全 文 ：2.10.2　更换不同色谱柱　取同一份样品 ,注入液
相色谱仪 ,分别选用 SymmetryC18 5 μm4.6 mm×
150 mm、SymmetryshildTM RP18 5 μm4.6 mm×150
mm、PhenomenexGemini5 μmC18 4.6 mm×150 mm
3种色谱柱 ,考察色谱柱的改变对龙胆苦苷 、栀子苷
含量的影响 ,结果色谱柱的改变 ,对龙胆苦苷 、栀子
苷的含量没有影响 ,龙胆苦苷的 RSD为 0.85%、栀
子苷的 RSD为 0.13%,见表 3。
表 3　 色谱柱的改变对龙胆苦苷 、栀子苷含量影响
色谱柱型号 龙胆苦苷含量 /mg/g
RSD
/%
栀子苷含
量 /mg/g
RSD
/%
SymmetryC18
5μm 4.6mm×150mm 8.696 9 13.917 2
SymmetryshildTMRP18 5μm
4.6mm×150mm 8.798 2 0.85 13.950 8 0.13
PhenomenexGemini
5μmC18 4.6mm×150mm 8.654 4 13.937 6
2.10.3　检测波长改变　取同一份样品 ,注入液相
色谱仪 ,分别在波长 249 nm、254 nm、259 nm3种波
长下进行测定 ,考察检测波长的改变对龙胆苦苷 、栀
子苷含量的影响 ,结果检测波长的微小改变 ,对龙胆
苦苷 、栀子苷的含量没有影响 。龙胆苦苷的 RSD为
0.39%、栀子苷的 RSD为 0.81%,见表 4。
表 4　检测波长的改变对龙胆苦苷 、栀子苷含量影响
检测波长 龙胆苦苷含量 /mg/gRSD/% 栀子苷含量 /mg/gRSD/%
249nm 8.682 2 13.783 6
254nm 8.696 9 0.39 13.917 2 0.81
259nm 8.632 6 13.696 6
2.11　样品测定　用所制定的含量测定方法 ,对 3
批龙荟胶囊进行了龙胆苦苷 、栀子苷的含量测定 ,结
果见表 5。
表 5　 样品中龙胆苦苷 、栀子苷测定结果
批号 样品中龙胆苦苷的含量 /mg/g
RSD
/%
样品中栀子苷含量
/mg/g
RSD
/%
8.651 7 13.973 7
041201 8.824 0 1.05 14.115 6 1.06
8.791 4 13.821 4
7.589 1 11.256 8
041202 7.640 6 1.26 11.485 6 1.34
7.775 2 11.546 1
7.667 4 11.384 9
041203 7.625 1 0.90 11.222 3 1.02
7.534 8 11.443 7
3　讨论
3.1　本研究采用同一测定条件 ,进行两种成分的同
时测定 ,缩短了检测时间 ,节约了检测成本。
3.2　龙胆苦苷属于裂环环烯醚萜苷类 、栀子苷属于
环烯醚萜苷类 ,二者色谱行为极为相同 ,本研究曾考
察了乙腈-水 、甲醇-水 、甲醇 -乙腈 -水 、甲醇-醋酸-水
等多种流动相系统 ,最终选择甲醇-水(17∶83)这一
比例使龙胆苦苷 、栀子苷能够很好的分离。
3.3　本研究的试验结果表明 ,样品处理方法简单 ,
测定方法稳定 ,精密度高 ,重现性好 ,为同时含有龙
胆和栀子药材的制剂提供一种检测方法 。
参考文献:
[ 1] 　肖崇厚主编.中药化学 [ M] .上海:上海科学技术出版社 ,
1997:436-439.
[ 2] 　中国药典 2005年版一部 [ S] .2005:64, 173.
