全 文 ：　第 24卷第 1期　　　　　　佛山科学技术学院学报 (自然科学版 )　 V ol. 24 No. 1
　 2006年 1月　 Journa l of Foshan Universi ty ( Na tural Science Edi tion) Jan. 2006
文章编号: 1008-0171( 2006) 01-0077-04
华南可爱花组织培养快速繁殖技术研究
萧洪东 ,聂磊 ,王惠珍 ,梁火娣
(佛山科学技术学院 园艺系 ,广东 佛山 528000)
摘要: 以华南可爱花 ( Eranthemum austrosinensis )茎段、腋芽为外植体 , MS为基本培养基 ,探讨 6-BA, TDZ,
N AA和糖在华南可爱花离体培养中 ,对愈伤组织诱导不定芽及 NAA, IBA对不定芽生根和试管苗移栽成活率
的影响。 结果表明: 6-BA 0. 6 mg· L- 1+ N AA0. 1 mg· L- 1和 M S+ 6-BA0. 4 mg· L- 1+ N AA0. 1 mg· L- 1+
TDZ0. 05 mg· L- 1对愈伤组织诱导不定芽较好 ; 1 /2M S+ IBA 0. 2 mg· L- 1和 1 /2 MS+ N AA 0. 4 mg· L- 1对
促进华南可爱花不定芽生根效果较好 ,试管苗移栽成活率达 95%以上。
关键词: 华南可爱花 ;组织培养 ;育苗
中图分类号: S68　　　　文献标识码: A
华南可爱花 ( Eranthemum austrosinensis )又名喜花草 ,爵床科可爱花属 ,常绿灌木植物 ,喜温暖 ,怕
低温 ,最好将环境温度保持在 18～ 28℃间 ,环境温度不宜低于 15℃ [ 1 ]。适于室内盆栽 ,且冬季开花 ,花香
淡淡 ,可爱怡人。
上个世纪 90年代以来 ,南方山区随处可见的野生植物被广泛利用。华南可爱花、野牡丹、草果、桃金
娘、细辛和蕨类也愈来愈深受园林界人士的垂青。但是这类植物的苗木大多是从乡村旷野中挖掘移植、
扦插、分株、压条、嫁接等措施进行植株繁殖 ,开发力度较大 ,资源愈来愈少。 本文采用组织培养方法 ,研
究培养基因子对诱导华南可爱花再生植株的影响 ,为开发华南可爱花在园林绿化中的应用和保护野生
华南可爱花资源提供参考。
1　材料与方法
1. 1　供试材料
取生长健壮的华南可爱花植株为外植体。
1. 2　方法
1. 2. 1　建立无菌系 [ 2]
将华南可爱花植株茎段用自来水冲洗干净 ,并剥去植株外层老叶和叶鞘 ,切掉茎尖嫩叶 ,用洗洁精
和软毛刷擦洗干净 ,冲洗干净后沥干水分。然后将材料切成长度为 1 cm左右的茎段 (带腋芽或顶芽 ) ,先
经 75%的酒精溶液消毒 15 s,再将茎段置于 0. 1%的升汞 ( Hg Cl2)溶液中浸泡 10～ 15 min并摇动消毒液 ,
最后用无菌水冲洗 4～ 5次。然后将茎段接入培养基 MS+ 6-BA2. 0 mg· L- 1+ N AA0. 1 mg· L- 1+
TDZ0. 01 mg· L- 1中 ,培养 20 d左右 ,侧芽部位会长出绿色的致密愈伤组织。
1. 2. 2　继代增殖
以 M S为基本培养基 ,添加不同浓度的 6-BA, TDZ和 NAA及 6-BA0. 4 mg· L- 1+ N AA0. 1
收稿日期: 2005-11-25
资金项目: 佛山科技发展专项基金 ( No. 0102009A)
作者简介: 萧洪东 ( 1967-) ,男 ,广东兴宁人 ,佛山科学技术学院讲师。
mg· L- 1条件下添加不同质量的糖。 将经诱导分化的愈伤组织切割后接种于培养基中 ,每个处理接 6
瓶 ,在温度为 20～ 25℃ ,光照度 1 500～ 2000 lx ,光照时间为 12 h· d- 1下培养 28 d后统计出芽率 ,重复三
次 ,并记录总芽数和出苗数。
1. 2. 3　诱导生根
生根试验中 ,在 MS, 1 /2M S条件下 ,添加不同浓度的 IBA和 NAA。选健壮无根苗接种 ,每瓶 3苗 ,每
个处理接 6瓶 , 28 d后统计生根率与发根条数 ,重复三次。
