全 文 ：　［收稿日期］　２０１１－０８－２７；２０１２－０３－０８修回
　［基金项目］　国家自然科学基金项目“斑马鱼母源性补体的传递和功能”（３１０００４１０）；陕西省教育厅２００９年度科学研究计划项目“Ａｃ／Ｄｓ
转座元件转化猕猴桃的研究”（０９ＪＫ４３４）；渭南师范学院大学生创新计划项目“几种观赏植物的组织培养”（１１ＫＸ０７３）
　［作者简介］　袁云香（１９８０－），讲师，硕士，从事植物分子遗传学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｕａｎｙｕｎｘｉａｎｇ２００６＠１２６．ｃｏｍ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１２）０４－０１７０－００１７－０４
陕西卫矛组织培养再生体系的建立
袁云香，勾雪娇，冯辽辽，王志平，林 娜，戚珍珠，赵小静
（渭南师范学院 化学与生命科学学院，陕西 渭南７１４０００）
　　［摘　要］为建立陕西卫矛高效再生体系，以幼茎为外植体诱导愈伤组织，在成功继代愈伤组织的基础
上，进行愈伤组织再分化培养研究。采用正交设计方法，考察了６－ＢＡ、ＮＡＡ及Ｃａ２＋３个因素对陕西卫矛愈
伤组织再分化率的影响。结果表明：再分化培养基中添加３ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．３ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋５ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｃａ２＋，
能明显提高陕西卫矛愈伤组织的再分化率。
［关键词］陕西卫矛；组织培养；愈伤组织；再分化率；再生体系
［中图分类号］Ｓ６８７．９ ［文献标识码］Ａ
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ
Ｅｕｏｎｙｍｕｓ　ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ
ＹＵＡＮ　Ｙｕｎ－ｘｉａｎｇ，ＧＯＵ　Ｘｕｅ－ｊｉａｏ，ＦＥＮＧ　Ｌｉａｏ－ｌｉａｏ，ＷＡＮＧ　Ｚｈｉ－ｐｉｎｇ，
ＬＩＮ　Ｎａ，ＱＩ　Ｚｈｅｎ－ｚｈｕ，ＺＨＡＯ　Ｘｉａｏ－ｊｉｎｇ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｗｅｉｎａｎ　Ｔｅａｃｈｅｒｓ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｉｎａｎ，Ｓｈａａｎｘｉ　７１４０００，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｈｉｇｈ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ，ｔｈｅ　ｓｔｅｍｓ　ｏｆ　Ｅ．ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ　ｗｅｒｅ
ｔａｋｅｎ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃａｌｕｓ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｈａｖｉｎｇ　ｐｌｅｎｔｙ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｄ　ｃａｌｉ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ
ｔｈｅ　ｃａｌｉ　ｗｅｒｅ　ｐｌａｃｅｄ　ｏｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ．Ａｎ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｔｏ
ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　６－ＢＡ，ＮＡＡ　ａｎｄ　Ｃａ２＋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　ＭＳ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　３．０ ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ，０．３ ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ　ａｎｄ
