免费文献传递   相关文献

天山花楸中原花青素的可见分光光度法测定



全 文 :FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2009年 第 34卷 第 6期
蔷薇科 Rosaceae 花楸属植物天山花楸 S.tian-
schanica Rupr.为维吾尔和哈萨克族民间常用药物。
天山花楸内含黄酮类化合物(包括原花青素)、绿原
酸、双联苯酚、类山梨酸苷、生氰苷等[1-2]。药理实
验显示[3-4],天山花楸枝叶兼有止咳、平喘、强心等
多种药理功效,并且毒性很低。《中华本草》记载[5]:
民间以嫩枝叶,果实和茎皮入药。嫩枝叶和茎皮:
味苦,性寒,无毒;果实:味甘苦,性平。功能:
清热利肺,补脾生津,止咳;主治:肺结核,哮
喘,咳嗽,胃炎,胃痛,VA和 Vc缺乏症。原花青
天山花楸中原花青素的
可见分光光度法测定
Determination of of anthocyanin in S.tianschanica by
spectrophotometry
ZHI Yong-gang1,2, ZHANG Qin1, TANG Hui1*, RUI Ming1, LI Le1
(1.College of Pharacy, Key Laboratory of Phytomedicine Resources & Modemization of
TCM, Shihezi 832002; 2.First affiliated hospital of Shihezi University, Shihezi 832002)
Abstract: The method for determination of anthocyanin in S.tianschanica was set up in which reference
substance was anthocyanin. Methods: n-BuOH:HCl (95∶5) were chromogenic agent and the detection wave-
lengths were at 550 nm. Result: anthocyanin in the leaf of S.tianschanica was 1.03% (RSD% =2.4) and
anthocyanin in the fruit of S.tianschanica with the linear range of 0.04~0.16 mg/mL(R2=0.9997). Conclution: This
method is simple, convenient, rapid and suitable for determination of anthocyanin in S.tianschanica.
Key words: spectrophotometry; anthocyanin; determining content; Sorbus tianschanica.
智勇刚 1,2, 张 芹 1, 唐 辉 1*, 芮 鸣 1, 李 乐 1
(1.石河子大学药学院,新疆特种植物药资源省部共建教育部重点实验室,石河子
832002;2.石河子大学医学院第一附属医院,石河子 832002)
摘要: 以原花青素为对照品建立了用分光光度法测定天山花楸中原花青素含量的测定方法。方
法:采用正丁醇-浓盐酸(95∶5)显色系统,在 550 nm 处进行了含量测定。结果:在 0.04~0.16
mg/mL(R2=0.9997)范围内,线性关系良好;天山花楸叶中原花青素为 1.03%(RSD%=2.4),天
山花楸果中原花青素为 0.86%(RSD%= 2.1)。结论:该方法稳定、简便、快速,适于天山花楸中
原花青素的测定。
关键词: 分光光度法;原花青素;含量测定;天山花楸
中图分类号: O 657.3 文献标志码: A 文章编号: 1005-9989(2009)06-0252-03
收稿日期: 2008-07-04 *通讯作者
基金项目: 新疆建设兵团科技攻关计划医药卫生专项资金资助项目(2006GG52)。
作者简介: 智勇刚(1975—),男,陕西大荔人,药师,从事临床药学研究工作。
