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四川地区峨参高效液相指纹图谱研究
李 静，乔媛媛，魏 屹，马超英，龙祯祯，郑 敬
(西南交通大学生命科学与工程学院，四川成都 610031)
摘要:采用高效液相色谱法对 8 批峨参药材进行指纹图谱研究，采用 Shimadzu VP － ODS C18(250 mm × 4． 6 mm，
5 μm)色谱柱，以乙腈 ∶ 0． 15%氨水 = 10 ∶ 90→20 ∶ 80→40 ∶ 60→70 ∶ 30→10 ∶ 90(0 ～ 70 min)为流动相进行洗脱，流
速 1 mL /min，柱温 30 ℃，检测波长 230 nm。结果表明，以 16 个共有峰为评价指标，精密度、重复性、稳定性试验中各
个共有峰的相对保留时间 ＲSD值均小于 5． 0%，8 批样品相似度大于 0． 9。
关键词:峨参;高效液相色谱法;指纹图谱
中图分类号:Ｒ284． 1;O657． 7 + 2 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2013)10 － 0267 － 03
收稿日期:2013 － 03 － 22
基金项目:国家自然科学基金(编号:81073036)。
作者简介:李 静(1987—) ，女，四川人，从事中药及复方制剂研究。
E － mail:334392781@ qq． com。
通信作者:魏 屹，副教授，从事生药分析与药品质量研究。
E － mail:weiyiyxy@ 126． com。
峨参为伞形科峨参属植物峨参(Anthriscus sylvestris)的
根，别称田七、金山田七，是著名的川产道地药材之一，盛产于
峨眉山中山和高山地区初殿附近的峨参沟、九老洞、金顶等
地，此外，在长江流域、欧洲和北美温带地区也有分布［1］。小
泽贡等先后发表了有关峨参化学成分的报道［2 － 6］。国内学者
主要从生态学、栽培学等方面探讨峨参［7 － 10］。目前关于峨参
化学成分与质量控制研究报道很少。本研究采用高效液相色
谱法结合软件对峨参根指纹图谱进行研究，旨在为该属植物
的分类鉴定提供参考。
1 材料与仪器
1． 1 材料
峨参药材(表 1) ，经西南交通大学生命科学与工程学院
宋良科副教授鉴定为伞形科峨参属植物峨参的干燥块根;峨
参内酯对照品(实验室自制)。
1． 2 试剂
甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，超纯水。
1． 3 仪器
岛津 LC － 6AD 高效液相色谱仪，CLASS － VP 色谱工作
站。色谱柱:Shimadzu VP － ODS C18柱(250 mm × 4． 6 mm，
5 μm) ，Phenomenex C18柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ，Waters
SymmetryShieldTM ＲP18柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ，Hypersil
DJZ C18柱(200 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，SB2200 － T超声波清洗
表 1 不同批次峨参来源
编号 药材来源 采集时间(年 －月)
1 峨眉山市符溪镇 2012 － 03
2 乐山市夹江县 2012 － 03
3 峨眉山金顶 2012 － 03
4 峨眉山九老洞 2012 － 03
5 峨眉山报国寺 2012 － 03
6 眉山市洪雅县 2012 － 04
7 乐山市峨边县 2012 － 04
8 成都荷花池中药材市场 2012 － 03
器，电子分析天平(北京塞多利斯公司) ，艾柯超纯水仪。
2 结果与分析
2． 1 峨参内酯的分离纯化
取 3 kg峨参药材，95%乙醇渗滤提取，经石油醚萃取得
到 19 g 浸膏。用硅胶柱层析法粗分浸膏，以石油醚 ∶ 丙酮
(100 ∶ 0 ～ 0 ∶ 1)梯度洗脱，分离得到 10 瓶合并后的组分，按
ES － A ～ ES － J依次编号。对 ES － H 进行硅胶柱层析细分，
采用石油醚 ∶ 丙酮(10 ∶ 1 ～ 0 ∶ 1)梯度洗脱，从 ES － H － Ｒ中
重结晶得到了 10． 3 mg化合物 CE － 02。化合物 CE － 02 为白
色粉末，分子式:C22H22O7，分子量:398． 4，熔点:167 ～ 168 ℃。
1H － NMＲ(400 MHz，CDCl3)δ:2． 70 ～ 2． 65(m，3H，
H －2，H － 3，H － 4) ，3． 01(m，1H，H － 4) ，3． 71(s，6H，
3 － OMe，5 － OMe) ，3． 75(s，3H，4 － OMe) ，3． 86(m，1H，
