全 文 ：82 林业科技开发 2015 年第 29 卷第 6 期
扦插苗均出现不同程度的死亡。该三地的 pH 都超
过 7． 4，其中北京 7． 41，潍坊 7． 82，济南高达 8． 18。
由此可见，pH对北美冬青的成活率有一定的影响，北
美冬青喜弱酸性、酸性土壤，不耐碱，pH 大于 7． 4 对
生长有影响。
2)黑龙江铁力，地处小兴安岭南麓，年均气温只
有 1． 4 ℃，2014 年 1 月最低气温达 － 42． 6 ℃，在露天
无防护措施的情况下均能安全越冬，且长势良好。杭
州和福安，2013 年 7 月两地的最高温达 41． 2 和 43． 2
℃，在露天无遮挡的情况下生长良好，说明北美冬青
具有很强的耐寒性和一定的耐热性。
3)年均气温对生长量有一定的影响，年均气温
越高，生长量越大。空气湿度过大的地方，病菌易滋
生，产生斑点，影响其果实性状。
4)各种植点纬度相差大，生长情况不同。威海
地区土壤 pH 适中，种植的北美冬青长势较好，萌生
能力强，果实颜色亮，可作为引种示范基地，作进一步
的试验观察。
参考文献
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(责任编辑 田亚玲
櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒
)
doi:10． 13360 / j． issn． 1000－8101． 2015． 06． 021 中图分类号:S567． 5
黄枝润楠组培快繁技术
陈春，陈孝丑
(福建省林业科技试验中心，福建 南靖 363600)
摘 要:为了解决外植体易污染、易褐化、诱导分化难等问题，对黄枝润楠组培技术进行了探讨。试验结果表明:
用 75%酒精处理黄枝润楠的茎段 15 s后，再用 0． 1%的升汞消毒 10 min，能大大降低外植体污染率，外植体的存活
率达 60． 0%。黄枝润楠的最佳诱导培养基为 MS(改良)+ 6－BA 0． 5 m /L + NAA 0． 1 mg /L +蔗糖 30 g /L +抗坏血
酸 1． 0 g /L。
关键词:黄枝润楠;组织培养;诱导培养
收稿日期:2015－07－16 修回日期:2015－09－06
基金项目:福建省科技厅重点项目(闽科计［2013］30 号;闽财指
［2013］525 号) ;福建省林业科学研究项目(闽林科［2015］2 号)。
作者简介:陈春(1978 －) ，女，工程师，主要从事植物组织培养研究工
作。E-mail:35161478@ qq． com
The rapid propagation technique of Machilus versicolora in vitro∥CHEN Chun，CHEN Xiaochou
Abstract:In order to avoid the explant browning，easily contaminated and difficultly differentiating and so on，we studied on
the tissue culture technique of Machilus versicolora． The experiment results showed that after the stems being treated for 15 s
with 75% alcohol，and then by 0． 1% HgCl2 disinfected 10 min，which greatly reduced the rate of explants pollution and the
explant survival rate was up to 60． 0% ． The optimum inducing culture medium of M． versicolora was MS (modified)+ 6-BA
0． 5 m /L + NAA 0． 1 mg /L + sucrose 30 g /L + ascorbic acid 1． 0 g /L．
Key words:Machilus versicolora;tissue culture;induction culture
Authors’address:Fujian Forestry Science and Technology Test Center，Nanjing 363600，Fujian，China．
黄枝润楠(Machilus versicolora)是多年生常绿乔
木，属樟科润楠属植物，又称为黄楠、金丝楠，是楠木
中经济价值最高的树种之一，广泛应用于庭园观赏和
城市绿化［1］。由于我国历代砍伐利用，黄枝润楠这
一珍贵资源几近枯竭，目前该树种被列为国家二级保
护濒危树种［2－3］。近几年来，国内特别是闽南沿海地
区林农对黄枝润楠苗木的需求不断增高，市场供不应
求，开展黄枝润楠优良无性系的组织培养研究具有
