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花楸组织培养技术的研究



全 文 :民营科技
2011年第 3期
116 MYKJ
农林论坛
花楸组织培养技术的研究
刘士芳 王宝义
(黑龙江省海林林业局,黑龙江 海林 157100)
花楸树(Sorbus pohuashanensis),又名百花花楸、百华花楸、臭山槐、
山槐树、臭檀木、绒花树等,蔷薇科(Rosaceae)苹果亚科(Maloideae)花楸
属(Sorbus)落叶小乔木。花楸春夏季叶片为深绿色,秋季受气温影响叶
片由深绿色变为鲜艳的紫红色,有光泽。秋季红果累累,果实可挂到冬
季,是优美的园林风景树种。风景林中配植若干,可使山林增色。同时也
是很好的遮荫树种。可作庭院、公园、广场、小区绿化。树形优美,春季满
树银花,花期长达 1月有余;夏季羽叶秀丽;秋季可赏红叶观红果,其红
果晶莹剔透,经冬不落,具有很高的园林观赏价值(姚崇怀,1995)。花楸
树抗性强,对有害气体的污染有较强抗性(张智婷等,2005),非常适于城
市绿化。其果实含多种维生素、胡萝卜素、糖和柠檬酸等,其果实种子,茎
及茎皮也可供药用(孙秀殿,1999;罗大庆,1998)。另外,它还是重要的蜜
源植物。繁育方式为种子繁育,秋天采种,春季播种。
花楸分布于中国东北、华北、内蒙古至山西、山东甘肃带,生于海拔
900~2500m山坡或山谷杂木林中,适应多种土壤类型。喜酸性或微酸性
土壤,较耐荫,喜光、喜凉爽湿润气候,耐寒性强,抗风性强,可耐-40℃低
温。生长速度中等偏快。
有鉴于花楸属的组织培养仅在少数品种上获得了成功,大多数品种
还没有组培成功的报道。因此,本研究对未组培成功的品种进行组培研
究,并探索其发育的规律性,期望将对大规模、大范围的开发利用不同品
种花楸起到促进作用。
1 试验材料与方法
1.1 材料的采集与处理。试验用休眠嫩枝取自树干通直、树姿优美、果
实丰厚、色泽鲜艳的花楸优树。材料取回后,用清水冲洗 2~3h,洗去灰
尘,然后将枝条剪成 80cm左右的长度,在温度 16~24℃条件下水培,以
便打破休眠,促进幼芽萌发。
1.2 外植体的处理。径段叶芽萌发后。用已消毒的剪刀剪取 1.5~2.0cm
带腋芽幼茎段,去叶片先用蒸馏水冲洗干净。在超净工作台上先用 75%
酒精消毒 30s,再用 0.1%氯化汞灭菌,灭菌时间按连续灭菌 3min(a)、连
续灭菌 4min(b)、间断灭菌 6min(先灭菌 2min,用无菌水冲洗后浸泡
2min,再灭菌 2min)(c)三种方式处理,灭菌后用无菌水冲洗 5次,用无菌
滤纸吸干待用。
1.3 芽增殖不同培养基及激素组合方式。外植体在芽诱导培养基 MS+
BAP2.0mg/L+NAA0.1mg/L上培养,待茎段腋芽萌发后转接到以 MS、改良
MS、1/2MS、WPM 为基本培养基,附加 BAP0.5mg/L +NAA0.1mg/L、
BAP1.0mg/L +NAA0.1mg/L、BAP2.0mg/L +NAA0.1mg/L、BAP3.0mg/L +
NAA0.1mg/L、BAP2.0mg/L +NAA0.05mg/L、BAP2.0mg/L +NAA0.2mg/L、
BAP2.0mg/L+NAA0.4mg/L的培养基上进行继代增殖培养。
1.4 苗生根不同培养基激素组合方式。剪取高 2.0cm左右的分化苗,接
种于 MS+IAA(0.1,0.5,1.0,1.5,2.0)mg/L;MS+NAA(0.1,0.5,1.0,1.5,2.0
)m/L;MS +IBA (0.1,0.5,1.0,1.5,2.0)mg/L;MS +NAA0.01mg/L +IBA