H －3a) ，4． 38(m，1H，H － 3a) ，4． 54(s，1H，H － 1) ，5． 87(d，
J = 1． 3 Hz，2H，OCH2O) ，6． 31(s，2H，2 － H，6 － H) ，6． 45(s，
1H，8 － H) ，6. 60(s，1H，5 － H)。13C － NMＲ(200MHz，
CDCl3)δ:43． 3(d，C － 1) ，46． 9(d，C － 2) ，32． 3(d，C － 3) ，
32. 6(t，C － 4) ，108． 1(d，C － 5) ，146． 6(s，C － 6) ，146． 3(s，
C － 7) ，110． 0(d，C － 8) ，130． 2(s，C － 9) ，127． 9(s，C － 10) ，
135． 9(s，C － 1) ，107. 8(d，C － 2，C － 6) ，152． 0(s，C － 3，
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DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2013.10.010
C － 5) ，136． 5(s，C － 4) ，174． 5(s，C － 2a，C = O) ，71． 6(t，
C － 3a) ，101． 0(t，OCH2O) ，55． 7(q，OMe － 3，OMe － 5) ，
60. 3(q，OMe － 4)。以上数据与以往的报道［11］基本一致，故
确定该化合物为峨参内酯。
2． 2 供试品溶液的制备
称取峨参样品粉末 5． 0 g，加甲醇 30 mL 振摇浸润，静置
30 min，超声 60 min，过滤。将滤液置于 50 mL 量瓶中，加甲
醇稀释至刻度，摇匀，经 0． 45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作
为供试品溶液。
2． 3 对照品溶液的制备
称取峨参内酯对照品 5． 1 mg，加甲醇溶解制成浓度为
0． 51 mg /mL 溶液，摇匀，经 0． 45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤
液作为对照品溶液。
2． 4 色谱条件与系统适用性试验
岛津 LC － 6AD 高效液相色谱仪，CLASS － VP 色谱工作
站。色谱柱:Shimadzu VP － ODS C18柱(250 mm × 4． 6 mm，
5 μm) ;流动相系统:乙腈 ∶ 0． 15% 氨水 = 10 ∶ 90→
20 ∶ 80→40 ∶ 60→70 ∶ 30→10 ∶ 90(0 ～ 70 min) ;检测波长:
230 nm;柱温:30 ℃;流速:1 mL /min;理论塔板数不低于
3 000。
2． 5 测定方法
吸取对照品和供试品溶液各 10 μL，注入液相色谱仪，记
录色谱图(图 1) ，以供试品指纹图谱中与对照品峨参内酯色
谱峰相应的峰为 S峰，分别计算共有峰的相对保留时间，采用
中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算相似度。
2． 6 方法学考察
2． 6． 1 精密度试验 吸取供试品溶液 10 μL，连续进样 6 次，
记录指纹图谱，各共有峰相对保留时间的 ＲSD 值为
0． 06% ～0． 66%，相似度大于 0． 99，表明仪器精密度良好。
2． 6． 2 重现性试验 称取供试品溶液 6 份，依法制备供试
液，进样测定并记录色谱图，各共有色谱峰相对保留时间的
ＲSD值为 0． 06% ～2． 67%，相似度大于 0． 99，表明该方法重
现性良好。
2． 6． 3 稳定性试验 取供试品溶液分别于 0、2、4、8、12、24 h
进样分析，记录色谱图，各共有峰相对保留时间的 ＲSD 值为
0. 42% ～2． 78%，相似度大于 0． 99，表明供试品溶液在 24 h
内稳定。
2． 7 指纹图谱的建立与分析
2． 7． 1 峨参药材 HPLC 指纹图谱中共有峰的标定 导出 8
批峨参药材液相色谱图的 AIA格式图谱，输入中药色谱指纹
图谱评价系统软件进行匹配，以中位数法建立峨参药材指纹
图谱以及生成峨参药材对照指纹图谱(图 2、图 3)。结果 8 批
样品色谱图中均出现了 1 ～ 16 号峰。因此标定此 16 个峰为
共有峰，且 11 号峰为峨参内酯峰。
2． 7． 2 共有指纹峰相对保留时间 以 11 号峰的保留时间和
峰面积为 1，计算其他各峰的相对保留时间(表 2)。各批样
品共有峰的相对保留时间的 ＲSD 值小于 5%，表明各批样品
指纹图谱重现性良好。
2． 7． 3 相似度分析 将液相图谱数据导入中药色谱指纹图
谱相似度评价系统，得出峨参药材指纹图谱的共有模式，并以
此共有模式为标准，对每批样品进行相似度评价，由表 3 可
知，四川地区不同来源的峨参相似度较高。
3 结论与讨论
3． 1 色谱条件及系统适应性应用