HPLC梯度洗脱法同时测定紫丹活血片中三七皂苷 R1 、人参皂苷 Rg1 、
人参皂苷 Rb1 含量
程　静 , 　梅　群 , 　何继祥 , 　郭洪云
(云南省曲靖市食品药品检验所 ,云南 曲靖 655000)
收稿日期:2007-06-19
作者简介:程　静(1965～ ),女 ,主管药师 ,从事中药检验 、色谱分析工作 ,电话:0874-8994098。
关键词:紫丹活血片;三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1 、人参皂苷 Rb1;HPLC
摘要:目的:采用 HPLC梯度洗脱法同时测定紫丹活血片(三七总皂苷 、紫丹参等)中三七皂苷 R1 、人参皂苷 Rg1、人参皂
苷 Rb
1
含量。方法:用 HypersilODS2 C
18
色谱柱(4.6mm×250mm, 5μm);乙腈:水线性梯度洗脱:0 ～ 20min(20∶80), 20
～ 21 min(40 ～ 20∶60 ～ 80), 21 ～ 30min(20∶80)。柱温:室温;检测波长:203 nm。结果:三七皂苷 R1 、人参皂苷 Rg1 、人参
864
2008年 6月
第 30卷　第 6期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
June2008
Vol.30　No.6
皂苷 Rb1的线性范围分别为 0.52 ～ 2.6 μg(r=0.999 9)、 2.106 ～ 10.53 μg(r=0.999 6)、 2.946 ～ 14.73 μg(r=
0.999 6),平均回收率分别为 99.3%(RSD为 1.1%)、 100.0%(RSD为 0.5%)、99.7%(RSD为 0.9%)。结论:本方法专
属 、重复性好 ,可用于紫丹活血片中三七皂苷 R1 、人参皂苷 Rg1 、人参皂苷 Rb1的含量测定。
中图分类号:R927.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2008)06-0864-04
DeterminationofnotoginsenosideR1 andginsenosideRg1 , Rb1 inZidanHuoxue
TabletbyHPLCgradientelution
CHENGJing, 　MEIQun, 　HEJi-xiang, 　GUOHong-yun
(QujingInstituteforFoodandDrugControl, Qujing655000 , China)
KEYWORDS:ZidanHuoxueTablet;notoginsenosideR1 andginsenosideRg1 , Rb1;HPLC
ABSTRACT:AIM:TodeterminenotoginsenosideR1 andginsenosideRg1 , Rb1 inZidanHuoxueTabletbyHPLC
lineargradientelution(totalsaponinsofRadixetRhizomaNotoginseng).METHODS:UsingHPLCmethodwith
HypersilODS2C18 column.Amobilephaseconsistedofacetonitrile-water0-20min(20∶80), 20-21min(40-20∶
60-80), 21-30 min(20∶80)gradientelution.Thecolumntemperaturewasatroomtemperature.Thedetection
wavelengthwasat203 nm.RESULTS:ThelinearrangesofR1 , Rg1, Rb1 were0.52-2.6 μg(r=0.999 9),
2.106-10.53 μg(r=0.999 6)and2.946-14.73 μg(r=0.999 6), respectively.Theaveragerecoveryieswere
99.3% (RSD=1.1%), 100.0%(RSD=0.5%)and99.7%(RSD=0.9%), respectively.CONCLUSION:
ThemethodisselectiveandreproduciblefordeterminationofnotoginsenosideR1 andginsenosideRg1 , Rb1 inZidan
HuoxueTablet.
