全 文 ：育苗技术　Ｓｅｅｄｌｉｎｇ　Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ
２６　 ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ　ＦＯＲＥＳＴＲＹ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ
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年
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期
　
林
业
实
用
技
术
顶果木叶芽组织培养繁殖技术＊
谌红辉　王小宁　马　跃　刘光金　刘志龙
（中国林科院热带林业实验中心　广西　凭祥　５３２６００）
［摘要］　本研究采用顶果木叶芽作外植体，研究总结了顶果木
的组织培养繁殖技术。结果表明，叶芽外植体用７０％酒精消
毒１０ｓ，再用１０％的 Ｈ２Ｏ２ 消毒５ｍｉｎ效果最好，叶芽外植体
转接到诱导分化培养基后，暗培养７ｄ后再全光培养，诱导成
功率达５５．２％。顶果木适宜的继代增殖培养基为 ＭＳ＋６－
ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ，增殖系数可达
３．６。组培芽苗采用生根培养基１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋
ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．３ｍｇ／Ｌ培养，生根率可达８２％。
［关键词］　顶果木　组织培养　叶芽外植体　培养基
顶果木（Ａｃｒｏｃａｒｐｕｓ　ｆｒａｘｉｎｉｆｏｌｉｕｓ　Ｗｉｇｈｔ）为国家三级保
护树种。落叶乔木，高可达４０ｍ，胸径１．５ｍ，广泛分布于广西
西南部、西部，贵州西部和云南南部地区。适生于各种土壤，在
石山区 与 土 山 区 均 有 分 布，耐 干 旱，广 泛 分 布 于 海 拔
２００～８００ｍ的丘陵低山地区。干形通直圆满，材质纹理美观，
质地细密，抗腐性好，是优良的工业用材树种，也可做纤维原料
林培育树种［１］。现南方正大力推广种植，但良种壮苗为亟待解
决的问题。组培快繁技术是解决优良无性系造林用苗的良好
途径［２－５］，因此，开展顶果木的组培繁殖技术研究，有利于在短
期内解决良种苗木的生产需求问题。
１　试验材料与方法
１．１　试验材料
试验采用顶果木的幼嫩叶芽作组培繁殖材料。将顶果木
的半年生苗进行截干促萌，截干高度３０ｃｍ，采集幼嫩的萌生
叶芽作试验外植体。
１．２　试验方法
１．２．１　外植体材料的采集与消毒　剪取顶果木截干苗萌生的
健壮新叶芽，剪除多余的叶片后用洗洁精充分洗净，然后每根
叶芽剪取１．５～２．０ｃｍ长放置到超净台上的无菌器皿中进行消
毒处理。外植体采用３种消毒处理方法：①用１０％的 Ｈ２Ｏ２ 消
毒８ｍｉｎ，②７０％酒精消毒１０ｓ，再用１０％的Ｈ２Ｏ２ 消毒５ｍｉｎ，③
用０．１％的ＨｇＣｌ２ 加吐温８０　２～３滴的混合液消毒６ｍｉｎ。３种
处理各消毒２０棵外植体，消毒后的外植体均用无菌水清洗３～５
次，用无菌滤纸吸干水后接种到１／２ＭＳ＋６－ＢＡ　１ｍｇ／Ｌ＋
ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ诱导培养基中。
１．２．２　芽的诱导分化　将３种消毒方式处理后的外植体接种
于诱导培养基后，各平均分成２份，分别用２种光照培养方式
进行芽的诱导分化，即：①全光照培养，②暗培养７ｄ后再全光
培养。培养３０ｄ后观测统计外植体的生长情况，见表１。
１．２．３　继代增殖培养　将诱导成功的芽分别接种在不同的增
殖试验培养基上，以筛选增殖效果最佳的培养基。培养温度为
２５～３０℃，光照条件为８～１０ｈ／ｄ。继代增殖培养基的配制采
用正交设计，设计因子与水平见表２。
１．２．４　组培苗的生根培养　苗芽增殖到一定数量后进行生根
培养，生长调节剂选用 ＮＡＡ、ＩＢＡ、６－ＢＡ　３种。生根培养基的
筛选采用正交设计方法，设计因子与水平见表２。
２　结果与分析
２．１　外植体材料的消毒与芽的诱导分化