1. 2. 4　试管苗移栽
培养 30 d后 ,株高达 30 mm左右时 ,即可进行移栽。移栽前统计试管苗的苗高、根长和条数、叶片
数。为了提高试管苗移栽的成活率 ,还应在移栽前进行炼苗。首先将试管瓶移到阴棚下培养 3～ 5 d,再将
瓶盖打开继续培养 3～ 4 d,空气相对湿度要保持在 80% ～ 90%之间 ,温度在 23～ 25℃之间。然后洗去根
部培养基 ,移入砂和已堆沤腐熟的椰子壳混合 ( 2∶ 8)苗床上 ,应特别注意做好保温、保湿 (湿度保持在
80%以上 )、遮光等管理工作。
2　结果与分析
2. 1　 6- BA对愈伤组织诱导不定芽的影响
在一定浓度范围内 ,随着 6-BA浓度增加 ,诱导不定芽株数不断增加 ,当 6-BA浓度达到 0. 6时 ,增殖
倍数达到最大值 6. 55。随着 6-BA浓度增加 ,不定芽的苗数反而不断减少 (见表 1) ,说明 6-BA浓度较低
时有利于诱导不定芽。
表 1　 6-BA对愈伤组织诱导不定芽的影响
处理 激素组合 ( mg· L- 1 ) 原不定芽数 (株 ) 不定芽数 (株 ) 增殖倍数 生长状态
1 6-BA 0. 2+ NAA 0. 1 4. 10 18. 33 4. 47 苗较幼小 ,叶较绿 ,生长较好
2 6-BA 0. 4+ NAA 0. 1 2. 83 14. 70 5. 19 苗较壮 ,叶深绿 ,生长较好
3 6-BA 0. 6+ NAA 0. 1 2. 78 18. 22 6. 55 苗较高 ,叶青绿 ,生长最好
4 6-BA 0. 8+ NAA 0. 1 2. 75 11. 50 4. 18 苗幼小 ,叶青绿 ,生长一般
5 6-BA 1. 0+ NAA 0. 1 3. 33 11. 95 3. 59 苗壮 ,叶深绿 ,生长较好
注: 不定芽普遍健壮、较高大且整齐的划分为 “最好”级 ;材料生长情况较好 ,但芽的高度参差不齐的划分为“较好”级 ;材
料生长情况一般的划分为“一般”级 ;材料瘦弱 ,甚至有枯黄、萎蔫现象的划分为“较差”级 [3]。 以上数据取三次试验的
平均值 (下同 )。
2. 2　 TDZ对诱导芽分化的影响
TDZ( Thidiazuron)是近年来发现的一种人工合成的具有细胞分裂素活性的物质 ,其分子式为
C9 H8N4OS,分子量为 220. 2,化学名称为 N′-苯基-1, 2, 3-噻二唑 -5-脲。在培养基中添加低浓度 TDZ能促
进愈伤组织生长 ,促进侧芽及不定芽发生 ,促进胚状体的形成 [4 ]。从表 2中可以看出 , TDZ对诱导不定芽
有促进作用 ,浓度较低时 ( TDZ0. 05) ,不定芽增殖倍数最大 ,达 7. 54,随着浓度的增加增殖倍数不断减
少。
表 2　 TDZ对诱导不定芽的影响
处理 激素组合 ( mg· L- 1 ) 原不定芽数 (株 ) 不定芽数 (株 ) 增殖倍数 生长状态
1 6-BA0. 4+ N AA0. 1+ TDZ 0 2. 83 14. 70 5. 19 苗较壮 ,叶较绿 ,生长较好
2 6-BA0. 4+ N AA0. 1+ TDZ0. 05 3. 12 23. 52 7. 54 苗较壮 ,叶深绿生长最好
3 6-BA0. 4+ N AA0. 1+ TDZ0. 10 2. 58 16. 10 6. 24 苗较高 ,叶青绿 ,生长较好
4 6-BA0. 4+ N AA0. 1+ TDZ0. 15 2. 95 17. 37 5. 89 苗壮 ,叶青绿生长较好
5 6-BA0. 4+ N AA0. 1+ TDZ0. 20 3. 32 18. 86 5. 68 苗壮 ,叶深绿 ,生长较好
2. 3　糖对愈伤组织诱导不定芽的影响
糖类在培养基中除了作为碳源合能源外 ,还具有维持培养基一定渗透压的作用 ,糖的适宜浓度一般
为 2～ 4% [4 ] ,。 据王侠礼 [5 ]对香花槐微体快繁的研究表明蔗糖对诱导不定芽、愈伤组织有一定的促进作
用。表 3结果表明 ,在 6-BA 0. 6+ N AA 0. 1时 ,糖浓度 30 g· L- 1不定芽增殖倍数最大 ,达到 5. 71,苗壮 ,
