全 文 ：　2008年 12月　　　　　　　 思茅师范高等专科学校学报 　　　　　　　　　Dec.2008
　　第 24卷　第 6期　　　　　JournalofSimaoTeachers Colege　　　　　　　Vol.24　No.6　
＊ 滇润楠组织培养初探
王廷晋
(文山农业学校 ,云南　文山　663000)
[摘　要 ] 　以滇润楠(Machilusyunnanensis)的侧芽 、顶芽为材料。在 MS培养基附加细
胞分裂素 BA、KT和生长素 NAA、2, 4—D中进行培养 ,诱导愈伤组织以及侧芽 、顶芽 ,结果表
明 , MS+2, 4— D0.5mg/l+BA2mg/l+AC0.3%诱导滇润楠根部萌蘖条愈伤组织的产生效果较
好 , MS+2, 4— D0.1 mg/l+KT2 mg/l+AC0.3%诱导滇润楠的侧芽萌动效果较好 , MS+NAA1
mg/l+BA1.5 mg/l+AC0.3%诱导滇润楠的顶芽萌动效果较好 。
[关键词 ] 滇润楠;组织培养;激素;愈伤组织
[中图分类号 ] Q94-331 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 1008-8059(2008)06-0004-06
0前　言
滇润楠[ 1] (Machilusyunnanensis), 又名滇桢
楠 、云南楠木;樟科 ,润楠属;多年生常绿乔木 ,枝
杆发达 ,冠大荫浓 ,叶革质 ,倒卵形 ,长 7— 10cm,
宽 3— 4 cm,短渐尖 ,钝头 ,基契形 ,是一种优良的
城市园林绿化树种。通常用种子繁殖 ,繁殖慢 ,且
种源有限 ,种苗缺乏 ,限制了滇润楠这一云南乡土
树种的广泛应用 ,且其它普通无性繁殖很难生根 、
发芽 ,生长不整齐 ,为此 ,进行了滇润楠组织培养
初步研究 ,目的在于提高滇润楠的品质 ,扩大繁殖
系数及育苗途径 。
1实验材料
1.1实验原料:滇润楠根蘖条 、顶芽 、侧芽 。
1.2实验器材:培养瓶 、烧杯(25ml、50ml、100ml、
1000ml)、移液管 (0.05ml、 0.15ml、 0.25ml、 1.
25ml、1.5ml)、搅棒 、高压灭菌锅 、镊子 、剪刀 、培
养皿 、过滤纸 、分析天平 、药匙 、三角瓶 、0.1%的
HgCl2等 。
1.3实验试剂:活性炭 、琼脂 、激素(BA、KT)、植物
生长调节剂(NAA、2-4D)、土温 、(70%、95%)酒
精 、洗衣粉 、蒸馏水。
2实验方法
2.1准备工作
对实验室清扫 ,工具整理 ,药品备放 ,培养室 、
无菌室 、超净工作台灭菌 ,培养瓶清洗 ,工作服清
洗 、消毒 、干燥等处理 ,各种仪器调试等。
2.2贮备液的配制
2.2.1MS贮备液的配制
本次实验用 MS培养基作为基本培养基[ 2] 。
MS培养基各成分配比见表 1。
2.2.2激素贮备液的配制
培养基中所需激素包括生长素 NAA(α—萘
乙酸)、2, 4— D(2, 4—二氯苯氧乙酸)和细胞分裂
素 BA(6—苄基腺膘呤)、激动素 KT(6—糖氨基
膘呤)。附加的激素以贮备液形式配制备用。
4
＊　　【收稿日期】2008-05-25
【作者简介】王廷晋(1979 ～ ),男 ,云南文山人 ,文山农业学校助理讲师。
(1)NAA称取 10mg, 用少量 95%酒精溶解
后 ,用蒸馏水定容至 100ml,配成浓度为 0.1mg/
ml的母液 [ 3] 。
(2)2, 4— D称取 10mg,用 1NNaOH溶解后 ,
用蒸馏水定容至 100ml,配成浓度为 0.1mg/ml的
母液[ 3] 。
(3)BA称取 10mg,用少量 1N盐酸溶解后 ,
用蒸馏水定容至 100ml,配成浓度为 0.1mg/ml的
母液[ 3] 。
(4)KT称取 10mg,用少量 1N盐酸溶解后 ,
用蒸馏水定容至 100ml,配成浓度为 0.1mg/ml的
母液[ 3] 。
表 1
贮备液及配量 名称 化学式 称量(g) 用时 1000ml吸取量(ml)
贮备液 I
大量元素
(1000ml)
硝酸钾 KNO3 38
硝酸铵 NH4NO3 33
磷酸二氢钾 KH2PO4 3.4
硫酸镁 MgSO4 7.4
二氯化钙 CaCl2 2H2O 8.8
50
贮备液Ⅱ
微量元素
(500ml)
碘化钾 KI 0.083
硼酸 H3BO3 0.62
硫酸锰 MnSO4 4H2O 2.23
硫酸锌 ZnSO4 7H2O 0.86
锰酸钠 Na2MnO4 2H2O 0.025
硫酸铜 CuSO4 5H2O 0.0025
氯化钴 CoCl2 6H2O 0.0025
5
贮备液 Ⅲ铁盐
(500ml)
乙二胺四乙酸二钠 Na2EDTA2H2O 3.73