(0.1,0.5,1.0,1.5,20)m/L;MS +NAA0.02mg/L +IBA(0.1,0.5,1.0,1.5,2.0)
mg/L;MS+NAA0.03mg/L+IBA(0.1,0.5,1.0,1.5,2.0)mg/L培养基上进行生
根培养。以上培养基均加蔗糖 20g/L,美国桑德兰公司生产的琼脂粉
5.5g/L,pH5.8。
1.5 培养条件及数据分析。培养温度 18℃~(24±2)℃,湿度 70%,光照强
度 1500~1800Lx,光照时间 10 h/天,试验数据分析采用 SPSS11.5。
2 结果与分析
2.1 不同灭菌方式效果分析。灭菌处理 3天后观察发现,灭菌不彻底的
培养基开始出现污染,氯化汞灭菌 3min处理,污染率较高;连续灭菌
4min与间断灭菌 6min处理,均未发现污染情况。7d后观察,连续灭菌
4min处理的大部分外植体由切口处开始出现褐化现象,而间断灭菌
6min的未出现此现象。对比说明氯化汞处理 4min可以彻底灭菌,但分
次间隔处理 6min可以减少对外植体的损伤程度(表 1)。
2.2 不同基本培养基及激素组合对芽增殖的影响。外植体在芽诱导培
养基上培养 14天后,茎段腋芽萌发生长。对继代培养 40天后的观测结
果(结果如表 2),近一步的方差方差分析表明,不同培养基、激素组合以
及这两者交互效应对芽增殖影响极为显著(p=0.000)。多重比较增殖效
果依次为 MS>改良 MS>1/2MS>WPM。相同分析手段表明激素组合中 2
号组合与其他各激素组合均具有显著差异,对增殖倍数的影响依次为 2
号>4号>6号>7号>1号>3号>5号。因此,对花楸苗最佳培养基组合为:
MS培养基+BAP 1.0mg/L+NAA0.1mg/L。
表 1 不同灭菌方式效果对比表
表 2 不同培养基和激素组合条件下芽增值倍数统计
2.3 不同激素组合对苗生根的影响。分化苗转接至不同组合生根培养
基培养 7天后开始生根,颜色为乳白色或浅黄色,以浅黄色居多。对 45
天后的生根率进行方差分析,结果表明生长素类型与生长素浓度交互效
应对分化苗的生根影响均是显著的(P=0.000)。最适生根培养基为:MS+
IBA1.0mg/L+NAA0.02mg/L。
表 3 单一生长素对生根率影响
表 4 不同生长素组合对生根率影响
3 结论与讨论
3.1 花楸腋芽对氯化汞消毒时间的要求比较严格,时间过短,污染率
高;连续灭菌时间过长,出现褐化现象严重;而间断灭菌 6min,灭菌效果
最为理想。
3.2 在相同的基本培养基中,BAP和 NAA的浓度对花楸组培径段芽增
殖影响效果显著。对于花楸来讲,芽增殖的最佳培养基为:MS+
BAP1.0mg/L+NAA0.1mg/L。
3.3 花楸适宜的生根培养基为:MS+IBA1.0mg/L+NAA0.02mg/L。
参考文献
[1] 孙秀殿.花楸的利用与栽培[J].特种经济动植物,1999(4):32.
[2] 张智婷,孙立文,郝明亮,等.优美的园林风景树——花楸树[J].河北林
业科技,2005(4):90.
[3] 周以良,董世林,聂绍荃.黑龙江省树木志[M].哈尔滨:黑龙江科学技
术出版社,1986.
[4] 王爱芝,沈海龙,黄剑,等.花楸嫩叶和茎段的愈伤组织诱导[J].东北林
业大学学报,2005,33(2):12-14.
[5] 安洁,刘军.石灰花楸的快繁技术研究[J].四川农业大学学报,2004,22
(3):222-224.
摘 要:以花楸带芽径段为材料,研究了花楸组织培养的适宜条件,研究表明花楸的最佳继代培养基为:MS+BAP1.0mg/L+NAA0.1mg/L,增殖倍
数达 4倍以上;最适生根培养基为:MS+IBA1.0mg/L+NAA0.02mg/L,生根率达 70%以上。
关键词:花楸;组织培养;生根率