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研究击文
较电泳条带可以发现壳聚糖 CGP 一 ODN 纳米粒中的 CPG -
ODN 完全被阻滞于加样孔中 ,表明 C PG一O DN 几乎全部与壳
聚糖相结合 (图 2 ) 。
圈 2 毅荟因壳康摘纳米粒的报胶阻滞分析
2
.
5 醉保护试脸
将 CGP · ODN 溶液和 c CP · OD N 壳聚糖纳米粒子悬液分
别与两种浓度的 DN A 酶 I ( DN as e l ) 在 3 7 ℃下作用 15 m i n ,
加人碘乙酸溶液 (终浓度为 5 mo l · L 一 ’ ) 终止反应 。 反应结
束后 , 经 0 . 8% 的琼脂糖凝胶电泳观察 D N A 的降解情况。
电泳结果显示 ( 见图 3 ) , 与 1 此 的 D Nas e l 反应后 ,
裸 CGP 一O D N 已被完全降解 ; 而与 1 哪 的 D N o e l 反应
巧而 n 后 , 载基因纳米粒子还能抵抗其的降解作用 , 说明纳
米粒子对 CGP 一O D N有明显的保护作用。
1
.
CGP
一
OD N溶液 20 闪 ; 2 . CGP 一O DN 20闪 + 0 . 1此 DN , I; 3 .
C凡一 O DN 2 0卜 L + l此 D N , I; 4 . C邢一 O D N壳聚搪纳米粒
20泌 ; 5 . CGP 一 O DN壳聚糖纳米粒 2 0卜 l + 0 . 1卜 9 DN , I; 6·
C邢一 O DN壳聚搪纳米粒 2 0闪 + l此 D Nase l
圈 3 琼必枯凝胶水平电泳照片
3 讨论
3
.
1 壳聚糖 (hc it~
,
cs ) 是一种天然聚多糖 ,有良好的生
物相容性和生物可降解性 ,其分子中的有糖胺基荷正电 ,与荷
负电的 DNA 可产生静电作用 , 硫酸钠的加人将脱去壳聚糖
分子表面的水化膜而致溶解度下降 ,壳聚糖分子间相互凝聚
成纳米粒从体系中析出 ,同时将与之电性结合的质粒 DNA 包
合 。 使 DN A 压缩成结构相对致密的纳米级粒子 ,这种纳米粒
子可以克服药物经猫膜吸收的生理学屏障 ,通过细胞内吞途
径 ,抵达猫膜下淋巴组织 ,采用复凝聚法工艺简单 ,无有机溶
剂残留 ,制备条件温和 ,不破坏质粒基因的结构和功能。
3
.
2 经单因素考察发现 ,壳聚糖溶液在巧 0 此 · 耐 一 ’时 ,壳
聚糖易形成聚合物 ,且聚合率高 ;壳聚糖 CGP 一OD N纳米粒的
包封率和载药量都达到很高的值 ;包封率91 . 5 1% , 载药 t
38
.
95 %
。 随着壳聚糖浓度的提高 ,壳聚糖 CGP 一O DN 纳米粒
包封率和载药量明显下降 ;根据变化絮凝剂硫酸钠的浓度单
因素考察发现 ,硫酸钠浓度在0 . 02 mol · L 一 ’ 和。. 01 m ol · L 一 ’
时壳聚糖 Cp G一 ODN 纳米粒的包封率和载药量较高 ,包封率
达 90 % ,载药量近 40 % 。
3
.
3 凝胶阻滞分析结果表明 , CGP 一ODN 几乎全部与壳聚糖
相结合 ,这与相同条件下制备的壳聚搪纳米粒包封率侧量结
果相一致。 酶保护试验结果显示 , 纳米粒子可以使包被的
DN A 最高可以抵抗的 1 此 D Nase l 的破坏 。 而在 1此 l 的浓
度下 , 裸 DN A 已经被完全降解。 由此可见 , 纳米粒子作为基
因载体可以有效地防止核酸水解酶对基因的破坏作用 。
今 考 文 献
I A一o n Ew , C曰 d es DM . 晓 n e ht aer py ofr e y s ict ifb o i s : a c il in e al 钾 . 户知 it ve
【J」. Q爬 刀认护 , 1卯 9 , 2 ( 2 ) : 88一5
2 M ao HQ
.
R0 y K
.