硫酸亚铁 FeSO4 7H2O 2.78 5
贮备液Ⅳ
有机成分
(250ml)
肌醇 C6H12O6 2H2O 5.0
甘氨酸 NH4CHOOH 0.1
维生素 B1 C12H17ON4SClHCl 0.005
维生素 B6 C8H11O3NHCl 0.025
烟酸 NC5H4COOH 0.025
5
2.2.3培养基的配制
配制培养基时 ,根据需要量(依表 1)取各种贮
备液 ,经混合后 ,加入 3%蔗糖 ,定容 ,调整 PH值(约
在 5.8左右)后 ,加入 0.4%的琼脂 ,加入 0.3%的活
性炭 ,加热熬制至溶化后分装到三角瓶 ,灭菌(活性
炭具有强大的吸附能力 ,能吸收非极性物质和色素
等大分子 ,可减少一些有害物质的影响 ,对细胞生长
有利)。设 A、B、C、D四个大组 ,配方见表 2。
2.3接种与培养
2.3.1材料的采取与预处理
材料(除去顶芽 、侧芽的鳞片和萌蘖条的叶
片)用洗衣粉浸泡 30分钟 ,然后用自来水冲洗 40
分钟左右 ,捞出后送入无菌接种室备用。
2.3.2灭菌与接种
2.3.2.1灭菌　接种室开启紫外灯灭菌 30分钟
后 ,将超净工作台开启 15分钟 ,关闭紫外灯。工
作人员用 70%的酒精棉球擦洗手 ,换上衣帽 ,戴
上口罩 ,进入无菌室用 70%的酒精棉球擦洗工作
台及所使用工具 ,将已处理过的材料在超净工作
台上进行消毒灭菌。具体步骤如下:
处理材料※70%的酒精浸泡 30秒※无菌水
冲洗 3— 4次 ※0.1%的 HgCl2 (加入 1— 2滴土
温)浸泡 10分钟※无菌水冲洗 5— 6次※2%Na-
ClO浸泡 4分钟※无菌水冲洗 3— 4次 ※吸水纸
吸干水分并放入培养皿备用。
2.3.2.2接种　在超净工作台上 ,将彻底灭菌过
5
王廷晋:　滇润楠组织培养初探
的顶芽 、侧芽用剪刀除去无用部分 ,嫩枝切成 1.
0cm左右的茎段 ,在酒精灯火焰上方接种至各组
培养基中 ,封好瓶口 ,移入培养室培养 。
2.3.3培养条件　培养室温度为 15— 26℃,湿度
为 50%— 80%,光照强度为 2000LUX,光照时间
为 12小时。
　　　　表 2
培养基组号 培养基配方 备注
A1
A2
A3
A4
A5
A6
A7
A8
A9
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B7
B8
B9
C1
C2
C3
C4
C5
C6
C7
C8
C9
D1
D2
D3
D4
D5
D6
D7
D8
D9
MS+NAA0.1mg/L+KT1mg/L
MS+NAA0.1mg/L+KT1.5mg/L
MS+NAA0.1mg/L+KT2mg/L
MS+NAA0.5mg/L+KT1mg/L
MS+NAA0.5mg/L+KT1.5mg/L
MS+NAA0.5mg/L+KT2mg/L
MS+NAA1mg/L+KT1mg/L
MS+NAA1mg/L+KT1.5mg/L
MS+NAA1mg/L+KT2mg/L
MS+NAA0.1mg/L+BA1mg/L
MS+NAA0.1mg/L+BA1.5mg/L
MS+NAA0.1mg/L+BA2mg/L
MS+NAA0.5mg/L+BA1mg/L
MS+NAA0.5mg/L+BA1.5mg/L
MS+NAA0.5mg/L+BA2mg/L
MS+NAA1mg/L+BA1mg/L
MS+NAA1mg/L+BA1.5mg/L
MS+NAA1mg/L+BA2mg/L
MS+2, 4-D0.1mg/L+KT1mg/L
MS+2, 4-D0.1mg/L+KT1.5mg/L
MS+2, 4-D0.1mg/L+KT2mg/L
MS+2, 4-D0.5mg/L+KT1mg/L
MS+2, 4-D0.5mg/L+KT1.5mg/L
MS+2, 4-D0.5mg/L+KT2mg/L
MS+2, 4-D1mg/L+KT1mg/L
MS+2, 4-D1mg/L+KT1.5mg/L
MS+2, 4-D1mg/L+KT2mg/L
MS+2, 4-D0.1mg/L+BA1mg/L
MS+2, 4-D0.1mg/L+BA1.5mg/L
MS+2, 4-D0.1mg/L+BA2mg/L
MS+2, 4-D0.5mg/L+BA1mg/L
MS+2, 4-D0.5mg/L+BA1.5mg/L
MS+2, 4-D0.5mg/L+BA2mg/L
MS+2, 4-D1mg/L+BA1mg/L
MS+2, 4-D1mg/L+BA1.5mg/L
MS+2, 4-D1mg/L+BA2mg/L
均加入 3%的
蔗糖 、0.4%的
琼脂肪 、0.3%
的 AC(活性灰)
PH=5.8
6
思茅师范高等专科学校学报
2.3.3培养条件
