全 文 ：新 疆 农 业 大 学 学 报　２０１１，３４（５）：４０７～４０９
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
文章编号：１００７－８６１４（２０１１）０５－０４０７－０３
陕西卫矛愈伤组织再分化培养的研究
袁云香
（渭南师范学院 化学与生命科学学院，渭南　７１４０００）
摘　要：　以陕西卫矛幼茎为外植体诱导愈伤组织。在成功增殖大量愈伤组织的基础上，进行愈伤组织再分化培
养研究。采用正交设计实验，添加不同种类及不同浓度的植物生长调节物质及附加物质，组成９种不同的再分化
培养基，对陕西卫矛愈伤组织进行再分化培养。结果表明：再分化培养基中添加３．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ ＋０．３ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ＋３．０ｍｇ／Ｌ　ＡｇＮＯ３，能明显提高陕西卫矛愈伤组织再分化率。
关键词：　陕西卫矛；组织培养；愈伤组织；再分化
中图分类号：Ｑ９４９．７５４．７　　　　　　文献标识码：Ａ　
Ａ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｅｕｏｎｙｍｕｓ　ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ　Ｍａｘｉｍ　Ｃａｌｕｓ
ＹＵＡＮ　Ｙｕｎ－ｘｉａｎｇ
（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｗｅｉｎａｎ　Ｔｅａｃｈｅｒｓ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｗｅｉｎａｎ　７１４０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｔｈｅ　ｙｏｕｎｇ　ｓｔｅｍｓ　ｏｆ　Ｅｕｏｎｙｍｕｓ　ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ　Ｍａｘｉｍ　ｗｅｒｅ　ｔａｋｅｎ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｃａｌｕｓ　ｉｎ　ｔｈｉｓ
ｓｔｕｄｙ．Ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙ　ｉｎ－
ｃｒｅａｓｉｎｇ　ｐｌｅｎｔｙ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ．Ｔｈｅ　ｏｒｔｈｕｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ　ｔｅｓｔ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ａｎｄ　ａｄｄｉ－
ｔｉｏｎａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｗｅｒｅ　ａｄｄｅｄ　ｔｏ　ｃｏｍｐｏｓｅｄ　９ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒｅｓｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｌ　ｍｅｄｉａ　ａｎｄ　ｔｏ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ　ａｎｄ　ｃｕｌ－
ｔｉｖａｔｅ　Ｅｕｏｎｙｍｕｓ　ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ　Ｍａｘｉｍ．Ｒｅｓｕｌｔ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｗｈｅｎ　３．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．３ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋
３．０ｍｇ／Ｌ　ＡｇＮＯ３ｗｅｒｅ　ａｄｄｅｄ　ｔｏ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉａ，ｃａｌｕｓ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｔａｔｅ　ｏｆ　Ｅｕｏｎｙｍｕｓ　ｓｃｈｅｎｓ－
ｉａｎｕｓ　Ｍａｘｉｍ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：　Ｅｕｏｎｙｍｕｓ　ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ　Ｍａｘｉｍ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｃａｌｕｓ；ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