森林资源培育 欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗
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重要的现实意义。目前黄枝润楠组培的研究还处
于初步探索阶段，国内外尚未见黄枝润楠组培方面
的报道。
1 材料与方法
1． 1 试验材料
供试材料为黄枝润楠的带腋芽茎段，枝条采自福建
省林业科技试验中心黄枝润楠优良无性系种质资源圃。
1． 2 试验方法
1．2．1 消毒剂及消毒时间对外植体存活影响的测定
选择腋芽饱满的黄枝润楠茎段为外植体，用沾洗
衣粉的毛笔刷轻轻刷洗后，在自来水下冲洗 30 min，
于 75%酒精溶液处理 15 s，分别用体积浓度 0． 1%
HgCl2 和 2% NaClO 处理，0． 1% HgCl2 的处理时间为
4，8，10 和 12 min，2% NaClO 处理时间为 5，7，12 和
15 min。消毒处理完后，用无菌水冲洗 5 遍滤干，以
腋芽为中心，切成 2 cm左右茎段，接种于初代培养基
上。每瓶接 1 芽，放置于培养室中培养 20 d，确定无
菌后转入启动培养基(MS + 6－BA 0． 5 + NAA 0． 1 +
糖 30 g /L)上，再培养 30 ～ 40 d。接种到预培养初代
培养基(MS +蔗糖 30 g /L)中，每瓶接 1 个芽段，每处
理接种 20 瓶，共 20 个芽段，3 次重复，接种 10 d后统
计各处理的污染率和外植体存活率。
1． 2． 2 培养基对腋芽生长影响的测定
试验采用 MS、1 /2 MS、B1、MS(改良)4 种基础培
养基，添加 6－BA 0． 5 mg /L、NAA 0． 1 mg /L、糖 30 g /L，
每瓶接 1 个无菌芽段，每处理接种 20 瓶，接种 30 d
后统计腋芽的生长情况。MS 改良培养基为:将 MS
大量元素中的 NH4NO3 降低 1 /2，KNO3 降低 1 /2，其
他元素不变。
1． 2． 3 抗褐化剂对黄枝润楠腋芽生长影响的测定
以MS(改良)+6－BA 0． 5 mg /L +NAA 0． 1 mg /L +
糖 30 g /L为基础培养基，分别添加不同抗褐化物质，
活性炭(0． 2 g /L)、抗坏血酸(1． 0 g /L)、聚乙烯吡咯
烷酮 PVP(1． 0 g /L)。每瓶接种无菌芽段 1 个，每处
理接种 10 瓶，共 10 个芽，3 次重复，接种 30 d后统计
腋芽的生长情况。
1． 2． 4 激素对腋芽生长影响的测定
以 MS(改良)+糖 30 g /L +抗坏血酸 1． 0 g /L为
基础培养基，添加不同浓度与配比的6－BA、KT、NAA，
每瓶接种无菌芽段 1个，每处理接种 10 瓶，共 10 个芽
段，3次重复，接种 30 d后统计腋芽的生长情况。
1． 2． 5 培养条件
培养温度 23 ～27 ℃，光照 10 h /d，光照度 2 000 lx。
2 结果与分析
2．1 不同消毒剂及消毒时间对外植体存活率的影响
黄枝润楠适宜的消毒方法是 75%酒精消毒15 s，
再用 0． 1%HgCl2 溶液消毒 10 min，外植体的污染率
22． 0%，存活率较高达 60． 0%;而用 2% NaClO 溶液
消毒，外植体的污染率均高于 55． 1%，因此选择
0． 1%HgCl2 作为黄枝润楠的消毒剂(表 1)。由表 1
可见，75%酒精-HgCl2 二步法对黄枝润楠茎段的消毒
处理效果不错;但如果 HgCl2 处理时间过长，会导致
腋芽萌发困难，甚至使外植体褐化死亡，而处理时间
太短，污染率明显增高。因此，笔者通过比较消毒剂
种类及处理时间长短的效果，最后选择了对外植体毒
害低，灭菌效果理想的消毒条件 0． 1% HgCl2 溶液消
毒 10 min。
表 1 不同消毒剂及消毒时间对污染率和存活率的影响
消毒剂(体积分数 /%) 消毒时间 /min 污染率 /% 存活率 /%
NaClO(2)
5 91． 0 a 9． 0 f
7 82． 7 b 17． 3 e
12 70． 8 c 29． 2 d
15 55． 1 d 44． 9 c
HgCl2(0． 1)
4 90． 0 a 10． 0 f
8 53． 8 d 46． 2 b
10 22． 0 e 60． 0 a
12 14． 0 f 29． 0 d
注:用 Excel进行原始数据处理，用 DPS 数据处理软件进行其他
相关分析。表中不同小写字母表示方差分析差异显著(P ＜ 0． 05)。
下同。
2． 2 不同培养基对腋芽生长的影响
通过预培养获得的无菌外植体，腋芽基本上无萌
发，因此需要进一步对诱导培养基进行优化［4］。由
表 2 可知，不同的基本培养基对黄枝润楠腋芽萌发的
影响不同。其中 MS改良培养基效果最好，腋芽萌发
的天数最短，仅需要 13 d，萌发率最高，达 50%。1 /2
MS和 MS 培养基的效果其次，1 /2 MS 培养基中，腋