表１　外植体材料的消毒与芽的诱导分化结果统计
序号 消毒处理 培养方式
接种外植
体数／棵
消毒成
功数／棵
消毒成
功率／％
诱导成
功数／棵
诱导成
功率／％
１
用１０％的
Ｈ２Ｏ２消毒８ｍｉｎ
全光照培养暗
培养７ｄ后再全光培养
１０　 ６　 ６０．０　 ２　 ３３．３
１０　 ５　 ５０．０　 ３　 ６０．０
２
７０％酒精消毒１０Ｓ，
再用１０％的 Ｈ２Ｏ２消毒５ｍｉｎ
全光照培养暗
培养７ｄ后再全光培养
１０　 ８　 ８０．０　 ３　 ３７．５
１０　 ８　 ８０．０　 ４　 ５０．０
３
用０．１％的 ＨｇＣｌ２
加吐温８０　２～３滴混合液消毒６ｍｉｎ
全光照培养暗
培养７ｄ后再全光培养
１０　 ６　 ６０．０　 ３　 ５０．０
１０　 ７　 ７０．０　 ４　 ５５．６
＊２０１０年广西科学研究与技术开发计划项目（桂科攻１０１０００１２）。
作者简介：谌红辉（１９６８—），高级工程师，主要从事人工林培育理
论与技术研究。
　　从表１的统计结果分析可知，顶果木外植体的消毒处理方
式以７０％酒精消毒１０ｓ，再用１０％的 Ｈ２Ｏ２ 消毒５ｍｉｎ效果最
好，平均消毒成功率为８０．０％，２种光照培养方式以暗培养７ｄ
后再全光培养的诱导方式为好，平均诱导成功率为５５．２％。
DOI:10.13456/j.cnki.lykt.2012.10.028
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表２　增殖、生根培养基正交试验设计因子与水平
培养基
种类
序号 因子
水平
１　 ２　 ３　 ４
增殖
培养基
１ ＭＳ用量 全量 ２／３ＭＳ　１／３ＭＳ　１／４ＭＳ
２　 ６－ＢＡ（ｍｇ／Ｌ） ０．３　 ０．５　 １．０　 ２．０
３ ＫＴ（ｍｇ／Ｌ） ０　 ０．５　 １．０　 １．５
４ ＮＡＡ（ｍｇ／Ｌ） ０　 ０．２　 ０．４　 ０．８
生根
培养基
１ ＭＳ用量 ２／３ＭＳ　１／２ＭＳ　１／３ＭＳ　１／４ＭＳ
２ ＮＡＡ（ｍｇ／Ｌ） ０．５　 １．０　 １．５　 ３．０
３ ＩＢＡ（ｍｇ／Ｌ） ０．３　 ０．５　 １．０　 ２．０
４　 ６－ＢＡ（ｍｇ／Ｌ） ０　 ０．１　 ０．３　 ０．５
２．２　芽的继代增殖培养
外植体叶芽诱导成功后，当其伸长至一定长度时开始转接
至增殖试验培养基上，进行继代增殖培养试验，４０ｄ后对苗芽
的增殖情况进行统计。试验结果见表３。
根据表３的统计结果分析可知：４种试验因子中６－ＢＡ与
ＮＡＡ因子的增殖系数极差较大，证明该两种因子为重要因子，
试验结果对浓度水平的变化极为敏感。根据正交试验设计的
分析方法可总结出４种增殖效果较好的水平组合：Ａ （ＭＳ＋６－
ＢＡ０．３ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ）、Ｂ（ＭＳ＋６－
ＢＡ０．３ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．４ｍｇ／Ｌ）、Ｃ（ＭＳ＋６－
ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ）、Ｄ（ＭＳ＋６－ＢＡ
０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．４ｍｇ／Ｌ）。以上 Ａ、Ｃ、Ｄ组
合并没在正交试验设计的１６种组合中出现，为此，按以上４种
组合配制培养基又做了一次辅助试验，结果 Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ　４种培
养基的繁殖系数分别为３．２、３．６、２．８、２．４。因此，顶果木组培
苗的继代增殖培养基采用 ＭＳ＋６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ
＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ，增殖效果较好。
表３　正交试验继代增殖系数统计
序号 因子
水平
１　 ２　 ３　 ４ 极差
１ ＭＳ用量 ２．３　 ２．１　 ２．０　 １．８　 ０．５
２　 ６－ＢＡ（ｍｇ／Ｌ） ２．２　 ２．４　 ２．０　 １．６　 ０．８