T加u纯一肠 v L , 以 司 . 伽 .以叨旧 一ND A na 甲浏cl es a , 幻 e
e“ e。 : s” 山. 15 , e卜田朋 t e ir咧 o n adn tr aJ . 众兄`佣 西 e i e cn y 【J〕. J 肠汕耐
几翻砚 , 2阅 l ,7 0 ( 3 ) : 39 42 1
3 黄伟 , 崔光伟 ,贺俊峰 , 等 , 壳滚特纳米拉用作基因递送载体的初步研究
[ J ]
. 药学学报 , 2X() 2 . 37 ( 12 ) : 98 1刁55
4 1止兄 K Y . K w翻 lC , Kim Y H , 以 al . 阮脚口〔on of c肠姻叨口 二乐叱娜吧叫 . . a
, ne 山 il ve叮 :y 招二【J ]. J oC汹耐 月亡在吮 , l卯 8 , 5一( 2一 ) : 2 13州2 20
( 2以犯刁 1一 收稿 2X( 犯扔仍 修回 )
高效液相色谱法测定蛇莲片中大黄素的含t
程东岩 王隶书 王海生 (吉林省中医药科学院 长春 13 0 2 1) 刘永宏 ( 中国科学院南海海洋研究所 )
摘 要 目的: 建立蛇莲片中大黄素的 PH CL 测定方法 。 方法 : 色语柱 : 岛津 O D S C l。柱 ( 150 m m 、 4 . 6 mln , 5 卜m ) , 以甲醉 -
0
.
4 % 碑故溶液 ( 74 : 26 ) 为流动相 ,检测波长为 254 nz ,柱温为 30 ℃ ,流速为0 . g d · 而 n 一 ’ 。结果 : 大黄素在0 . 03 一 0 . 34 叱 范围
内线性关系良好 , ; 二 0 . 999 4 ,平均回收率为101 . 0% , 双5刀 =l . 8% ( n = 6) 。 结论 : 该法简便 ,结果准确 ,可用于蛇莲片的质黄
控制 。
关健词 蛇莲片 ;大黄素 ; 高效液相色讲法
中圈分类号 : 9R 27 . 2 文献标识码 : A 文章绷号 : 10 8很 9 x( 2 o 8 )08 月拟抖刁 3
eD et r 亩an iot n th e C o n et n t of Em侧助 in s加血n T a b l e st by I P L C
Ch e gn D
o n盯an , W an g U s h u , W an g H山 s h e n g ( Ji li n I n s t it u t e of C hi n e s e M a te ir a M de ie a , C ih 切罗 hu n 13的 2 1 , Ch ian ) ; U u Y o n gh o n g
( K e y 肠 bo ar to 口 o f M iar n e B i o 一esr cour es uS st 山
n
ab le U t i li
z at io
n , S o u th Ch in a eS a I n ist ut te Of o e
e
an o lo gy
,
C ih ne s e A
e
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e m y o f cS i
-
通讯作者 :刘永宏 ,男 ,研究员 ,从事天然药物中活性成分的分离研究。 E一m蒯 : c d yan 12 25 @ os hu . 。 ,
e死梦
中阅药师 珊 s年第 11卷第 8期 e h in a Ph nac i
s t Z的 8 , v ol · 1 1 NO
e n e es )
A B ST R A C T o bj ec U视 : OT e s tab lis h a HPLC m het od for d e te mr i n a t io n ht e e on t e n t Of e m od i n i n Sh e li an tab le t s . M e比ed : T he S hi-
m
ads
u V p
一
O D S C : 。 e o lu mn ( 150 m m
x 4
.
6
un
,
5 卜m )aws
u s e d ;仆 e mo bil e ph as e w as me th a n ul 一 0 . 4% ph o s ph o ir e ac id s o lu tio n ( 74
: 2 6 ) ; hT e n ow art e aws
0
.
9 耐 ·而 n 一 ’ ; hT e d e te e ti o n aw v e le n ght aws 2 54 n m ;侃 t e m伴art u er of c o lu m n w as 30 ℃ . R es u lt : hT e lin e -
ar anr 罗 Of e m do i n w as 0
.
03 一 0
.
34陀 ( r 二 0 . 99 4 ) . hT e va e r ag e er e o v e汀 w as 10 1 . 0 % iw ht RS D 1 . 8% ( n 二 6 ) . C o n e lus io n : Th e
m e ht do 1
5 s im p l e an d ac e u art e
.
I t e an be u se d fo r q u al iyt e o n加1 Of Sh e lian abt let s .