芽的萌发时间也较短，但是萌发率比在 MS 培养基中
稍低。B1 培养基效果最差，萌发的天数最长，萌发率
最低。因此，选择 MS改良培养基为黄枝润楠腋芽诱
导的基本培养基。
表 2 不同培养基对黄枝润楠腋芽萌发生长的影响
培养基 接种外植体个数 萌发个数 萌发时间 /d 萌发率 /%
MS 20 11 18 25
1 /2 MS 20 10 15 20
B1 20 8 24 10
MS改良 20 16 13 50
注:腋芽萌发的时间为从外植体接入培养基开始到肉眼能观察到
芽点为止的这段时间;萌发率 =(萌发的外植体数 /接种的外植体数)
× 100%。
欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗 森林资源培育
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2． 3 不同抗褐化剂对萌发率的影响
黄枝润楠腋芽萌发率较低的一个主要原因在于
外植体的褐化较为严重，因此笔者在基本培养基中添
加一些抗褐化物质，试图抑制外植体的褐化程度以进
一步提高萌发率［5］。
表 3 不同抗褐化剂对黄枝润楠腋芽萌发的影响
处理 /(g·L －1) 褐化率 /% 萌发率 /%
活性炭 0． 2 47． 5 a 47． 5 b
抗坏血酸 1 37． 5 c 60． 0 a
聚乙烯吡咯烷酮 PVP 1 40． 0 b 0 c
由表 3 可以看出，3 种不同添加剂中，抗坏血酸
的效果最好。添加抗坏血酸不仅能明显抑制外植体
的褐化程度，也能促进外植体的萌发，萌芽率达
60%。添加活性炭虽然对褐化有一定的抑制作用，但
对萌芽率却没有促进作用，反而使之降低。添加 PVP
的培养基中，腋芽不萌发，这可能是 PVP 在抑制褐化
的同时也会对黄枝润楠的萌发产生抑制作用。因此，
黄枝润楠诱导培养基选择添加抗坏血酸 1． 0 g /L。
2． 4 不同激素和浓度对腋芽生长的影响
在不添加激素的诱导培养基中，腋芽的萌发率普
遍较低，外植体成活率较低，需要进一步优化诱导培
养基［6］，因此，以MS改良 +糖 30 g /L +抗坏血酸 1． 0
g /L为基本培养基，添加不同浓度的 6－BA、NAA、KT，
接种 30 d后统计腋芽萌发状况及芽苗生长情况。从
表 4 可以看出，当添加 6 －BA 且浓度低于 0． 5 mg /L
时，随着 6－BA浓度的增加，外植体的萌芽率增高，腋
芽均长出新叶，叶片呈红色(图 1) ;当 6－BA 浓度提
高到 0． 5 mg /L 时，萌发率达到77． 5%，芽高均≥1． 0
cm;当 6－BA浓度提高到1． 0 mg /L时，新芽的叶片卷
曲，且在茎段的基部呈现玻璃化，萌发率明显降低。
试验结果表明，NAA和 KT的添加对外植体的萌动没
有明显的促进作用，因此，应选用 MS 改良 + 6 －BA
0． 5 g /L +NAA 0． 1 g /L +糖 30 g /L +抗坏血酸 1． 0 g /L
作为黄枝润楠腋芽萌发的最适诱导培养基。
表 4 不同激素和浓度对黄枝润楠腋芽生长的影响
培养基编号 激素处理 /(g·L －1) 萌发率 /% 腋芽生长情况
1 6－BA 0． 3 + NAA 0． 1 40． 0 e 腋芽萌动，新叶展开，芽高≤1． 0 cm
2 6－BA 0． 3 + NAA 0． 2 67． 5 c 腋芽萌动，新叶展开，芽高≤1． 0 cm
3 6－BA 0． 5 + NAA 0． 1 80． 0 a 腋芽萌动，新叶展开，芽高≥1． 0 cm
4 6－BA 0． 5 + NAA 0． 2 77． 5 ab 腋芽萌动，新叶展开，芽高≥1． 0 cm
5 6－BA 1． 0 + NAA 0． 1 35． 0 f 腋芽萌动，但新叶未展开，茎段的基部呈现玻璃化
6 6－BA 1． 0 + NAA 0． 2 30． 0 g 腋芽萌动，但新叶未展开，茎段的基部有明显玻璃化
7 6－BA 0． 3 + KT 0． 2 + NAA 0． 1 75． 0 b 腋芽萌动，新叶展开，芽高≤1． 0 cm
8 6－BA 0． 5 + KT 0． 2 + NAA 0． 1 70． 0 c 腋芽萌动，新叶展开，芽高≤1． 0 cm
9 对照组 50． 0 d 腋芽萌动，新叶展开，芽高≤1． 0cm
图 1 黄枝润楠腋芽
3 结 语
目前，黄枝润楠的组织培养研究尚未有报道，处
于初期探索阶段。笔者采用腋芽饱满的黄枝润楠茎
段为外植体，从直接器官发生途径进行黄枝润楠组培
技术的初步探索，获得了黄枝润楠的腋芽萌发最适诱
导培养基，在黄枝润楠的腋芽萌发方面起得了一定的
进展，同时建立起无菌体系，为该树种进一步组培快
繁技术的研发奠定了基础。
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(责任编辑 吴祝华)
森林资源培育 欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