　　紫丹活血片为云南彝族民间验方经加工制成的
片剂 ,由三七总皂苷 、紫丹参等组成。具有活血化
瘀 ,理气止痛之功效 ,临床用于气滞血瘀所致胸痹
(冠心病心绞痛)、眩晕(脑动脉硬化症)。三七总皂
苷是紫丹活血片的主药之一 ,人参皂苷 Rb1、人参皂
苷 Rg1是三七总皂苷的主要化学成分 ,而三七皂苷
R1是其特征成分 。我们参照三七总皂苷质量标
准 [ 1] ,应用 HPLC对紫丹活血片中上述 3种成分进
行了含量测定。
1　仪器及试药
1.1　仪器
Agilent1100高效液相色谱仪(包括 G1311A四
元梯度泵 , G1313A自动进样器 , G1314A可变波长
紫外检测器 , G1379A真空脱气机 , G1316A柱温箱 ,
G2170AA色谱工作站);METTLEAE240电子天平
(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);BUG25-06超
声波发生器(上海必能信超声仪器有限公司)。色
谱柱:HypersilODS2C18色谱柱(4.6mm×250mm, 5
μm)。
1.2　试药
对照品:人参皂苷 Rb1 (C54 H92 O23 ), 批号:
110704-200318;人参皂苷 Rg1 (C42 H72 O14),批号:
110703-200424;三七皂苷 R1 (C47 H80 O18), 批号;
110745-200415(中国药品生物制品检定所提供)。
乙腈为色谱纯;甲醇为分析纯;水为重蒸馏水。样
品 、阴性样品均由云南天利制药有限责任公司提供。
2　色谱条件及系统适用性试验
2.1　色谱条件
HypersilODS2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5
μm);以流动相 A:乙腈;流动相 B:水 ,按表 1中的
规定进行梯度洗脱;流速每分钟为 1 mL;检测波长
为 203 nm。理论板数按人参皂苷 Rg1峰计算应不
低于 6 000;人参皂苷 Rg1峰和三七皂苷 R1峰的分
离度应大于 2.0。
表 1　 梯度程序表
时间 /min A/% B/%
0 20 80
20 40 60
21 20 80
30 20 80
2.2　系统适用性试验
参照标准 [ 1]的条件进行测定 ,结果理论板数按
人参皂苷 Rg1峰计算大于 6 000;人参皂苷 Rg1峰和
三七皂苷 R1峰的分离度为 5.1。
3　试验方法
865
2008年 6月
第 30卷　第 6期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
June2008
Vol.30　No.6
3.1　混合对照品溶液制备
分别精密称取人参皂苷 Rb1 14.73 mg、人参皂
苷 Rg1 10.53 mg、三七皂苷 R1 2.60 mg对照品 ,置
25 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即
得(每 1 mL含三七皂苷 R1 0.104 mg、人参皂苷 Rg1
0.421 2mg、人参皂苷 Rb1 0.589 2 mg)。
3.2　样品溶液制备
取本品 10片 ,除去包衣 ,精密称定 ,研细 ,取细
粉适量(约相当于三七总皂苷 50 mg),精密称定 ,置
具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 25 mL,密塞 ,称定重
量 ,超声处理(功率 250 W,频率 25 kHz)15 min,放
冷 ,称定重量 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,用微孔
滤膜(0.45 μm)滤过 ,弃去初滤液 ,取续滤液 ,即得。
3.3　线性关系考察
照上述色谱条件 ,吸取对照品溶液 5, 10, 15,
20 , 25 μL分别注入液相色谱仪 ,测定其峰面积 。以
进样质量 C(μg)为横坐标 , 3次测定峰面积的均值
A为纵坐标线性回归 ,得回归方程为三七皂苷 R1:A
=274.04C-2.70 r=0.999 9;人参皂苷 Rg1:A=
289.22C+21.14 r=0.999 6;人参皂苷 Rb1:A=
241.38C+5.48r=0.999 6。
结果表明三七皂苷 R1进样质量在 0.52 ～ 2.6
μg、人参皂苷 Rg1进样质量在 2.106 ～ 10.53 μg、人