K E Y W O RD S Sh e li an tab le s ; Em do i n ; HPL C
蛇莲片是由白花蛇舌草 、丹参 、虎杖人参等十六味中药
组成的复方制剂 ,具有一定的控制肿瘤增长的作用 ,虎杖为
方中主要药物之一 ,大黄素等葱酿类物质为其主要有效成
分 。 为了保证临床用药的安全有效 ,我们采用高效液相色谱
法对制剂中的大黄素含量进行测定〔’ 一 4 〕 ,结果表明方法简
便 、快捷 、准确 ,可有效控制蛇莲片的内在质量 。
, 仪器与试药
岛津 LC一 10 A高效液相色谱仪 , SDP 一 10 A 紫外检测器 ;大
黄素对照品 (供含量测定用 ,批号 : l or 756 . 2X() 110 )购于中国
药品生物制品检定所 ; 蛇莲片由长白山中医药研究所提供 ;
水为重蒸馏水 , 甲醇为色谱纯 ,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2
.
1 瘩液的制备
2
.
1
.
1 对照品溶液 精密称取大黄素对照品适量 ,加甲醉
制成每 I inl 含 巧 此 的溶液 ,作为对照品溶液 。
2
.
1
.
2 供试品溶液 取本品 20 片 ,除去糖衣 ,精密称定 ,
研细 ,取约 1 . 2 9 ,精密称定 , t 磨口锥形瓶中 ,加甲醇 25 耐
回流提取 2次 ,每次 30 而 n ,滤过 ,合并滤液 ,定量转移至 50
耐量瓶中 ,以甲醇稀释至刻度 ,摇匀 。 精密吸取 10 d 于 l的
耐烧瓶中 ,沸水浴挥去溶剂 ,残渣加人 2 . 5 mo l · L 一 ’硫酸溶液
40 祖 ,置电热套中回流提取 l h ,放冷至室温 ,再加三抓甲烷
30 耐 ,水浴回流提取巧 而n ,放冷 ,移置分液漏斗中 ,分取三
抓甲烷层 ,水层再以三抓甲烷振摇提取 2 次 ,每次 20 以 ,合
并三氛甲烷液 , 以水洗涤 2次 ,每次加 inl ,弃去洗液 ,三抓甲
烷层加无水硫酸钠 2 9 ,搅匀 ,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加甲醉适
t 使溶解 ,并定量转移置 10 耐 量瓶中 ,加甲醇至刻度 , 摇
匀 ,用微孔滤膜 ( 0 . 45 卜m )滤过 ,即得。
2
.
1
.
3 阴性样品 按处方比例去掉虎杖的阴性样品 ,按供
试品溶液制备方法制备成阴性样品溶液。
2
.
2 色讲条件及系统适用性试脸
色谱柱 : 岛津 O D S一C : . 柱 ( 150 un x 4
.
6 m m
,
5阿 ) ;流
动相 : 甲醉刁 . 4% 磷酸溶液 ( 74 : 26 ) ; 检测波长 : 25 4 nm ;柱
温 : 30 ℃ ;流速 :。 . g d · 而n 一 ’ ;取对照品溶液 ,供试品溶液及
阴性样品溶液各 or 闪。 注人液相色谱仪测定 ,记录色谱图 ,
蛇莲片中大黄素峰与其他组分分离完全 ,且分离度 > 1 . 5 ,阴
性样品在大黄素峰相应位置处无吸收峰 ,阴性样品液对测定
无干扰 ,见图 1 。
2
.
3 线性关系考察
精密称取大黄素对照品 5 . 72 m g , ! 10 d t 瓶中 ,加
甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品溶液。 精密吸取
对照品溶液0 . 1 , 0 . 2 , 0 . 4 , 0 . 6 , 0 . 8 , 1 . 2 耐 ,分别 t Z 以 t 瓶
中 ,加甲醉稀释至刻度 ,摇匀 。 分别吸取上述对照品溶液各
or 闪 ,按 “ 2 . 2 ” 项下色谱条件进样测定。 以进样量为横坐
标 ,峰面积为纵坐标 , 经线性回归 , 回归方程为 Y 二 2 . 7 、
10` x 一 1
.
26 x 20` , ; 二 0
. 卯9 4 ,表明大黄素在0 . 0 3 一 0 · 34 林g
之间与峰面积线性关系良好 。
) 5 1 0 15 20 2 5 1 {
0 5 10 1 5 20 25 30 口m i n
10 15 20 2 5 30口m in
C
A
. 阴性样品 B . 对照品 C . 供试样品 1 . 大黄素
圈 1 HPL C 色诺圈
2
.
