全 文 ：攀西西南山茶幼叶愈伤组织诱导研究
袁颖　(西昌学院农学系,四川西昌 615013)
摘要　[目的] 探讨不同植物激素对西南山茶幼叶愈伤组织诱导的影响。[方法] 以西南山茶幼叶为外植体 ,MS 培养基为基本培养基 ,
添加 3种植物激素NAA 、6-BA和 2 , 4-D ,浓度分别为0.5、1.0、2.0和 4.0mg/L ,研究在不同浓度植物激素配比条件下西南山茶幼叶愈伤组
织诱导率及生长状态。[结果] 单因子诱导西南山茶幼叶愈伤组织形成时 ,适当浓度的NAA、6-BA 和 2 , 4-D均能起到显著的诱导效应 ,
以 0.5mg/L 浓度的 2 , 4-D的效果最好 ,所形成的愈伤组织黄绿色 ,疏松 ,生长状态最好 ,利于培养 , 但随 2 , 4-D浓度增高会导致愈伤组织
的褐化现象严重。组合因子诱导时 ,以NAA 1.0mg/L+6-BA 1.0mg/ L的诱导率最高 , 2 , 4-D 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L诱导愈伤组织的生
长状态最好 ,利于培养。[结论] 该研究为将植物组织培养技术应用于攀西西南山茶的快速繁殖提供了科学依据。
关键词　西南山茶;组织培养;愈伤组织;激素
中图分类号　S 603.6　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)17-07866-02
Research on Callus Inducement of Camellia pitardii Young Leaves in Panxi Area
YUAN Ying　(Xichang College, Xichang , Sichuan 615013)
Abstract 　[Objective] The study aimed to explore the effect of different plant hormone on callus inducement of young leaves of Camellia pitardii.
[Method] With C.pitardii young leaves as explant andMS medium as basicmedium , three kinds of plant hormones of NAA , 6-BA and 2 , 4-Dwith con-
cn.of 0.5 , 1.0 , 2.0 and 4.0mg/L resp.were added into the medium to study the callus induction rate and growth state of C.pitardii young leaves un-
der conditions of matching of plant hormonewith different concn.[ Result] When the forming of callus of C.pitardii young leaves induced by single fac-
tor, the NAA , 6-BA and 2 , 4-Dwith proper concn.could all has significant inductive effect , and the 2 , 4-Dwith 0.5mg/ L concn.was in the best result ,
in which the callus formedwas yellowish green, loosenedwith optimal growth state, and favorable to be cultivated , but the browning of callus would be se-
rious , which caused by the 2, 4-D concn.rising up.When induced by combinatorial factors , the induction rate of NAA 1.0mg/L+6-BA 1.0mg/Lwas
highest , the 2 , 4-D 0.5mg/L+6-BA 1.0 mg/L for induced callus was in the best growth state , and favorable to be cultured.[Conclusion] The research
provided scientific basis for the application of technology of plant tissue culture in the rapid propagation of C.pitardii in Panxi area.