食品安全与检测
·252·
DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2009.06.065
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2009年 第 34卷 第 6期
素是存在于植物中的一大类双黄酮衍生物的天然
多酚化合物的总称,原花青素是由多羟基黄烷-3-
醇单元构成的低聚体或多聚体,由不同数量的儿
茶素或表儿茶素结合而成;一般简单的原花青素
是儿茶素或表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形成的
二聚体。原花青素具有极强的抗氧化性,并且还
具有保护心血管、预防高血压、抗肿瘤、抗辐射
及美容等作用[6-8]。由于它的定量研究尚未见深入
报道,为了了解天山花楸中原花青素的含量,更
全面、综合地评价这一药用植物,开发传统中药
材的潜力,对天山花楸中原花青素进行了测定 [9],
为进一步了解其药理作用和合理开发天山花楸这
一药用资源提供参考。
1 材料与试剂
1.1 实验材料
供试品采自玛纳斯林场,海拔 2000~2500 m,
由石河子大学药学院李鹏副教授鉴定为蔷薇科
Rosaceae 花楸 属植物 天 山 花 楸 S.tianschanica
Rupr.。
1.2 实验仪器
UV 2401(PC)紫外光谱仪:日本岛津;德国
Sartorius BP211D十万分之一电子分析天平;恒温
水浴锅。
1.3 实验试剂
对照品原花青素:南京青泽医药科技开发有限
公司;甲醇、正丁醇、盐酸及其他试剂:分析纯。
2 方法与结果
2.1 原花青素对照品溶液的制备
取 120 ℃常压干燥至恒质量的原花青素对照
品约 25 mg,精密称量,用甲醇溶解并移至 50 mL
容量瓶中,甲醇定容,得原花青素对照品溶液。
2.2 天山花楸叶(果)供试品溶液的制备
取 60 ℃常压干燥至恒质量的天山花楸叶(果),
约 4 g,各 3份,置于 100 mL的圆底烧瓶中,加
60%乙醇约 50 mL,80 ℃加热回流 2次,每次 2 h,
合并滤液,乙醇定容于 100 mL容量瓶中,再精密
移取 3 mL,用 60%乙醇定容于 10 mL 容量瓶中,
即得待测的天山花楸叶(果)样品溶液。
2.3 天山花楸中原花青素测定波长的选择
正丁醇-盐酸法将待测样品配制成一定浓度的
溶液,取 1 mL置于 20 mL具塞试管中,再加入 6 mL
体积比为 95∶5的正丁醇-盐酸溶液,摇匀,同时做
一份空白对照,沸水浴 40 min后取出,用冰水浴
冷却至室温,在 400~800 nm 范围扫描,获得紫外
吸收光谱。
图 1表明,两者在 550 nm有共同最大吸收,
因此选择 550 nm处为测定波长。
2.4 原花青素对照品溶液标准曲线的绘制
精密量取原花青素对照品溶液 0.8、1.4、2.0、
2.6、3.2 mL,分别置于 10 mL棕色容量瓶中,加
甲醇稀释至刻度,得系列浓度原花青素的对照品
溶液。精密吸取上述溶液各 1 mL 置于 20 mL 具
塞试管中,精密加入 6 mL 显色剂,同时做一份
空白对照,沸水浴40 min后取出,用冰水浴冷却至
室温,于波长 550 nm 处测定吸光度 A。以吸光度
A 对质量浓度 C 回归,得标准曲线方程为:C=
0.2431A+0.0114,R2=0.9997;线性范围为 0.04~
0.16 mg/mL。
2.5 天山花楸样品测定
精密量取待测天山花楸叶(果)样品溶液 1 mL,
置于 20 mL 具塞试管中,再加入 6 mL 体积比为
95∶5的正丁醇-盐酸溶液,摇匀,沸水浴 40 min后
取出,用冰水浴冷却至室温,以天山花楸叶(果)提
取液显色前溶液为空白,在 550 nm测定 A,结果
见表 1。
2.6 回收率实验
精密量取已知原花青素含量的天山花楸溶液
加入一定量原花青素对照品溶液,置于 20 mL 具
塞试管中,按“ 2.5”项下,测定 A,结果见表 2。
400 500 600 700 800
波长/nm
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0