取峨参供试品溶液，在 190 ～ 700 nm波长范围进行扫描。
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检测波长在 230 nm时，色谱峰较多，基线平稳，且各峰分离较
好。考察了流动相系统:甲醇 －水、甲醇 － 0． 15%磷酸水溶
液、乙腈 －水、乙腈 － 0． 15%磷酸水溶液、乙腈 － 3%氨水溶
液、乙腈 － 0． 15%氨水溶液，并对流动相比例进行了优化，结
果表明，乙腈 ∶ 0． 15%氨水 = 10 ∶ 90→20 ∶ 80→40 ∶ 60→
70 ∶ 30→10 ∶ 90(0 ～ 70 min)为流动相系统洗脱最佳，出峰数
目最多，各色谱峰分离较好，峰形尖锐，保留时间适中。
Shimadzu VP － ODS C18色谱柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)分离
效果最佳，故选用此色谱柱。
表 2 8 批峨参药材共有指纹峰的相对保留时间
共有峰
相对保留时间
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8
ＲSD值
(%)
1 0． 086 0． 094 0． 093 0． 094 0． 094 0． 094 0． 094 0． 086 3． 87
2 0． 175 0． 156 0． 152 0． 162 0． 158 0． 158 0． 158 0． 151 4． 64
3 0． 218 0． 199 0． 195 0． 204 0． 206 0． 202 0． 201 0． 196 3． 57
4 0． 381 0． 381 0． 381 0． 381 0． 384 0． 380 0． 381 0． 380 0． 35
5 0． 563 0． 565 0． 563 0． 565 0． 567 0． 563 0． 564 0． 565 0． 22
6 0． 573 0． 575 0． 573 0． 575 0． 577 0． 573 0． 574 0． 575 0． 24
7 0． 586 0． 587 0． 586 0． 588 0． 590 0． 586 0． 587 0． 587 0． 22
8 0． 632 0． 632 0． 632 0． 634 0． 635 0． 632 0． 632 0． 633 0． 18
9 0． 676 0． 676 0． 676 0． 676 0． 675 0． 676 0． 676 0． 676 0． 02
10 0． 784 0． 784 0． 784 0． 785 0． 790 0． 783 0． 784 0． 784 0． 27
11 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 0
12 1． 055 1． 055 1． 055 1． 055 1． 055 1． 055 1． 055 1． 055 0
13 1． 089 1． 089 1． 089 1． 089 1． 089 1． 089 1． 089 1． 089 0
14 1． 386 1． 387 1． 387 1． 387 1． 386 1． 387 1． 387 1． 387 0． 03
15 1． 487 1． 488 1． 488 1． 488 1． 487 1． 488 1． 487 1． 487 0． 04
16 1． 624 1． 624 1． 625 1． 623 1． 625 1． 626 1． 624 1． 624 0． 05
表 3 8 批峨参药材样品相似度
不同批编号 相似度
S1 0． 976
S2 0． 974
S3 0． 989
S4 0． 940
S5 0． 992
S6 0． 986
S7 0． 991
S8 0． 945
3． 2 供试品溶液制备方法选择
比较了冷浸超声提取、95%甲醇热回流提取、95%乙醇热
回流提取方法的提取效果。结果表明，冷浸超声提取和 95%
甲醇热回流提取的峨参供试品溶液的色谱峰更多且分离效果
相对较好。由于热回流提取操作复杂费时，故选择更为简便
的冷浸超声连用提取作为峨参的提取方法。
3． 3 对照峰的选择
峨参内酯是峨参的一种活性成分，具有很好的抗炎和抗
过敏作用。通过峨参指纹图谱的整体图形、共有峰数目、相对
保留时间等参数可以对峨参药材进行鉴定，通过共有峰相对
峰面积可对药材质量进行评价。从 8 批峨参根药材指纹图谱
相似度结果可看出，同一产地不同批次的峨参根指纹图谱相
似度较高，均大于 0． 9。但各峰的相对峰面积差异较大，说明
不同来源的峨参药材之间存在质量差异。本研究不足之处在
于峨参药材指纹图谱有 16 个共有特征峰，但本试验只鉴定出
11 号峰为峨参内酯，更多的特征峰还有待进一步鉴定。
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