５．０ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｃａ２＋，ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｏｆ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｓｈｏｏｔｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｅｕｏｎｙｍｕｓ　ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｃａｌｕｓ；ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ｓｙｓｔｅｍ
　　陕西卫矛（Ｅｕｏｎｙｍｕｓ　ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ　Ｍａｘｉｍ．）又
名金线吊蝴蝶、金丝吊燕，为卫矛科落叶灌木。因其
形体美观，极具观赏价值，其栽培技术倍受人们关
注［１］。关于陕西卫矛的组织培养，胡丽娟［２］等研究
发现，诱导愈伤组织后，直接进行分化及芽的增殖培
养，芽继代增殖系数平均达５～８。为建立陕西卫矛
高频再生体系，笔者对陕西卫矛进行了组织培养研
究，在成功诱导愈伤组织后，进行愈伤组织增殖培
养，在获得大量愈伤组织基础上，探讨了６－ＢＡ、
ＮＡＡ及Ｃａ２＋３个因素对陕西卫矛愈伤组织再分化
率的影响，以期进一步提高陕西卫矛愈伤组织再分
化率，为其快速繁殖、甚至品种改良及遗传转化研究
提供理论依据，为解决其常规育种手段周期长、工作
量大且效率低，难以满足市场生产发展需求另
辟蹊径。
１ 材料与方法
１．１ 材料
以渭南师范学院校园栽培当年生陕西卫矛嫩枝
条为试验材料。
１．２ 方法
１．２．１ 愈伤组织的诱导 剪取一年生陕西卫矛幼
茎，加适量洗衣粉流水冲洗２ｈ左右，再用蒸馏水冲
洗５ｍｉｎ，于超净工作台内，先用７５％酒精处理２０ｓ，
再用０．１％升汞处理４ｍｉｎ，无菌水冲洗５～６次，将
茎段切成约１～１．５ｃｍ长作为外植体，每瓶接种３
个外植体，共接种３　０瓶于诱导培养基上：ＭＳ＋
６－ＢＡ　３．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋３０ｇ／Ｌ蔗糖＋
０．７％琼 脂 ＋ 脯 氨 酸 ５００ｍｇ／Ｌ＋ 水 解 酪 蛋 白
３００ｍｇ／Ｌ＋１％ＰＶＰ作为基本成分，ｐＨ　６．０。培养
温度为（２２±１）℃，光照强度为１　５００～２　０００ｌｘ，每天
光照１３ｈ，诱导愈伤组织形成，４周后统计诱导率，
并密切观察愈伤组织生长情况，重复３次。
１．２．２ 愈伤组织的增殖 待愈伤组织长到适当大
小，小心将其切下，继代于增殖培养基 （ＭＳ＋
２．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋０．７％琼脂＋
３％蔗糖＋脯氨酸５００ｍｇ／Ｌ＋水解酪蛋白３００ｍｇ／
Ｌ）上，每瓶接种５块愈伤组织，共增殖２０瓶，在（２２
±１）℃条件下、光照强度为１５００～２　０００ｌｘ、每天光
照时间１３ｈ，２１ｄ后统计愈伤组织生长情况。愈伤
组织增殖每３周继代１次，继代时选择色泽新鲜、淡
黄绿色、质地疏松、颗粒状结构的胚性愈伤组织进行
继代培养。
１．２．３ 愈伤组织的再分化 陕西卫矛愈伤组织增
　贵州农业科学　２０１２，４０（４）：１７～１９
　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
表１ 陕西卫矛愈伤组织再分化的因素和水平
　　　Ｔａｂｌｅ　１　Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ｆｏｒ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｅ．ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ　ｃａｌｕｓ
水平
Ｌｅｖｅｌ
因素　Ｆａｃｔｏｒ
６－ＢＡ（Ａ）／
（ｍｇ／Ｌ）
ＮＡＡ（Ｂ）／
（ｍｇ／Ｌ）
Ｃａ２＋（Ｃ）／
（ｍｍｏｌ／Ｌ）
１　 １．０　 ０．１　 １．０
２　 ２．０　 ０．２　 ３．０
３　 ３．０　 ０．３　 ５．０
殖培养３代后，将结构致密、淡黄绿色胚性愈伤组织
小心切开，分别接种于不同的再分化培养基。分化
培养基的筛选采用Ｌ９（３４）正交设计，试验因素水平
见表１。每瓶接种５块愈伤组织，共分化２０瓶，其
培养条件为培养温度（２５±１）℃、光照强度为
１　５００～２　０００ｌｘ、每天光照１３ｈ。接种３５ｄ后统计