整齐度好 ,且有 3～ 5条粗根 ,对诱导不定芽较为合适。
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表 3　糖对诱导不定芽的影响
处理 糖浓度
( g· L- 1 ) 原不定芽数 (株 ) 不定芽数 (株 ) 增殖倍数 生长状态
1 25 5. 00 16. 80 3. 36 苗较壮 ,叶青绿生长一般
2 30 4. 29 24. 49 5. 71 苗壮 ,叶绿 ,有粗根 ,生长最好
3 35 3. 71 14. 72 3. 97 苗较壮 ,叶青绿有长根生长较好
4 40 3. 67 15. 85 4. 32 苗较壮 ,叶青绿 ,有长根 ,生长较好
　　　　　注: MS(不加糖 )+ 6- BA 0. 6+ N AA 0. 1
2. 4　在 MS, 1 /2M S条件下 , IBA, N AA对不定芽生根的影响
表 4, 5结果表明 , 无论在 MS, 1 /2M S培养基中 ,添加 NAA, IBA的每株平均根数、生根率、试管苗移
栽成活率均高于不加 NAA, IBA;在 MS培养基中均是 NAA, IBA浓度为 0. 4 mg· L- 1效果较好 ;在 1 /
2M S培养基中 , N AA的效果比 IBA的效果要好 ;无论是添加 NAA还是 IBA, 1 /2M S培养基的效果均好
于 MS培养基 ,以 1 /2M S+ IBA 0. 2和 1 /2 M S+ N AA 0. 4效果最好。
表 4　在 M S, 1 /2M S条件下 , IBA对不定芽生根的影响
处理 激素 出根 /d 平均根数 (株 ) 生根率/% 成活率/%
1 M S+ IBA 0 　 15. 67 　　 4. 5 　 52. 56 　 84. 80 出根少 ,根有 3～ 10cm长 ,有须根 ,生长一般
2 M S+ IBA 0. 2 12. 25 8. 8 85. 22 86. 36 根较粗且多 ,有 5～ 10cm长 ,有须根 ,生长较好
3 M S+ IBA 0. 4 12. 33 11. 1 81. 11 91. 23 根有 5～ 10cm长 ,须根多 ,生长最好
4 1 /2MS+ IBA 0 13. 20 6. 33 66. 67 86. 25 出根较多 ,根幼且长 ,有须根 ,生长一般
5 1 /2MS+ IBA 0. 2 12. 67 11. 67 83. 33 95. 12 根有 15cm长 ,较粗 ,多须根 ,生长极好
6 1 /2MS+ IBA 0. 4 12. 10 9. 67 85. 00 96. 64 根长 ,须根多 ,生长较好
表 5　在 MS, 1 /2M S条件下 , NAA对不定芽生根的影响
处理 激素 出根 /d 平均根数 (株 ) 生根率/% 成活率/%
1 M S+ N AA 0 14. 23 8. 00 58. 33 86. 64 出根少 ,根细长 ,有须根 ,生长较差
2 M S+ N AA 0. 2 12. 23 17. 20 88. 33 88. 19 根粗 ,须根粗且长 ,生长极好
3 M S+ N AA 0. 4 12. 53 12. 60 91. 67 93. 28 根粗但较短 ,大部分有须根 ,生长较好
4 1 /2 MS+ NAA0 13. 10 10. 30 75. 00 92. 13 根幼且长 ,有须根 ,生长一般
5 1 /2 MS+ NAA 0. 2 12. 35 15. 10 85. 00 96. 24 根较长且粗 ,须根多且长 ,生长较好
6 1 /2 MS+ NAA 0. 4 12. 55 27. 67 87. 50 98. 00 根粗且长 ,须根多、长且粗 ,生长极好
3　小结与讨论
( 1)试管苗生产的最终目的是大量、快速繁殖优良种苗。 因此 ,如何培养健壮试管苗、提高试管苗移
栽的成活率 ,从而降低成本是每个生产者都十分关注的问题。本试验对华南可爱花诱导芽分化增殖和不
定芽生根情况进行了初步的研究。 结果表明: M S+ 6-BA0. 6 mg· L- 1+ N AA0. 1 mg· L- 1和 M S+ 6-
