全 文 ：·科技简报 ·
[基金项目] 国家科技部十五科技攻关项目(编号:02C26214200695)　[ 作者简介] 肖晏婴, 男 , 硕士研究生 , 电话:13476251441 , E-m ail:
n3b4a58@163.com 　[ 通讯作者] 陈平 ,女 ,教授 ,电话:027-83943842 , E-mai l:chenpingvip24@163.com
高效液相色谱法测定竹节参茎叶中人
参皂苷 Rg1和 Re的含量
肖晏婴 ,陈平 ,张长春 ,王如锋 ,贾放　(武汉工业学院
生物与制药工程学院 ,湖北 武汉 430023)
[ 摘要] 　目的:建立高效液相色谱测定竹节参茎叶中人参皂
苷 Rg1 和 Re 含量方法。 方法:色谱柱 Bon Chrom C18
(4.6 mm×250 mm , 5 μm);流动相22.5%乙腈-0.1%磷酸水
(1∶2);流速1.0 mL·min-1 ;柱温 25 ℃;检测波长 203 nm;进
样量 20 μL。结果:人参皂苷 Rg1 在0.012 5 ～ 0.100 0 g·L-1
呈良好线性关系(r=0.999 7 , n=5),平均回收率为 95.28%,
RSD为0.78%(n=5);人参皂苷 Re在 0.012 5 ～ 0.100 0 g·
L-1呈良好线性关系(r =0.999 9 , n = 5), 平均回收率为
96.37%, RSD 为1.73%(n=5)。结论:本法操作简便 , 准确 ,
灵敏 ,可用于竹节参茎叶人参皂苷 Rg1 和 Re 的含量测定。
[ 关键词] 　竹节参茎叶;人参皂苷 Rg1;人参皂苷 Re;高效液
相色谱法
[中图分类号] R95　　[ 文献标识码] B　　[ 文章编号] 1001-5213
(2010)22-1948-02
　　竹节参(Pana x japonicus CA.Mey)又名竹节三七 、竹
节人参 、白三七 , 系五加科(Ara liaceae)人参属植物竹节参的
干燥呈竹鞭状根茎 , 主要分布于长江以南的湖北等地区 ,是
我国西南地区土家族 、苗族集聚地民间常用的民族药。竹节
参性味甘苦 、温 , 具有活血化淤 ,消肿止痛 , 止咳化痰 , 滋补强
壮等多种功效[ 1] 。竹节参具有和同属植物人参 、三七相类似
的皂苷成分 ,因此竹节参极具开发利用价值。竹节参的茎叶
中也含有与地下根茎相类似的化学成分 , 是一种不可忽视的
宝贵药用资源[ 2] 。为进一步对竹节参进行综合利用 , 同时对
其进行质量控制 ,本试验采用高效液相色谱法测定竹节参地
上部分中人参皂苷 Rg1和 Re含量。
1　材料
DIONEX 高效液相色谱仪(备有单元泵 、自动进样器和
UVD170U 检测器 , 美国戴安公司);对照品人参皂苷 Rg1 ,
Re(批号 110703-200424 , 110754-200421 , 中国药品生物制品
鉴定所);竹节参茎叶样品采自湖北恩施地区竹节参种植基
地 ,经陈平教授鉴定为竹节参的茎叶;阴性样品为竹节参多
糖(缺人参皂苷)由本院制药工程实验室提供;D101 大孔吸
附树脂(天津市海光化工有限公司);乙腈为色谱纯;水为纯
化水;其他试剂为分析纯。
2　方法与结果[ 3-5]
2.1　色谱条件　Bon Chrom C18色谱柱(4.6 mm×250 mm ,
5 μm);流动相:22.5%乙腈-0.1%磷酸水(1∶2);流速:1.0
mL·min-1 ;柱温:25 ℃;检测波长:203 nm;进样量:20μL。
2.2　线性的关系考察　分别精密称取人参皂苷 Rg1 和 Re
各 1 mg ,置于 10 mL量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,混匀 , 即得。稀
释该对照品溶液得到 0.100 0 , 0.075 0 , 0.050 0 , 0.025 0 ,
0.012 5 mg·m L-1的对照品溶液备。量取上述 5 个对照品溶
液各 20 μL 依次进样 , 按照“ 2.1”项下的色谱条件测定峰面
积。以对照品溶液的浓度(X)为横坐标 , 以测得的峰面积
(Y)为纵坐标 , 进行线性回归。 结果表明:参皂苷 Rg1 在
0.012 5～ 0.100 0 g·L-1呈良好线性关系;回归方程为:Y =
118.3X + 0.291 4 , (r = 0.999 7 , n =5);人参皂苷 Re 在
0.012 5～ 0.100 0 g·L-1呈良好线性关系;回归方程为:Y =
78.442X+2.383 9(r=0.999 9 , n=5)。
2.3　供试品溶液的制备　取竹节参茎叶样品粉末 10 g ,精
密称取0.2 g ,置索氏提取器中 ,加氯仿 30 m L ,加热回流 1 h ,
弃去氯仿液 ,药渣挥去氯仿 , 加甲醇 30 mL ,加热回流 3 h ,提
取液挥干 ,加水 10 mL 使溶解 , 加石油醚提取 2 次 , 每次 10
mL , 弃去醚液 , 水液通过 D101 型大孔吸附树脂柱(内径