再分化率，重复３次。
２ 结果与分析
２．１ 愈伤组织诱导及增殖情况
外植体接种３ｄ后，茎段上端切口处变白，至７ｄ
左右，就能在茎的上端开始看到钉帽状、浅绿色愈伤
组织，质地致密，颗粒状较小（图版）。将愈伤组织接
种到增殖培养基上培养１周左右，愈伤组织体积增
大，生长状态良好，变得较疏松，颜色呈淡黄绿色的
胚性愈伤组织（图版）。
２．２ 不同因素对愈伤组织再分化的影响
由表２可见，９种组合均能不同程度地分化出
小苗，在分化率上不同组合差异较明显。在试验范
表２ 不同因素对陕西卫矛愈伤组织再分化的影响
　　Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　６－ＢＡ
ａｎｄ　ＮＡＡ　ｏｎ　ｃａｌｕｓ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
试验号
Ｎｏ．
Ａ　 Ｂ　 Ｃ 再分化率／％
Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
１　 １．０　 ０．１　 １．０　 １４．３
２　 １．０　 ０．２　 ３．０　 ２８．５
３　 １．０　 ０．３　 ５．０　 ４３．８
４　 ２．０　 ０．１　 ３．０　 ４８．３
５　 ２．０　 ０．２　 ５．０　 ５７．９
６　 ２．０　 ０．３　 １．０　 ４５．６
７　 ３．０　 ０．１　 ５．０　 ８８．６
８　 ３．０　 ０．２　 １．０　 ７３．５
９　 ３．０　 ０．３　 ３．０　 ８２．１
Ｋ１ ８６．６　 １５１．２　 １３３．４
Ｋ２ １５１．８　 １５９．９　 １５８．９
Ｋ３ ２４４．２　 １７１．５　 １９０．３
ｋ１ ２８．９　 ５０．４　 ４４．５
ｋ２ ５０．６　 ５３．３　 ５２．９
ｋ３ ８１．４　 ５７．２　 ６３．４
Ｒ　 ５２．５　 ６．８　 １８．９
围内，再分化率随各因素含量不同而发生明显变化。
６－ＢＡ、ＮＡＡ和Ｃａ２＋的３水平对再分化率的影响较
大。用再分化培养基 ＭＳ＋Ａ３（３．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ）＋
Ｂ３（０．３ｍｇ／ＬＮＡＡ）＋Ｃ３（５ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｃａ２＋）进行陕西
卫矛愈伤组织的再分化培养，３５ｄ后的再分化率可
达８９％左右，再生苗生长正常（图版）。因此，可以
确定陕西卫矛愈伤组织再分化的最优组合应为 ＭＳ
＋３．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．３ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋５ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃａ２＋。参试的３个因素对陕西卫矛愈伤组织再分
化率的影响程度依次为６－ＢＡ＞Ｃａ２＋ ＞ＮＡＡ，即
６－ＢＡ对陕西卫矛愈伤组织再分化率的增加影响最
愈伤组织诱导 增殖
再分化 再分化小苗
图版 陕西卫矛愈伤组织诱导、增殖、再分化和再分化小苗
Ｆｉｇ．　Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｏｆ　Ｅ．ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ　ｃａｌｕｓ
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　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
大。方差分析进一步表明，６－ＢＡ（ｐ＝０．００５）和
Ｃａ２＋（ｐ＝０．０４１）对其影响分别达极显著和显著水
平，ＮＡＡ对再分化率的影响不大。
３ 小结
研究表明，植物生长调节剂及附加物质是影响
组织培养的主要因素。Ｃａ２＋对水稻、玉米等不同作
物的愈伤组织诱导、增殖及分化各方面均有促进作
用［３－６］。采用正交试验能够大幅度减少试验次数、简
化试验方法，而且不会降低试验可行性的优点，是优
化愈伤组织再分化培养基的最佳选择［７］，笔者采用
正交试验设计的方法，在成功获得大量陕西卫矛愈
伤组织后，建立了陕西卫矛愈伤组织再生体系，结果
表明，６－ＢＡ、ＮＡＡ和Ｃａ２＋３个因素对陕西卫矛愈伤
组织再生率的影响大小依次为 ６－ＢＡ＞Ｃａ２＋ ＞
ＮＡＡ，６－ＢＡ各水平间的影响极显著，而ＮＡＡ各水
平间的差异不显著。在陕西卫矛愈伤组织再分化过