4 精密度试脸
取同一对照品溶液 ,重复进样 10 闪 , 6 次 ,测定峰面积 ,
大黄素人5刀为0 . 9% ( n 二 6 ) 。
2
,
5 德定性试脸
取同一供试液 (批号 : 0 5汉 10 ) 10 闪 ,分别在 0 , 1 , 2 , 4 , 6 ,
s h 进样测定峰面积 ,供试液在 s h 内稳定沐5刀 二 1 . 3% ( n 二
6 )
。
2
.
6 重复性试验
取同一批号样品 (批号 05 以 or ,平均片重0 . 40 30 『片 )6
份 ,照 “ 2 . 1 . 2 ” 项下方法制备供试液 ,进样 10 闪 ,依 “ 2 . 8 ” 项
下方法测定 ,大黄素含量为 0 . 32 m了片 ,邢刀 二 1 . 9% ( n 二
6 )
。
2
.
7 回收率试脸
取已知含量的样品 (批号 05 以 10 ,平均片重0 . 40 30 岁
片 )精密称定 ,分别定量加人大黄素对照品溶液 ( 0 . 862 m了
耐 ) 1 耐 ,照 “ 2 . 1 . 2 ” 项下方法制备供试液 ,依 “ 2 . 8 ” 项下方
法测定 ,进样 5 闪测定 ,结果见表 1。
襄 , 大黄众回收率侧定绪 . 《 n 二 6)
样品称 t 样品原有 t
( g ) (叱 )
加人对
照品 t
( gm )
侧得 t 回收率 平均回收率
( gm ) (% ) (% )
月S D
(% )
1
.
13 72
1
.
15 46
1
.
16 87
1
.
15 68
1
.
22 72
1
.
2 389
76 卯 8
79 1X()
,
9
8 1 102
.
1 10 1
80 】02 . 0
87 10 3
.
2
83 9 8
.
1
86n
ù
09023800
样品浏定
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10 闪 ,注人液相
必哎夕
w w w 汉叮5 .o r g 研究击文
正 颈 灵 胶 囊 的 质 t 标 准
夏德紊 胡剑 (邵阳市药品检验所 湖南邵阳 2 42 0) 1
摘 要 目的 :建立 正颐灵胶囊的质童标准。 方法 :采用 几 C法对丹参、 川茸、 延胡索、 白芍进行定性分析 ; 采用 HP LC法测
定葛根中荡根素的含 1。 结果 :T LC图讲斑点清晰 , 阴性样品 无干扰 ; 茜根素在0 . 04 一 0 . 81 陀 范围内线性关系良好 ( r 二
0
.
9 9 9)
,平均回收率1的 . 7% , 人5刀为 0 . 7 % ( n 二 5 ) 。 结论 : 该方法专属性强 ,灵教度高 ,重现性好 ,可用于正颐灵胶 t 的质
童控制。
关扭词 正颈灵胶囊 ; 茜根素 ; 薄层色语法 ; 高效液相色语法
中圈分类号 : T则印 . 7 ’ 2 文献标识码 : A 文章编号: 10 8 ( 岭9 x( 2的 8 )08 碱州拓刁3
S t u dy on Q u ial yt Sat n d a dr fo r Z he 叼刃此如9 C aP sul es
X i a De h ao
,
Hu Ji a n ( Shvao an g I
n s ti tu te fo r Dur g C o n t or l
,
H u n an Sh a
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y an g 42 2X() l
,
Ch ian )
妞 S TRA C T O讨伙灯ve : OT e sabt li s h ht e q u al iyt e o n oltr s ta n dadr for Z he n幻in g lin g e即s u l e s . Me 比de : 双记众 et hr 如。 :曲沁 m以￡-
沁诚姗 , 人心认 a咭e l~ si ne o is , hR 如me co 理翻 15 a dn Rad 认 尸泌 a t iale i n Zh e嘀 i n砂i吧 e即 s u l e s w e er ide n t击de by LT C ; hT e e o n -
t e nt Of p u e iar
n w a s d e t e mr in e d by HP L C
.
R es ul t : T he TLC s卯 rt s de v e lo伴d we er iaf lr y e l e ar , an d ht e blank te s t s h o we d n o in te而 -r
e n e e
.
hT e e al i bar ti o n e u vr e of p u e iar
n w as li
n e ar w i ht i
n the anr 罗 Of 0
.
04 一 0
.