３ ＫＴ（ｍｇ／Ｌ） ２．１　 ２．３　 ２．０　 １．８　 ０．５
４ ＮＡＡ（ｍｇ／Ｌ） ２．１　 ２．４　 ２．０　 １．７　 ０．７
２．３　组培苗的生根培养
组培芽苗增殖到一定数量后，将组培芽苗接种入生根试验
培养基进行培养，３０ｄ后统计生根率，以寻找生根率较高的生
长调节剂种类与配比。根据表４的统计结果分析表明，ＩＢＡ与
６－ＢＡ２种激素的极差较大，证明该２种激素为主要调节因子。
根据正交试验的设计的统计分析方法，可以总结出４种较好的
水平组合：Ｅ （１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋６－
ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ）、Ｆ（１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋
６－ＢＡ０．３ｍｇ／Ｌ）、Ｇ（１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ
＋６－ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ）、Ｈ（１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ１．０ｍｇ／
Ｌ＋６－ＢＡ０．３ｍｇ／Ｌ）。
表４　正交试验生根率统计 单位：％
序号 因子
水平
１　 ２　 ３　 ４ 极差
１ ＭＳ用量 ０．４５　 ０．４７　 ０．４２　 ０．３８　 ０．０９
２ ＮＡＡ（ｍｇ／Ｌ） ０．４８　 ０．４５　 ０．４０　 ０．３９　 ０．０８
３ ＩＢＡ（ｍｇ／Ｌ） ０．３５　 ０．５８　 ０．４６　 ０．３３　 ０．２５
４　 ６－ＢＡ（ｍｇ／Ｌ） ０．３９　 ０．４４　 ０．５１　 ０．３８　 ０．１３
以上Ｅ、Ｇ、Ｈ　３种组合没有在正交设计的１６种组合中出
现，为此，按以上４种组合重新配制了培养基进行生根对比试
验，Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ　４种生根培养基的生根率分别为：０．６２％、
０．８２％、０．６５％、０．５８％。因此，可以确定顶果木生根效果较好
的培养基为 １／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．５ ｍｇ／Ｌ＋６－
ＢＡ０．３ｍｇ／Ｌ。
３　结论
顶果木叶芽外植体消毒方式用７０％酒精消毒１０ｓ，再用
１０％的 Ｈ２Ｏ２ 消毒５ｍｉｎ效果最好，叶芽外植体采用诱导分化
培养基１／２ＭＳ＋６－ＢＡ　１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ，暗培养７ｄ后
再全光培养，诱导成功率达５５．２％。顶果木适宜的增殖培养基
为 ＭＳ＋６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ，增殖
系数可达３．６。组培芽苗采用生根培养基１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５
ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．５ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．３ ｍｇ／Ｌ 培养，生根率可达
８２％。顶果木组培繁殖技术的解决能为优良无性系苗木的生
产应用提供技术支撑。
参考文献：
［１］　王克健，蔡子良 ．热带树种栽培技术［Ｍ］．南宁：广西科学技术出
版社．２００８：８２－８３．
［２］　沈海龙，孔冬梅，王爱芝，等 ．树木组织培养 ．微枝试管外生根技
术［Ｍ］．北京：中国林业出版社，２００９．
［３］　王怀智 ．通过组织培养繁殖木本植物 ．植物组织培养与植树造林
［Ｍ］．北京：科学技术出版社，１９９８．
［４］　曹孜义，刘国民 ．林木组织培养及试管快繁 ．实用植物组织培养
技术教程［Ｍ］．兰州：甘肃科学技术出版社，１９９６．
［５］　陈正华 ．木本植物组织培养及利用［Ｍ］．北京：高等教育出版社，
１９８６．★