程中，不添加ＮＡＡ或添加不同浓度的ＮＡＡ对再分
化率影响不大。通过进一步的验证试验发现，陕西
卫矛愈伤组织再分化的最佳培养基配方为 ＭＳ＋
３．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ ＋０．３ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ ＋５ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃａ２＋。笔者在获得大量愈伤组织的基础上，建立了
陕西卫矛愈伤组织高频再生体系，该方法可不受陕
西卫矛自然生长周期的限制，也减少了初代外植体
接种诱导愈伤组织时的污染，减轻了人力物力，进一
步提高了快速繁殖的速度，也为进行其他生物技术
等操作建立了试验平台。
［参 考 文 献］
［１］ 王军涛，郭建喜，查振道．陕西卫矛夏季嫁接试验［Ｊ］．
陕西林业科技，２００８（３）：３５－３６．
［２］ 胡丽娟，郭军战，王文君，等．陕西卫矛的组织培养及
植株再生［Ｊ］．植物生理学通讯，２０１０，４６（２）：１５３－
１５４．
［３］ 何龙飞，沈振国，刘友良．铝胁迫下钙对小麦液泡膜功
能和膜脂组成的影响［Ｊ］．南京农业大学学报，２０００，
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［４］ Ｂｕｓｈ　Ｄ　Ｓ，Ｃａｌｃｉｕｍ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｌａｎｔ　ｃｅｌｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ
ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ［Ｊ］．Ａｎｎ　Ｒｅｖ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｐｌａｎｔ
Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ．，１９９５，４６：９５－１２２．
［５］ 利容千，朱英国，孟祥红．水稻红莲－粤泰不育系花粉
与药隔组织Ｃａ２＋的分布［Ｊ］．作物学报，２００１，２７（２）：
２３０－２３６．
［６］ 尹明华，洪森荣，徐卫红，等．应用正交设计法优选黄
独脱毒苗快繁培养基［Ｊ］．亚热带植物科学，２００９，３８
（３）：２４－２６．
［７］ 陈 政，李程斌，何家宝，等．正交设计在驱蚊草组织
培养中的应用［Ｊ］．安徽师范大学学报：自然科学版，
２００８，３１（４）：３６４－３６７．
（责任编辑：刘　海
櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁
）
（上接第１６页）
［２］ 闫淑琴，苏 俊，李春霞，等．对导入Ｓｕｗａｎ１玉米种
质选育自交系的评价［Ｊ］．玉米科学，２００７（１）：６２－６６．
［３］ 闫淑琴，苏 俊，李春霞，等．导入热带、亚热带玉米种
质选育自交系及其杂交种的研究［Ｊ］．杂粮作物，
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［４］ 孙成韬，陈洪梅，谭 静，等．２５个优良温带玉米自交
系与４个热带玉米自交系农艺性状的配合力研究
［Ｊ］．玉米科学，２００７，１５（３）：３６－４１．
［５］ 王元东，张春原，段民孝，等．几个ＣＩＭＭＹＴ热带群
体与中国温带玉米自交系杂种优势的关系［Ｊ］．中国
农学通报，２００８，２４（１）：２０７－２１１．
［６］ 张 曦，张宝石，张 磊．３个热带、亚热带玉米群体
配合力效应研究［Ｊ］．玉米科学，２００６，１４（３）：５６－５９．
［７］ 郭国亮，李培良，张乃生，等．热带Ｓｕｗａｎ玉米群体遗
传变异的研究［Ｊ］．玉米科学，２００１，９（４）：６－９．
［８］ 番兴明，谭 静，张世煌，等．利用ＳＳＲ标记对２９个
热带和温带玉米自交系进行杂种优势群的划分［Ｊ］．
作物学报，２００３，２９（６）：８３５－８４０．
［９］ 谭 华，郑德波，黄爱花，等．１０个热带、温带玉米群
体育种潜势分析［Ｊ］．安徽农业科学，２００８，３６（９）：
３５７９－３５８１．
（责任编辑：姜　萍）
·９１·
　袁云香 等　陕西卫矛组织培养再生体系的建立
　ＹＵＡＮ　Ｙｕｎ－ｘｉａｎｇ　ｅｔ　ａｌ　Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｅｕｏｎｙｍｕｓ　ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