　　陕西卫矛（Ｅｕｏｎｙｍｕｓ　ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ　Ｍａｘｉｍ）为
卫矛科落叶灌木，因果序疏长、下垂、果翅奇特、美
观、观果期长，素有“金丝吊蝴蝶”的美称［１］，其栽培
技术渐受人们关注。关于陕西卫矛的组织培养，胡
丽娟［２］等人研究发现愈伤组织诱导后进行芽分化及
芽苗的增殖培养，每个芽苗可分化出５８个芽。为进
一步探讨影响陕西卫矛愈伤组织再生频率的因素，
本实验在陕西卫矛愈伤组织再分化培养基中，添加
不同种类及不同浓度的植物生长调节物质及附加物
质，研究其对陕西卫矛愈伤组织再分化的影响，为进
一步提高陕西卫矛愈伤组织再生频率，快速获得大
量种苗提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　材 料
以渭南师范学院校园栽培当年生陕西卫矛嫩枝
条为试验材料。
１．２　方 法
１．２．１　愈伤组织的诱导
剪取一年生陕西卫矛幼茎，放入烧杯中加入适
量洗衣粉，在自来水下冲洗２ｈ左右，再用蒸馏水冲
洗５ｍｉｎ，于超净工作台内，先用７５％酒精处理
２０ｓ，再用０．１％升汞处理４ｍｉｎ，然后用无菌水冲
洗５６次，将茎段切成约１．０１．５ｃｍ长作为外植
收稿日期：２０１１－０７－２３
基金项目：陕西省教育厅科学研究计划项目（０９ＪＫ４３４）；国家自然科学基金项目（３１０００４１０）
新　疆　农　业　大　学　学　报 ２０１１年　
体，每瓶接种３个外植体于不同的诱导培养基：ＭＳ
＋６－ＢＡ　３．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ＋３０ｇ／Ｌ蔗糖
＋０．７％琼脂＋５００ｍｇ／Ｌ脯氨酸＋３００ｍｇ／Ｌ水解
酪蛋白＋１％ＰＶＰ作为基本成分，ｐＨ６．０。在（２２±
１）℃条件下、光照强度为１　５００２　０００ｌｘ、每天光照时
间１３ｈ，诱导愈伤组织形成，４周后统计诱导率，并
密切观察愈伤组织生长情况。重复３次。
１．２．２　陕西卫矛愈伤组织的增殖
茎段在培养基上诱导４周后，将愈伤组织小心
切下，继代于增殖培养基（ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋
０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋０．７％ 琼脂 ＋３．０％ 蔗 糖 ＋
５００ｍｇ／Ｌ脯氨酸＋３００ｍｇ／Ｌ水解酪蛋白），每瓶接
种５块愈伤组织，（２２±１）℃、光照强度为１　５００－
２　０００ｌｘ、每天光照时间１３ｈ条件下，２１ｄ后统计愈
伤组织生长情况。愈伤组织增殖每３周继代一次。
１．２．３　陕西卫矛愈伤组织的再分化
陕西卫矛愈伤组织增殖培养３代后，将结构致
密、淡黄绿色胚性愈伤组织小心切开，分别接种于不
同的再分化培养基。分化培养基的筛选采用正交设
计 Ｌ９（３４），设置 ３ 个因素分别为 ６－ＢＡ、ＮＡＡ、
ＡｇＮＯ３，每个因素设置３个水平数（表１）。６－ＢＡ浓
度分别为１．０，２．０，３．０ｍｇ／Ｌ；ＮＡＡ 浓度分别为
０．１，０．２，０．３ｍｇ／Ｌ；ＡｇＮＯ３ 浓度分别为０，１．０，
３．０ｍｇ／Ｌ。每瓶接种５块愈伤组织，培养温度（２５±
１）℃、光照强度为１　５００２　０００ｌｘ、每天光照时间１３
ｈ。接种３５ｄ后统计再分化率。重复３次。
１．２．４　小苗生根培养
待小苗叶片长至高３５ｃｍ时，将其转至生根培
养基中（１／２ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ ＋３．０％蔗糖＋
０．７％琼脂）生根。
表１　Ｌ９（３４）因素与水平
Ｔａｂｌｅ　１　Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ　Ｌ９（３４）
水平
因　　素
Ａ
６－ＢＡ（ｍｇ／Ｌ）
Ｂ
ＮＡＡ（ｍｇ／Ｌ）
Ｃ
ＡｇＮＯ３（ｇ／Ｌ）
１　 １．０　 ０．１　 ０
２　 ２．０　 ０．２　 １．０
３　 ３．０　 ０．３　 ３．０
２　结果与分析
２．１　陕西卫矛愈伤组织诱导及增殖
以陕西卫矛茎段为外植体进行光照培养，接种
３ｄ后，茎段上端切口处变白，７ｄ左右就能在茎的
上端开始看到钉帽状、浅绿色愈伤组织，质地致密，
颗粒状较小。将愈伤组织接种到增殖培养基上培养
１周左右，愈伤组织体积增大，生长状态良好，变得
较疏松，颜色呈淡黄绿色的胚性愈伤组织。
２．２　不同因素对陕西卫矛愈伤组织再分化的影响
在按照正交设计Ｌ９（３４）的陕西卫矛愈伤组织
再分化培养基中，陕西卫矛愈伤组织都能不同程度
地分化出再生苗（表２）。再分化培养７ｄ左右发现
部分愈伤组织开始有绿芽出现。２周左右绿芽长成
了完整的再生植株。从表２分析得出，适宜再分化
的培养基为 ＭＳ＋３．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．３ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ＋３．０ｇ／Ｌ　ＡｇＮＯ３，影响因素最大为６－ＢＡ，其
