64%。
2.5　样品含量测定
精密称取线叶龙胆花和提宗龙胆花各 0.2 g,按
“2.3”项下方法制备溶液 ,按上述色谱条件测定 ,重
复进样 3次 ,得到落干酸 、獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷 、獐
牙菜苷的峰面积积分值 ,利用线性方程计算 4种苦
苷类成分的含量 ,结果见表 2。
2.6　讨论
2.6.1　对传统藏药运用 HPLC方法分析其苦苷类
成分 ,为对其进行质量控制以及进一步的研究开发
提供一定的理论依据。本实验成功分离了藏药提宗
467Vol.20 许传梅等:藏药提宗龙胆和线叶龙胆花中四种苦苷类成分的 HPLC测定
表 2　样品苦苷类成分含量测定结果
Table2　Contentsofiridoidglycosidessamples
提宗龙胆 GentianatizuensisFranch. 线叶龙胆 Gentianafarreri
平均含量%
Averagecontent
RSD%
(n=3)
平均含量%
Averagecontent
RSD%
(n=3)
落干酸 Loganicacid 0.048 0.15 1.00 0.69
獐牙菜苦苷 Swertiamarin 未检出 - 0.595 1.56
龙胆苦苷 Gentiopicroside 0.562 0.16 4.48 0.99
獐牙菜苷 Sweroside 0.055 1.17 0.035 1.21
龙胆和线叶龙胆两种植物花中的 4种苦苷类成分 ,
并进行了定量分析 ,为进行藏药 “邦见 ”的质量研究
奠定了基础 。
2.6.2　因花中脂溶性成分较多 ,故先用石油醚回流
提取 1h[ 8] ,再进行苦苷类成分的提取。对于苦苷
类成分的分离 ,采用等度洗脱时 ,各个组分之间未能
达到基线分离。通过一系列的试验 ,最终确定用甲
醇 -0.5%乙酸溶液的梯度洗脱程序 ,可使各个组分
得到良好的分离 。
2.6.3　测定结果表明 , 4种苦苷类成分在线叶龙胆
花中皆存在 ,其中尤以龙胆苦苷含量最高 ,达 4%。
提宗龙胆花中未检出獐牙菜苦苷 ,且其它三种苦苷
类成分含量也明显低于线叶龙胆 ,可能与其生态环
境有关 [ 9] ,其原因尚有待于进一步研究 。
2.6.4　中国药典收载的龙胆入药为根 ,具有抗炎作
用 ,主治肝炎 ,其主要药效成分为龙胆苦苷 [ 10] 。而
“邦见”在藏医中主要用于止咳 、抗气管炎 ,本实验
结果表明提宗龙胆和线叶龙胆花中苦苷类成分含量
较低 ,可能是此类成分并非其主要药效成分。因此 ,
要确定龙胆花中的主要药效成分 ,仍需结合药理实
验进行深入探讨 。
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