BA0. 4 mg· L- 1+ N AA0. 1 mg· L- 1+ TDZ0. 05 mg· L- 1对诱导不定芽分化增殖能力较好 ;蔗糖对诱
导芽分化增殖不明显 ;在生根试验中以 1 /2M S+ IBA 0. 2和 1 /2 M S+ N AA 0. 4对促进可爱花不定芽生
根效果较好 ,试管苗移栽成活率达 95%以上。
( 2)在试验过程中 ,出现部分试管苗玻璃化现象。对试管苗的玻璃化现象的研究曾有报道 ,有人认为
玻璃化苗植物是内部生理失调的外在表现 [7 ] ,也有人认为形态结构上的畸形导致了功能上的障碍 ,或是
一些生理指标的变化表现出玻璃苗的特征 [8 ] ,还有人认为培养基中的水分和相对湿度是导致玻璃化的
主要原因 [9 ]。同时也出现了随着室温的变化而导致生长滞后。在植物组织培养中 ,不同植物繁殖的最适
温度不同 ,大多为 ( 25± 2) ℃。 这些问题有待进一步深入研究。
参考文献:
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79第 1期　　　　　　　　　萧洪东等:华南可爱花组织培养快速繁殖技术研究
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v irtr o [ J]. Plant Cell. Tissue and Drgan Culture, 1982, 2( 1): 55-65.
The effect of culture factors
in propagation of eranthemum austrosinensis
XIAO Hong-dong , N IE Lei, WANG Hui-zhen, LIANG Huo-di
( Ho rticulture Depar tment, Foshan Univ ersity, Foshan 528000, China)
Abstract: The stem segments and the auxiliary buds of Eranthemum aust ro sinensis as the explants
w ere cul tured on M S elementary culture medium. This experimenta tion w as to research into the ef fect
o f 6-BA, IBA, N AA and sucrose on inconstant buds o f callus induction, callus induction’ s seedling
radication and cuvet te seedling s t ransplanting surviv al. The results shew that i t w as more sui table fo r
inconstant buds o f callus induction wi th 6-BA 0. 6 mg· L- 1+ N AA0. 1 mg· L- 1and 6-BA 0. 6 mg ·
L
- 1
+ N AA0. 1 mg· L- 1+ TDZ0. 05 mg · L- 1 , and 1 /2M S+ IBA 0. 2mg · L- 1 , and 1 /2M S+ N AA
0. 4mg · L- 1 to better accelerate inconstant buds g row th and radication. Seedling s t ransplanting
surviv e rate achiev ed 95% upw ards.
Key words: eranthemum austro sinensis; ti ssue culture; g row seeding
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