培养室温度为 15— 26℃, 湿度为 50%—
80%,光照强度为 2000LUX,光照时间为 12小时。
3实验结果
3.1A组情况:30天后 , 38.4%的外植体产生了颗
粒状的愈伤组织 。具体情况见表 3:
表 3　A组滇润楠生长情况表
培养基组号 A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9
接种数 13 12 12 10 10 13 10 13 10
30天
愈伤组织诱导数(瓶) 4 4 5 4 2 4 3 7 5
诱导率(%) 30.8 33.3 41.7 40 20 30.8 30 53.9 50
3.2B组情况:30天后 , 20.09%的外植体产生了
颗粒状的愈伤组织 , 21.2%的外植体有侧芽萌动
现象 , 43.7%的外植体有顶芽萌动现象。具体情
况见表 4:
表 4　B组滇润楠生长情况表
培养基组号 B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8 B9
接种数 1 11 12 15 14 15 15 17 10
30天
愈伤组织诱导数(瓶) 2 2 2 4 3 0 3 4 4
诱导率(%) 14.3 18.2 16.7 26.7 21.4 0 20 23.5 40
顶芽萌动数 2 5 7 7 7 7 8 10 2
萌动率(%) 14.3 45.5 58.3 46.7 50 46.7 53.3 58.8 20
侧芽萌动数 0 2 2 3 4 6 3 3 3
萌动率(%) 0 18.2 16.7 20 28.6 40 20 17.7 30
3.2C组情况:30天后 , 20.1%的外植体产生了颗
粒状的愈伤组织 , 50.8%的外植体有侧芽萌动现
象 。具体情况见表 5:
表 5　C组滇润楠生长情况表
培养基组号 C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9
接种数 10 11 10 10 10 10 10 11 11
30天
愈伤诱导数(瓶) 0 1 2 0 0 0 6 5 5
诱导率(%) 0 9.1 20 0 0 0 60 45.5 45.5
侧芽萌动数(瓶) 4 4 7 5 4 6 7 5 5
萌动率(%) 40 36.4 70 50 40 60 70 45.5 45.5
3.4D组情况:30天后 , 40%的外植体产生了颗粒 状的愈伤组织。具体情况见表 6:
7
王廷晋:　滇润楠组织培养初探
表 6　D组滇润楠生长情况表
培养基组号 D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D8 D9
接种数 10 10 10 10 10 10 10 10 10
30天
愈伤诱导数(瓶) 4 6 6 1 4 8 4 2 1
诱导率(%) 40 60 60 10 40 80 40 20 10
4讨论与分析
4.1植物激素对滇润楠愈伤组织产生的影响
4.1.1激素种类的影响
当用 NAA、2, 4— D时 ,细胞分裂素用 KT、BA
与之搭配 ,观察细胞分裂素 KT、BA对愈伤组织产
生的影响 ,结果见表 7:
　　　　表 7
组号 A组 B组 C组 D组
激素搭配 NAA+KT NAA+BA 2, 4— D+KT 2, 4—D+BA
平均诱导率(%) 38.4 20.09 20.1 40
　　从表 7中可以看出 ,用生长素 NAA的 A、B
组 , A组的平均诱导率高于 B组 ,说明 NAA搭配
时 KT的作用效果好于 BA;而用 2, 4— D的 C、D
两组 , D组的平均诱导率高于 C组 ,说明与 2, 4—
D搭配时 BA的作用效果好于 C组 。反之 ,用细
胞分裂素 KT的 A、C两组 , A组的平均诱导率高
于 C组 ,说明与 KT搭配时 NAA的作用效果好于
2, 4—D;而用 BA的 B、D两组 , D组的平均诱导
率高于 B组 ,说明与 BA搭配时的 2, 4—D的作用
效果好于 NAA。基于上述结论可以看出 ,生长素
2, 4—D较好于 NAA,细胞分裂素 BA较好于 KT;
但是 ,从表中可以看到 ,各组的平均诱导率相差并
不大 ,说明在使用生长素对诱导滇润楠愈伤组织
的时候 , 2, 4— D才较 NAA好;同样在使用细胞分
裂素 BA对诱导滇润楠愈伤组织的才较 KT好。
因此 ,生长素用 2, 4—D,而细胞分裂素 BA。
4.1.2激素浓度的影响
从表 8可以看出 ,在生长素与细胞分裂素的
浓度配比中 ,诱导滇润楠愈伤组织的最适生长素
为 2 , 4—D,浓度为 0.5mg/L,最适细胞分裂素为
BA,浓度为 2mg/L。
4.2激素对滇润楠顶芽 、侧芽萌动的影响