Key words　 Camellia pitardii;Tissue culture;Callus;Hormone
基金项目　四川省教育厅青年基金项目。
作者简介　袁颖(1977-), 女 ,四川西昌人 ,讲师 , 从事野生植物资源
利用方面的研究。
收稿日期　2009-04-22
　　西南山茶(Camellia pitardii)属山茶科山茶属常绿灌木或
小乔木 ,广泛分布于攀枝花市的盐边及凉山州内部分县市海
拔 1 600～ 2 800 m的阔叶林 、松林下或灌丛中[ 1] 。攀西地区
是西南山茶的起源中心 ,多样化分布中心地区之一。因此西
南山茶具有很高的观赏价值 ,同时西南山茶的种子又可以榨
油 ,具有较高经济价值[ 2] 。传统的种子繁殖 、扦插 、压条等繁
育方法对西南山茶并不安全有效 ,而且品种退化现象非常严
重。将植物组织培养技术应用于攀西西南山茶的快速繁殖 ,
对保护攀西地区野生西南山茶种质资源 ,丰富园林植物多样
性 、缓解优质种苗供应紧张的状况 ,具有十分重要的意义 。
1　材料与方法
1.1　材料　供试材料采自海拔 2 200 m 的西昌市螺髻山大
菁梁子 ,带 3～ 4片幼叶的西南山茶春天新生枝条。
1.2　方法　取西南山茶新生枝条上的幼嫩叶片 ,用洗衣粉
洗净 ,流水冲洗 1 h ,再用无菌水浸泡 10min ,70%乙醇浸泡 30
s左右 ,然后用 0.1%HgCl2 水溶液灭菌 4 ～ 8min ,再用无菌水
清洗 4～ 5次 ,将叶片剪成 25 mm2 大小的方块作为外植体[ 3] 。
采用MS培养基 ,附加 3%蔗糖和不同浓度的NAA 、6-BA和
2 ,4-D ,调至 pH值 5.8～ 6.0 ,加 0.6%琼脂 ,在高压灭菌锅中
120～ 126 ℃灭菌 20 min 。将剪好的叶片方块接种于附加不同
激素的 4种培养基上。培养温度为 26 ℃;光照 12 h/d;光照
强度 2 500 lx[ 4-5] 。40 d后统计愈伤组织诱导率 ,并观察生长
状态。愈伤组织诱导率按下式进行计算:
愈伤组织诱导率(%)=愈伤组织块数/接种外植体块数
×100
2　结果与分析
2.1　单因子的诱导作用　试验选取了NAA 、6-BA 、2 , 4-D 3种
植物激素附加于MS 基本培养基中[ 6] ,浓度分别为 0.5、1.0 、
2.0和 4.0mg/L ,用剪好的幼叶方块作为外植体接种。每种
浓度接种 20瓶 ,每瓶接种 10个外植体 ,共计 200个外植体 。
培养 40 d后统计结果 ,计算诱导率 ,并观察生长状态 。
2.1.1　NAA的诱导效应。由表 1可以看出 ,随着NAA的浓
度梯度升高 ,愈伤组织诱导效应显著提高 ,其诱导率呈逐步
上升的趋势。当NAA浓度从 0.5mg/L升高到 2.0mg/L的过
程中 ,愈伤组织生长状态由较差或一般逐步表现为较好 ,
NAA浓度达到 2.0mg/L时 ,生长状态表现为最好状态 ,但形
成的愈伤组织呈浓绿色 、较硬 ,不利于培养。当NAA 浓度升
高到 4.0mg/L时 ,愈伤组织诱导率虽然最高 ,但生长状态普
遍表现为差。
2.1.2　6-BA的诱导效应。从表 1可以看出 ,随着 6-BA 浓度
梯度由 0.5mg/L逐步升高到 2.0mg/L ,西南山茶幼嫩叶片的
愈伤组织诱导率逐步提高 ,生长状态也逐步变好 ,其中以浓
度 2.0mg/L时诱导率最高 ,同时愈伤组织为黄绿色 、疏松 ,利
于培养。当 6-BA 浓度上升到 4.0mg/L时 ,诱导率下降 ,愈伤
组织生长状态差。
2.1.3　2 ,4-D的诱导效应 。从表 1可知 , 2 , 4-D对西南山茶
叶片愈伤组织诱导时 ,从诱导率分析 ,当 2 , 4-D浓度从 0.5
mg/L逐步增加到 2.0mg/L的过程中 ,诱导率不断提高 ,其中
以浓度 2.0mg/L时诱导率最高。愈伤组织在 2 , 4-D浓度为
0.5mg/L时 ,生长状态最好且愈伤组织呈黄绿色 、较疏松 ,生
长较快 ,利于培养。此后 ,随浓度增加生长状态逐渐变差 ,并
产生明显褐化现象。
2.2　组合因子的诱导效应　组合因子试验采用NAA 、2 , 4-D
与 6-BA的组合。试验结果如下:
安徽农业科学, Journal of Anhui Agri.Sci.2009 , 37(17):7866-7867　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　李菲菲　责任校对　卢瑶
表1　不同浓度的 NAA、6-BA、2 ,4-D对愈伤组织的诱导效应
Table 1　The inductive effects of different concentrations of NAA, 6-BAand
2, 4-D on the calli
激素
Hormone
浓度∥mg/ L
Concentration
愈伤组织块数
Callus block number
诱导率∥%
Induction rate
生长状态
Growth status
NAA 0.5 　　　48 24.0 -
1.0 90 45.0 -
2.0 128 64.0 ++
4.0 192 96.0 --
6-BA 0.5 41 20.5 -
1.0 108 54.0 +
2.0 174 87.0 ++
4.0 140 70.0 --
2 ,4-D 0.5 68 34.0 +++
1.0 146 73.0 +
2.0 177 88.5 -
4.0 156 78.0 --
　注:--差 , -较差 , +较好 , ++好, +++很好。下同。
　Note:-- stands for bad;- stands for worse;+ stands for relatively good;
++ stands for good;+++ stands for better.The same as below.