1.5 cm ,长 15 cm),以水 50 mL 洗脱 , 弃去水液。再用 20%
乙醇 50 mL 洗脱 ,弃去 20%乙醇洗脱液 , 继用 80%乙醇 80
mL洗脱 ,收集洗脱液 70 mL ,蒸干 , 残渣加甲醇溶解并定量
转移至 10 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻度 , 摇匀 ,滤过 , 取续滤液 ,
即得[ 1] 。
2.4　阴性干扰的考察　取阴性样品即竹节参多糖(缺人参
皂苷),按照“ 2.3”项下方法制备阴性供试品溶液。分别取对
照品溶液 、供试品溶液 、阴性供试品溶液各 20 μL ,记录色谱
图 ,见图 1。
图 1　高效液相色谱图
A.对照品;B.样品;C.阴性样品;1-人参皂苷 Rg1;2-人参皂苷 Re;
Fig 1　HPLC ch romatograms
A.reference substance;B.sample;C.negat ive sample;1-ginsenoside
Rg1;2-ginsenoside Re
　　从图 1 中可见 ,样品中人参皂苷 Rg1 和 Re的色谱峰与
其他组分的色谱峰达到基线分离 ,阴性供试品溶液在选定条
件下 ,其色谱图与对照品相同位置上无相应色谱峰 , 表明阴
性无干扰。
2.5　精密度试验　精密吸取稀释前对照品溶液 20 μL , 照上
述色谱条件重复进样 5 次 , 记录色谱峰面积。结果显示 , 人
参皂苷 Rg1峰面积平均值为12.310 , RSD为 1.75%, 人参皂
苷 Re峰面积平均值为10.305 , RSD为1.94%。
2.6　重复性试验　精密称取样品 6 份 , 照“ 2.3”项下方法制
成供试品溶液 ,照“ 2.1”项下色谱条件 , 平行测定 6 次 , 结果
人参皂苷 Rg1 和 Re含量的 RSD 分别为 2.07%, 1.89%, 表
明本方法重复性好。
·1948· 中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 22期 Chin H osp Pharm J , 2010 Nov , Vol 30 , No.22
2.7　稳定性试验　取同一供试品溶液 , 分别在 0 , 2 , 6 , 10 , 16
h 测得人参皂苷 Rg1 , 人参皂苷 Re峰面积 , 其峰面积 RSD 分
别为2.36%, 1.27%,表明供试品溶液 16 h 内基本稳定。
2.8　加样回收率试验　取已知含量的竹节参茎叶样品 1 g ,
精密称定 ,共 5 份 , 分别加入人参皂苷对照品混合溶液(人参
皂苷 Rg1、Re质量浓度分别为1.262 , 1.243 mg·mL-1)2 m L ,
照“ 2.3”项下方法制成供试品溶液 , 照“2.1”项下色谱条件测
定人参皂苷含量 ,计算回收率 , 结果见表 1。
表 1　人参皂苷 Rg1和 Re加样回收率测定结果
Tab 1　Results of recovery determination o f ginsenoside Rg1
and Re
人参
皂苷
含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/ %
平均回收
率/ %
RSD
/ %
Rg1 2.863 2.524 5.265 95.18 95.28 0.78
2.798 2.524 5.189 94.73
2.789 2.524 5.185 94.59
2.855 2.524 5.289 96.45
2.789 2.524 5.199 95.45
Re 2.569 2.486 4.969 96.56 96.37 1.73
2.534 2.486 4.995 98.99
2.497 2.486 4.857 94.92
2.594 2.486 4.953 94.88
2.587 2.486 4.986 96.50
2.9　样品含量测定　按样品制备方法和色谱条件对竹节参
茎叶样品进行测定 , 进样 3 次 , 记录峰面积 , 取平均值 , 结果
见表 2。
表 2　样品中 Rg1和 Re 含量测定结果(mg·m L-1)
Tab 2　Results of content of g inseno side Rg1 and Re in the
sample(mg·mL-1)
批号 Rg1 Re含量 平均 含量 平均
1 2.876 2.562
2 2.765 2.863 2.497 2.561
3 2.950 2.623
3　讨论
本试验采用氯仿和石油醚除去极性小的物质 , 再经大孔
树脂纯化除去色素等杂质 ,处理过后的样品杂质少 , 峰形好 ,
人参皂苷 Rg1、Re的色谱峰与其他组份的色谱峰得到基线
分离。
此检测方法准确度好 , 灵敏度高 , 适用性强 , 操作较简
单 ,可以作为竹节参茎叶及药用部分的质量控制方法。
参考文献:
[ 1] 　中国药典.一部[ S] .2005:7-8.