次为ＡｇＮＯ３，最小为ＮＡＡ。通过方差分析可以看
出，６－ＢＡ各水平间的差异有统计学意义，而且差异
极显著，ＡｇＮＯ３ 各水平间的差异显著有统计学意
义，而ＮＡＡ各水平间的差异不显著。在陕西卫矛
愈伤组织再分化过程中，ＮＡＡ浓度对再分化率影
响不大。用再分化培养基 ＭＳ＋３．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋
０．３ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋３．０ｇ／Ｌ　ＡｇＮＯ３ 进行陕西卫矛
愈伤组织再分化培养确认试验，在再分化培养３５ｄ
后进行统计，再分化率可达到７７．５％左右，再生苗
生长正常。因此，可以确定陕西卫矛愈伤组织再分
化培养基为 ＭＳ＋３．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．３ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ＋３．０ｇ／Ｌ　ＡｇＮＯ３。
表２　不同因素对陕西卫矛愈伤组织再分化的影响
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｎ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｕ－
ｏｎｙｍｕｓ　ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ　Ｍａｘｉｍ　ｃａｌｕｓ
试验号 Ａ　 Ｂ　 Ｃ 再分化率（％）
１　 １．０　 ０．１　 ０．０　 １３．６
２　 １．０　 ０．２　 １．０　 ２３．８
３　 １．０　 ０．３　 ３．０　 ３６．５
４　 ２．０　 ０．１　 １．０　 ３８．９
５　 ２．０　 ０．２　 ３．０　 ５０．２
６　 ２．０　 ０．３　 ０．０　 ３５．７
７　 ３．０　 ０．１　 ３．０　 ７７．５
８　 ３．０　 ０．２　 ０．０　 ５０．８
９　 ３．０　 ０．３　 １．０　 ７１．４
Ｔ１ ７３．９　 １３０．０　 １００．１
Ｔ２ １２４．８　 １２４．８　 １３４．１
Ｔ３ １９９．７　 １４３．６　 １６４．２
珚ｘ１ ２４．６　 ４３．３　 ３３．４
珚ｘ２ ４１．６　 ４１．６　 ４４．７
珚ｘ３ ６６．６　 ４７．９　 ５４．７
Ｒ　 ４２．０　 ６．３　 ２１．３
注：再分化率＝分化小苗愈伤组织块数／接种愈伤组织块数
×１００％。
８０４
　第５期 袁云香：陕西卫矛愈伤组织再分化培养的研究
３　讨 论
培养基中的附加物质对离体培养效率起着极为
重要的作用，添加不同种类和浓度的附加物质往往
是提高培养效率最有效的手段。ＡｇＮＯ３ 对多种植
物形态发生具有促进作用，培养基中Ａｇ＋的存在可
能通过促进多胺的合成提高体细胞胚胎和芽发生的
频率［３］。ＡｇＮＯ３ 作为乙烯抑制剂，在植物组织及细
胞培养等方面的应用已有报道［４］。唐桂香等［５］在培
养甘蓝型油菜子叶时加入适量 Ａｇ＋，发现适量的
Ａｇ＋可明显提高子叶外植体的植株再生频率。陈军
营等在研究ＡｇＮＯ３ 在小麦幼胚愈伤组织诱导和分
化的影响作用时，发现 ＡｇＮＯ３ 处理对幼胚愈伤组
织形成和分化有利，但不同基因型在相同的处理下，
幼胚愈伤组织诱导率和分化率仍存在较大的差
异［６］。何小兰等［７］在研究６－ＢＡ和 ＡｇＮＯ３ 对甘蓝
型油菜带柄子叶外植体不定芽再生的影响时，观察
到ＡｇＮＯ３ 可促进两种不同基因型甘蓝型油菜不定
芽再生。高武军等［８］研究ＡｇＮＯ３ 在油菜基因转化
中的影响作用时，发现 ＡｇＮＯ３ 促进转化的油菜外
植体芽的再生，提高转化率。本试验在陕西卫矛再
分化培养基中，在添加不同浓度的６－ＢＡ、ＮＡＡ的基
础上，发现培养基中适度增加 Ａｇ＋，能够有效地提
高愈伤组织胚性状态，同时陕西卫矛愈伤组织转绿
快，再分化率明显提高，但浓度过大则影响分化。这
可能是由于 Ａｇ＋处理激发了愈伤组织ＰＯＸ的活
性，进而影响了愈伤组织生长发育的进程，提高了再
分化率。胡丽娟［２］等也研究了陕西卫矛的组织培
养，其主要是从愈伤组织诱导芽直接进行芽的分化、
增殖及生根培养。本实验先诱导愈伤组织，再进行
愈伤组织增殖，在获得大量的愈伤组织后，通过愈伤
组织再分化获得小苗，目前正在进行再生植株的生
根培养，以期建立高频的陕西卫矛愈伤组织再生
体系。
参考文献：
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Ｔｙｐｅ　Ｃａｌｕｓ　ｉｎ　Ｚｅａ　ｍａｙｓ　Ｌ．ｂｙ　ＡｇＮＯ３［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ
Ｔｉｓｓｕｅ　Ｏｒｇａｎ　Ｃｕｌｔｕｒｅ，１９８９，１８：１４３－１５１．
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９０４