A 1
3
5
4 542
图 1 原花青素对照品及天山花楸样品液的吸收光谱
表 1 天山花楸中原花青素的含量(n=3)
样品 吸光度 A
C/
(mg/100 mL)
原花青素/
生药/%
平均含
量/% RSD/%

0.4741 42.22 1.055
1.078 2.00.4867 43.24 1.081
0.4953 43.94 1.098

0.3681 33.63 0.841
0.857 2.10.3747 34.16 0.854
0.3857 35.05 0.876
1 原花青素对照品显色后
2天山花楸果样品显色前
3 天山花楸果样品显色后
4 天山花楸叶样品显色前
5 天山花楸叶样品显色后
食品安全与检测
·253·
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2009年 第 34卷 第 6期
2.7 精密度和重现性实验
分别精密量取原花青素对照品溶液 1 mL和同
一份待测天山花楸叶样品液 1 mL,分别置于 20
mL的具塞试管中,按“2.4”,“ 2.5”项下,重复
测定 5次,记录 A,精密度实验的 RSD为 1.40%;
重现性实验的 RSD为 0.93%。
3 讨论
原花青素在热酸作用下能产生红色物质,因
此可用分光光度法进行原花青素的含量测定,盐
酸、硫酸均可作为反应过程的催化剂,但在使用
硫酸时,浓度不易过高,过高的硫酸易使香草醛
发生自缩合反应和氧化分解且操作方式差别较大,
不利于使用者的选择,有待于统一[10]。故本文采用
盐酸-正丁醇显色法。
在显色剂盐酸-正丁醇与底物原花青素这一反应
平衡体系里,我们还考察了反应时间对其的影响,
反应(沸水浴)40 min时反应达到平衡,因此选择反应
沸水浴时间为 40 min;并且反应产物很稳定,在室
温放置 3 h内吸光度值基本不变(RSD=1.01%)。
本实验建立的测定原花青素的方法因天山花
楸中的氯原酸、芦丁及其苷元槲皮素对测定均无
干扰,因此本方法稳定、简便、快速、专属性较
强,适于天山花楸中原花青素的测定。
参考文献:
[1] 于明,李铣.花楸属植物化学成分药理作用及其研究进展
[J].辽宁中医学院学报,2004,6(5):364-366
[2] G L Ryzhova, S A Matasova, S G Bashurov. Received dry
extract from fruits of Siberian mountain ash and study its
chemical composition[J]. Chemistry of plant raw materials,
1997,(2):37-41
[3] 李迪民,陈坚.天山花楸醇提取物药理作用的研究[J].西北
药学杂志,1999,14(1):14-15
[4] 陈坚,王岩,开里曼,等.天山花楸原植物、化学成分及药理
作用初报[J].中国中医基础医学志,2001,7(1):45-46
[5] 国家医药管理局,中华本草编委会.中华本草(第 4册 10
卷)[M].上海:上海科学技术出版社,1999:292
[6] Angel Gil-Izquierdo, Annett Mellenthin. Identification and
quantitation of flavonols in rowanberry(Sorbus aucupariaL.)
juice[J].Eur Food Res Technol,2001,213:12-17
[7] Bagchi D, Bagchi M, Stohs S J, et al. Free radicals and
grape seed proanthocyanidins extract: important in human
health and diseaseprevention[J]. Toxicology,2000,148:187-
197
[8] Yamakoshi J, Saito M, Kataoka S, et al. Safety evaluation
of proanthocyanidin rich extract from grape seeds[J]. Food
and Chemical Toxicology,2002,40:599-607
[9] 傅武胜,赵道辉,黄剑锋.紫外分光光度法测定葡萄籽提
取物中的原花青素含量[J].食品研究与开发,2002,23(6):
90-92
[10] 肖付才,李华,王华.葡萄籽原花青素的提取和检测方法
[J].食品研究与开发,2007,28(6):165-169
表 2 天山花楸中原花青素的回收率(n=3)
样品中
原花青素/mg
对照品
加入量/mg
吸光
度 A
回收
率/%
平均回
收率/%
RSD
/%
0.7576
0.4536 100.3
0.2298 0.4518 98.36 98.63 1.6
0.4507 97.23
0.5472 99.66
0.4596 0.5463 99.19 98.71 1.3
0.5427 97.28
0.6443 100.7
0.6894 0.6436 100.4 100.4 0.3
0.6427 100.1
食品安全与检测
德国人重视历史文化的特性, 也在餐饮上表露无疑。
对于观光客而言 , 相当有名的丽塔旅馆就坐落在内卡
(NECKAR)河谷入口处的内卡格密特, 这里原是一栋十六世
纪的木造狩猎馆, 改成旅馆后仍保持其原有的风貌。 旅馆
内的骑士餐馆装潢极为粗糙, 厅堂里放有盔甲。 因为地理
位置靠近海德堡, 游客住在这里相当方便。 这里推出所谓
的骑士餐, 将中世纪的骑士饮食重现眼前, 颇具巧思, 趣
味盎然。 首先在中庭有骑着白马的骑士出来迎接客人, 请
客人品尝以锡杯盛装的葡萄酒。 在这个仪式之后, 燃着蜡
烛的餐厅大堂中, 由身穿中古服饰的服务人员端送食品,
食物以猪肉为主, 也有其他一些鸟兽野味。 全部以炭烧方
式烹调。 顾客也要遵循中古遗风, 只能用一把刀子切食。
卡塞尔(KASSEL)近郊的骑士餐, 是在以火把照明的
户外, 用三脚架和铁链支撑一张直径约一公尺的铁网, 以
柴薪起火, 在其上烧烤里脊肉猪排, 场面相当壮观。
还有一个骑士餐是在阿尔费尔德(ERFURT), 位于图林
根民族博物馆的隔壁。 它本身是十六世纪城墙建筑的一部
分。 炭烧的猪肉及鸡肉放在一个大盘子上, 客人头戴白布
巾, 吃的时候不用木制的盘子或汤匙, 也不用刀, 只用一
支像拌沙拉用的大叉子, 很不容易使用。
骑士餐的共同之处就是材料朴实, 内容以烤肉为主,
并配上红椒和胡萝卜等生菜及水煮马铃薯。
德国的历史风味菜——骑士餐
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
·254·