参皂苷 Rb1 ,进样质量在 2.946 ～ 14.73μg范围内与
峰面积呈良好线性关系。
3.4　重复性试验
取同一批样品 (批号:060601), 共 5份 ,各约
0.25 g,精密称定 ,按 “3.9”项下的方法测定其含量。
结果三七皂苷 R1平均含量为 3.17 mg/片 , RSD为
0.7%;人参皂苷 Rg1平均含量为 18.01mg/片 , RSD
为 0.5%;人参皂苷 Rb1平均含量为 17.62 mg/片 ,
RSD为 2.1%。表明重复性良好 。
3.5　精密度试验
取同一对照溶液 ,按上述色谱条件 ,连续重复进
样 5次 ,测定 ,三七皂苷 R1RSD为 0.7%,人参皂苷
Rg1RSD为 0.1%,人参皂苷 Rb1RSD为 0.5%。结
果表明精密度良好 。
3.6　回收率试验
精密称取已知含量的样品约 0.17 g(批号
060601,含三七皂苷 R1 12.578 mg/g、人参皂苷 Rg1
71.184mg/g、人参皂苷 Rb1 66.861 mg/g)共 6份 ,
每 3份样品为 1组 ,共 2组 ,置具塞锥形瓶中 ,每组
分别加入含三七皂苷 R1(1.040 mg/mL)、人参皂苷
Rg1(4.212mg/mL)人参皂苷 Rb1(5.892mg/mL)对
照品甲醇溶液 1, 1.2 mL,照 “ 3.2”项下的方法制备
供试液 ,取供试液与对照品溶液各 10 μL,按上述色
谱条件测定 ,计算。结果:三七皂苷 R1平均回收率
为 99.3%, RSD为 1.1%;人参皂苷 Rg1平均回收率
为 100.0%, RSD为 0.5%;人参皂苷 Rb1平均回收
率为 99.7%, RSD为 0.9%。表明用本方法测定含
量具有较好的准确度。见表 2。
表 2　 回收率试验结果
样品量 /g 成分 样品中实际含量 /mg 对照品加入量 /mg 实际测定总量 /mg 回收率 /%
0.169 8 三七皂苷 R1 2.14 1.040 3.165 98.6
人参皂苷 Rg1 12.09 4.212 16.324 100.5
人参皂苷 Rb1 11.35 5.892 17.142 98.3
0.179 6 三七皂苷 R1 2.26 1.040 3.279 98.0
人参皂苷 Rg
1 12.78 4.212 16.987 99.9
人参皂苷 Rb1 12.01 5.892 17.912 100.2
0.172 1 三七皂苷 R1 2.16 1.040 3.182 98.3
人参皂苷 Rg1 12.25 4.212 16.441 99.5
人参皂苷 Rb1 11.51 5.892 17.415 100.2
0.162 4 三七皂苷 R1 2.04 1.248 3.297 100.7
人参皂苷 Rg1 11.56 5.054 16.574 99.2
人参皂苷 Rb1 10.86 7.070 17.905 99.6
0.164 5 三七皂苷 R1 2.07 1.248 3.318 100.0
人参皂苷 Rg1 11.71 5.054 16.774 100.2
人参皂苷 Rb1 11.00 7.070 18.122 100.7
0.162 5 三七皂苷 R1 2.04 1.248 3.295 100.0
人参皂苷 Rg1 11.57 5.054 16.644 100.4
人参皂苷 Rb1 10.86 7.070 17.853 98.9
三七皂苷 R1 人参皂苷Rg1 人参皂苷 Rb1
平均回收率 /% 99.3 100.0 99.7
RSD/% 1.1 0.5 0.9
866
2008年 6月
第 30卷　第 6期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
June2008
Vol.30　No.6
3.7　专属性考察
取阴性样品约 0.21 g(相当于 1片三七总皂苷
外其他成分及辅料)。精密称定 ,照 “ 3.2”项下的方
法制备阴性样品供试液 ,取 10 μL,按上述色谱条件
测定 ,结果表明 ,阴性样品在与对照品相同保留时间
的位置上 ,无相应的色谱峰出现 ,说明紫丹活血片中
的其他药物及辅料对测定无干扰。见图 1。
A
B
C
图 1　HPLC图
A混合对照品　B样品　C阴性样品　1三七皂苷 R1　2人参皂苷
Rg1　3人参皂苷 Rb1
3.8　样品溶液的稳定性
取同一样品 ,按 “3.2”项下的方法制备样品溶
液 ,分别放置 0, 2, 4, 6, 8, 16, 32 h后测定峰面积 ,考