81 哪 ( r 二 0 . 9 9 9 ) , va e n电e ecr vo e 口 w as lX() · 7 %
an d邢 D was o
.
77% ( n 二 5 )
.
C o n c lus io n
:
hT e
s e lec t iv e n e s s
, s e n s it iv e n e s s an d er pdrD
u e i bil iyt o f the m e thdo aer gdo an d ht
e
me th do
e
an be
u s e d fo r 四al iyt c o n otr l Of Z h e n面i喀 i n g e aP s ul e s .
K E Y WO R D S Z he n幻in gl in g e a Ps ul e s ; uP e r a ir n ; T LC ; HPCL
正颈灵胶囊为邵阳市中西医结合医院配制的制剂 ,处方 ( l2 09 l8 . 20( 冲拓 ) 、 延胡索 ( 1209 28一 2X( 抖03 )对照药材 ,均由
由葛根 、丹参、 川芍 、延胡索 、芍药等 8味药材组成 ,具有活血 中国药品生物制品检定所提供 ;正颈灵胶囊 , 由邵阳市中西
通经 ,化寮止痛功效 。 主治颈椎间盘突出症 、颈椎骨质增生 、 医结合医院制剂室提供 ;硅胶 G 购自青岛海洋化工厂 ; 甲醉
肩周炎等症 。 方中葛根为君药 ,用量较大 ,为了有效地控制 为色谱纯 ;其他试剂均为分析纯 。
制剂质量 ,采用 TCL 法对制剂中的丹参 、川芍 、延胡索 、 芍药 2 方法与结果
行定性分析 ,采用高效液相色谱法对葛根中的葛根素进行含 2 . 1 薄层鉴别
量测定川 。 结果该方法简单 ,准确 , 重现性好 ,操作简捷 ,适 2 . 1 . 1 丹参 取本品内容物 6 9 ,加乙醚50 耐 ,超声提取 30
用于该产品质量控制 。 m i n ,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加乙酸乙醋 1 耐 使溶解 , 作为供
1 仪器与试药 试品溶液 ;取除丹参外的其他处方量药材 ,按制备工艺方法
Wat e sr 152 5型高效液相色谱仪 ;葛根素对照品 ( 1107 52 、 制成阴性样品 ,按上法制成阴性样品溶液 。 另取丹参酮 n A
2加5 11 ,供 含量测 定用 ) 、 丹参 (l 209 23 一以” 0 8 ) 、 川芍 对照品 ,制成每 1耐 含 2 m g 的溶液 ,作为对照品溶液 。 照薄
作者简介 :夏德豪 , 男 , 主管药师 ,从事药品检验工作。 E一m ial :石 ad he a必58 @ , ian . c o m
色谱仪 ,依 “ 2 . 2 ” 项下色谱条件测定 ,测定结果见表 2 。
农 2 蛇准片中大黄众含 t 浏定结果 ( n 二 2)
水中加人磷酸后峰形得到明显改善 ,故采用甲醉刁 . 4% 磷酸
溶液作为流动相。
批号 大黄素含t ( m『片 ) 平均含量 参 考 文 献
05 04 12 0
.
368 0
.
3 6 9 0
.
369
0 504 14 0
.
33 1 0
.
3 2 8 0
.
329
0504 16 0
.
37 4 0
.
3 7 1 0
.
37 3
3 讨论
3
.
1 检测波长的选择
紫外光谱图显示大黄素在 254 n m 有最大吸收 ,故选定
25 4
n m 为大黄素含量测定的检测波长 。
3
.
2 流动相的选择
以甲醇一水为流动相时分离效果尚可 ,但有拖尾现象 ,在
史自东. 高效液相色谱法测定奇应内消青中大黄素 、大黄盼总 t 〔J〕. 湖北
中医杂志 , 2仪巧 , 28 ( 8 ) : 53一5
顾蔚华. H P比 侧定苦黄注射液中大黄素、 大黄酚的含 t 【J] . 中成药 ,
2仪巧 , 28 ( 7 ) : 107 5一 107 6
许乾丽 . HP L C法侧定六味安消胶囊中大黄紊、 大黄酚的含 t 【J 〕. 中国药
品标准 , 2X( 巧 , 7 ( 3 ) : 4 5 47
余有庆. HP比法侧定柔肤愈裂推贴中大黄素的含t 【J] . 中国中医药信息
杂志 , 2以拓 , 13 ( 6 ) : 53一5
(岌刃不 1 场 收稿 2X() 8砚 一 14 修回 )
及沼 .