4.2.1激素对顶芽的影响
从表 4中可以看出 , B1— B3的最高萌动率为
58.3%, B4— B6的为 50%, B7—B9的为 58.8%,
这说明对顶芽萌动最适生长素 NAA的浓度为
1mg/L、最适细胞分裂素 BA的浓度为 1.5mg/L。
当 BA浓度在 1mg/L(B1 、B4 、B7)和 1.5mg/L(B2、
B6 、B8)时 ,随着 NAA浓度的递增 ,萌动率也随着
升高 ,但是 ,在 2mg/L(B3、B6 、B9)时 ,是随着 NAA
的浓度递增而降低 ,这说明高浓度的细胞分裂素
有抑制顶芽萌动的作用。
4.2.2激素对侧芽的影响
细胞分裂素如 BA、KT对侧芽的萌动起着主
导作用 ,在配合一定浓度的生长素 ,能有效地促进
侧芽的萌动 [ 2] 。从表 4、5中可以看出 , B组(NAA
+BA)中 , B1— B3的最高萌动率为 18.2%, B4—
B6的为 40%, B7—B9的为 30%;B组最高萌动率
为 40%和平均萌动率为 21.2%。 C组(2, 4— D+
KT)中 , C1—C3的最高萌动率为 70%, C4—C6的
为 60%, C7—C9 的为 70%;C组最高萌动率为
70%和平均萌动率为 50.8%。从这两组可以看
出 , C组的萌动率高于 B组 ,说明生长素 2, 4—D
与细胞分裂素 KT配合使用比 NAA与 BA配合效
果较好 ,因而在诱导侧芽萌动时 ,最适生长素用
2, 4—D,最适细胞分裂素用 KT。而浓度生长素
为 0.1mg/L。
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思茅师范高等专科学校学报
表 8
浓度(mgl)　　生长素及细胞
及诱导率(%)　　　分裂素
组号　　　　　　　　　
NAA NAA 2, 4— D 2, 4—D
A1—A3 0.1　　41.7
A4—A6 0.5　　40
A7—A9 1　　　53.9
B1—B3 0.1　　18.2
B4—B6 0.5　　26.7
B7—B9 1　　　40
C1—C3 0.1　　20
C4—C6 0.5　　　0
C7—C9 1　　　60
D1—D3 0.1　　60
D4—D6 0.5　　80
D7—D9 1　　　40
　　 [参考文献 ]
[ 1] 树木学 (南方本)编写委员会.树木学
(南方本)[ M] .北京:中国林业出版社 , 1994.
[ 2] 谭文澄 , 戴策刚.观赏植物组织培养
[ M] .北京:中国林业出版社 , 1991.
[ 3] 杨增海.园艺植物组织培养 [ M] .北京:
农业出版社 , 1987.
TheTissueCultivatingofMachilusyunnanensis
WANGTin-jin
[ Abstract] 　InthepaperthetopbugsandthesidebugsofMachilusyunnanensistreeswerecultivated
asthepreliminarystagematerials.ThematerialswerecultivatedintheMSculturemediumannexedwithhor-
moneBAorKT＆NAAor2, 4—Dtoinducetheemergenceofrevcoveringtissueandthegerminationofthetop
bugsandthesidebugs.Comparedwithotherhormone, theMS+2, 4—D0.5mg/L+BA2mg/L+AC0.3%
culturemediumhasbeterofinducingrecoveringtissueemergingfromthesprouttilersofMachilusyunnanen-
sistrees, andMS+2, 4—D0.1mg/L+KT2 mg/L+AC0.3% isbeterforinducingthegerminationofthe
sidebugsofMachilusyunnanensistrees, andMS+NAA1mg/L+BA1.5 mg/L+AC0.3% isbeterforin-
ducingthegerminationofthetopbugsofMachilusyunnanensistrees.
[ Keywords] 　 Machilusyunnanensis;tissuecultivating;culturemedium;recovering-tissue
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王廷晋:　滇润楠组织培养初探