察峰面积变化情况。三七皂苷 R1 RSD为 1.7%,人
参皂苷 Rg1RSD为 0.5%, 人参皂苷 Rb1RSD为
1.1%。结果显示 ,样品溶液在 32 h内测定较稳定 。
3.9　样品测定
取本品 10片 ,除去包衣 ,精密称定 ,研细 ,取细
粉适量(约相当于三七总皂苷 50mg),照 “3.2”项下
的方法制备供试品溶液。再分别精密称取人参皂苷
Rb1 、人参皂苷 Rg1、三七皂苷 R1对照品适量 ,加甲
醇溶解并制成每 1 mL约含三七皂苷 R1 0.1 mg、人
参皂苷Rg1 0.4 mg、人参皂苷Rb1 0.6mg的混合对照
品溶液。取供试品溶液与混合对照品溶液各 10
μL,按上述色谱条件 ,分别注入液相色谱仪 ,测定 ,
按外标法以峰面积计算 ,即得。结果见表 3。
3.10　供试品制备过程中超声处理条件的确定
表 3　 紫丹活血片中三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1 、
人参皂苷 Rb1含量测定结果(n=3)
批号 三七皂苷 R1 人参皂苷 Rg1 人参皂苷 Rb1
含量 /
mg/片
RSD
/%
含量 /
mg/片
RSD
/%
含量 /
mg/片
RSD
/%
060601 3.23 0.3 18.28 0.2 17.17 0.4
060701 3.16 0.5 17.25 0.5 16.92 0.8
060814 3.42 0.7 18.53 0.5 17.57 0.4
060801 3.56 0.4 19.19 0.4 18.40 0.3
060524 3.01 0.3 16.92 0.7 16.54 0.4
060625 3.51 0.8 19.04 0.6 18.10 0.7
060715 2.95 0.5 16.95 0.8 16.21 0.2
060805 3.22 0.4 18.35 0.5 17.25 0.9
051201 2.71 0.5 16.14 0.9 15.22 1.2
060422 2.52 0.6 15.12 1.1 14.22 0.4
　　取本品细粉适量(相当于三七总皂苷 50 mg)6
份 ,精密称定 ,分别置具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇
25 mL,称定重量 ,分别超声处理(功率 250 W,频率
25kHz)5 , 10, 15 , 20, 30, 40 min,放冷 ,再称定重量 ,
用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液与对
照品溶液各 10 μL,按上述色谱条件测定 ,计算。结
果超声处理(功率 250 W,频率 25kHz)15 min,能将
样品中总皂苷充分提取 ,见表 4。最终确定超声处
理条件为:超声功率 250 W,频率 25 kHz,时间 15
min。
表 4　 超声处理条件的确定
超声时间
/min 三七皂苷 R1
含量 /mg/片
人参皂苷 Rg1 人参皂苷 Rb1
5 1.97 10.88 10.30
10 2.96 16.32 15.46
15 3.29 18.13 17.17
20 3.28 18.28 17.24
30 3.17 18.10 17.94
40 3.16 18.05 17.77
4　讨论
4.1　三七总皂苷是紫丹活血片的主药之一 ,人参皂
苷 Rb1、人参皂苷 Rg1是三七总皂苷的主要化学成
分 ,而三七皂苷 R1是其特征成分 。我们参照三七总
皂苷质量标准 [ 1] 中所用的流动相及梯度洗脱程序
和检测波长进行试验 ,结果三七皂苷 R1、人参皂苷
Rg1、人参皂苷 Rb1能与杂质很好分离 ,且阴性样品
无干扰 ,分离效果满意。
4.2　样品提取条件的确定　本品细粉分别超声处
理(功率 250 W,频率 25 kHz)5, 10, 15 , 20, 30, 40
min,进行测定 ,计算 。结果表明超声处理(功率 250
W,频率 25 kHz)15 min,能将样品中总皂苷充分提
取。
867
2008年 6月
第 30卷　第 6期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
June2008
Vol.30　No.6
参考文献:
[ 1] 　国家食品药品监督管理局.国家药品标准(试行)WS3-B-3590-
2001(S).