[ 2] 　钱丽娜 ,陈平 ,陈新 ,等.竹节参地上部分中总皂苷成分抗炎镇
痛活性[ J] .中国医院药学杂志 , 2008 , 28(20):1731-1733.
[ 3] 　陈桂云 , 陈卫平.FIPL-ELSD 测定红参中人参皂苷 Rg1 、Re、
Rb1含量[ J] .药物分析杂志 , 2007 , 27(5):754-756.
[ 4] 　成之福 , 李维娜 ,王毅华 , 等.人参叶的 FIPLC 指纹图谱研究
[ J] .中国现代中药 , 2006 , 9(6):22-24.
[ 5] 　胡杰 ,秦雪梅 ,郭小青 , 等.HPLC-ELSD 法测定人参茎叶中人
参皂苷 Rg1 、Re 、Rd 的含量[ J] .山西医科大学学报 , 2008 , 39
(12):1095-1098.
[ 收稿日期] 2009-06-17
[作者简介] 吕建伟 ,男 ,学士 ,副主任药师 ,电话:0772-2309351
不同 pH 下丹参粉针稳定性的紫外光
谱相似度考察
吕建伟 ,李茵 ,陈惠红　(柳州市中医院药剂科 , 广西 柳
州 545001)
[ 摘要] 　目的:考察丹参粉针在不同 pH 下 7 h 内的稳定性。
方法:在 20 ℃下 , 配制不同 pH 的0.9%氯化钠溶液 , 模拟临
床用药方法 ,将丹参粉针与不同 pH 的 0.9%氯化钠溶液配
伍 ,测定配伍后 7 h 内配伍液的 UV 吸收值 ,根据 UV 吸收值
计算 200～ 400 nm 范围内绝对和相对紫外光谱相似度及每
一点的紫外光谱相似度 ,并绘制 7 h 内的每一点的紫外光谱
相似度变化图谱。结果:除 pH 9.97的配伍液外 , 丹参粉针
与其余 5 种同 pH 溶液配伍 , 7 h 内配伍液的外观 、紫外吸收
图几乎没有变化 ,波峰与波谷均没有明显偏移 , pH 基本保持
不变 ,不溶性微粒数量均有不同程度增多。紫外光谱相似度
大小依次为 pH 为7.0 , 8.08 , 4.55 , 3.03 , 2.04 , 9.97的配伍
液。 pH 8.08以下时 , 丹参粉针中“非有效成分” 较“有效成
分”更易受到 pH 的影响。 在弱酸性环境中 , 电解质对丹参
粉针成分的影响可能更大。结论:丹参粉针最适宜的 pH
7.0 , pH 2.02以下或9.97以上均不宜配伍。以传统方法考察
中药注射剂配伍稳定性存在一定缺陷 , 而结合紫外光谱相似
度方法可弥补该方法的不足。
[ 关键词] 　紫外光谱相似度;丹参粉针;配伍;稳定性;pH
[中图分类号] R95　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213
(2010)22-1949-03
　　丹参注射剂在治疗冠心病 、心绞痛 、肾衰竭 、恶性肿瘤等
方面具有显著疗效 ,在临床中得到了广泛使用。 但随着临床
应用的推广 , 丹参注射剂表现出来的不良反应也越来越突
出。中药注射剂配伍后的稳定性是影响其安全性的主要因
素之一 ,但以往对中药注射液配伍稳定性研究主要采用高效
液相 、紫外分光光度法[ 1]测定其中的“有效成分含量” , 合并
微粒检测进行考察 ,结果虽然均发现微粒增多 , 但“有效成分
含量”却没有变化 , 含量测定结果无法解释微粒变化。中药
的紫外吸收光谱是各组分特征吸收光谱叠加而成 , 中药紫外
光谱特征差异在一定程度上反映了中药化学成分的差异 ,能
从中医的“整体观”反映微量成分的变化。本试验利用紫外
光谱相似度比较丹参注射剂在 pH 不同时间下的紫外相似
度大小 ,为临床选择配伍液提供参考。
1　材料
pHS-3C 精密酸度计(上海雷磁仪器厂);UV-1601 紫
外可见分光光度计(日本岛津公司);GWJ-4 微粒检测仪
(天津大学精密仪器厂);注射用丹参粉针(哈药集团中药二
厂 ,规格:400 mg , 批号 090333);0.9%氯化钠溶液(武汉滨湖
双鹤药业有限公司 ,批号 090504901)。
2　方法
2.1　配伍液的配制　采用氢氧化钠溶液 , 将0.9%氯化钠溶
液配制成不同 pH 的溶液(由于 5%葡萄糖注射液和0.9%氯
化钠溶液注射液对丹参粉针的稳定性影响最小[ 1] , 但 5%葡
萄糖注射液具有较明显的末端吸收 ,为尽量避免对紫外图谱
·1949·中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 22期 Chin H osp Pharm J , 2010 Nov , Vol 30 , No.22