2.2.1　NAA和 6-BA组合的诱导效应。从表 2可以看出 ,在
NAA 与 6-BA 组合诱导西南山茶幼嫩叶片的愈伤组织中 ,以
NAA 1.0mg/L+6-BA 1.0mg/L时效果最好 ,愈伤组织诱导率
最高 ,同时愈伤组织呈黄绿色 、疏松 ,生长状态良好 ,利于
培养。
2.2.2　2 ,4-D和 6-BA组合的诱导效应。从表 2可以看出 ,在
使用 2 , 4-D和 6-BA 的组合诱导西南山茶幼嫩叶片愈伤组织
时 ,以 2 ,4-D 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L的诱导率最高 ,且愈伤
组织生长状态最好。随着 2 , 4-D浓度的不断升高 ,愈伤组织
的褐化现象越来越严重。
3　结论
单因子诱导西南山茶幼叶愈伤组织形成时 ,适当浓度的
NAA 、6-BA和 2 , 4-D均能起到显著的诱导效应。单独使用
NAA 时 ,愈伤组织诱导率高 ,但生长状态不佳 ,不利于培养;
2 ,4-D的诱导效果最好 ,浓度为 0.5mg/L时形成的愈伤组织
黄绿色 、疏松 ,生长状态最好 ,利于培养 ,随着 2 , 4-D浓度增
高 ,诱导率虽然提高 ,但会导致愈伤组织的褐化现象严重 。
组合因子诱导时 ,以NAA 1.0mg/L+6-BA 1.0mg/L的诱导率
最高 ,2 ,4-D 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L诱导愈伤组织的生长
状态最好 ,利于培养。
表2　不同激素组合对山茶幼嫩叶片愈伤组织诱导效应
Table 2　The callus induction effects of different combinations on the tender
leaves of camell ia
激素组合
Hormone
combinations
浓度∥mg/ L
Concen-
tration
愈伤组织块数
Callus block
number
愈伤组织诱导率∥%
Callus indu-
ction rate
生长状态
Growth
status
NAA+6-BA 0.5+0.5 66 33.0 -
0.5+1.0 76 38.0 -
0.5+2.0 81 40.5 -
1.0+0.5 78 39.0 -
1.0+1.0 184 92.0 ++
1.0+2.0 183 91.5 -
2.0+0.5 93 45.5 -
2.0+1.0 170 85.0 +
2.0+2.0 159 79.5 --
2, 4-D+6-BA 0.5+0.5 94 49.0 +
0.5+1.0 158 79.0 +++
0.5+2.0 160 80.0 ++
1.0+0.5 82 41.0 -
1.0+1.0 102 51.0 -
1.0+2.0 123 61.5 -
2.0+0.5 88 44.0 --
2.0+1.0 140 70.0 --
2.0+2.0 138 69.0 --
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786737卷17期　　　　　　　　　　　　　　　　袁颖　攀西西南山茶幼叶愈伤组织诱导研究