荜铃胃痛颗粒的质量标准研究
赵沈娟 , 　黄新兰 , 　李雪兰 , 　石晶萍
(扬子江药业集团质量管理部 ,江苏 泰州 225321)
收稿日期:2007-06-26
作者简介:赵沈娟(1977～ ),女 ,工程师 ,从事药品质量标准研究工作 ,电话:0523-6975533, 13815966852, E-mail:zsj2005yzj@ 163.com。
关键词:荜铃胃痛颗粒;质量标准;TLC;RP-HPLC;盐酸小檗碱
摘要:目的:研究荜铃胃痛颗粒(延胡索 , 大黄 , 黄连等)的质量标准。方法:采用薄层色谱法对延胡索 、大黄 、黄连 、吴茱
萸 、荜澄茄进行定性鉴别;采用 RP-HPLC法对盐酸小檗碱进行定量分析。 色谱柱为 C18柱(ODS, 250 mm×4.6 mm, 5
μm),流动相为乙腈-0.02 mol/L的磷酸二氢钾(用磷酸调节 pH至 3.0)(25∶75), 检测波长为 347 nm, 流速 1.0 mL/min。
结果:薄层斑点清晰 ,阴性对照无干扰;盐酸小檗碱在 0.041 32 ～ 0.619 8 μg范围内有良好的线性关系(r=0.999 9),平
均回收率为 101.93%, RSD=0.60%(n=6)。结论:方法简便可行 ,结果准确可靠 , 可作为本产品的质量控制方法。
中图分类号:R927.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2008)06-0868-04
QualitystandardforBilingWeitongGranules
ZHAOShen-juan, 　HUANGXin-lan, 　LIXue-lan, 　SHIJing-ping
(YangtzaRiverPharmacyGroup, Taizhou225321 , China)
KEYWORDS:BilingWeitongGranules;qualitystandard;TLC;RP-HPLC;berberinehydrochloride
ABSTRACT:AIM:ToestablishthequalitystandardofBilingWeitongGranules(RhizomaCorydalis, Radixet
RhizomaRhei, RhizomaCoptidis, etc.).METHODS:RhizomaCorydalis, RadixetRhizomaRhei, RhizomaCop-
tidis, FructusEvodiae, FructusLitseaewereidentifiedbyTLC.Thecontentofberberinehydrochloridewasdeter-
minedbyRP-HPLCC18 column(ODS, 250 mm×4.6mm, 5 μm)wasusedaschromatographiccolumn.Theace-
tonitrile-0.02 mol/Lpotassiumdihydrogenphosphate(AdjustwithphosphoricacidtoapHof3.0)(25∶75)was
usedasmobilephase.Thedetectionwavelengthwasat347 nm.Theflowratewaskeptto1.0 mL/min.
RESULTS:TheTLCsportsdevelopedwerefairlyclear, andtheblanktestshowednointerference.Thelinearity
ofberberinehydrochloridewasgoodintherangeof0.041 32-0.619 8μg(r=0.999 9).Theaveragerecoveryof
berberinehydrochloridewas101.93%, RSD=0.60%(n=6).CONCLUSION:Themethodissimple, reliable,
accurateandcanbeappliedasthequantitycontrolmethodofBilingWeitongGranules.
　　荜铃胃痛颗粒为扬子江药业集团独家研制的中
药保护品种。是内科胃脘痛类非处方药。由荜澄
茄 、延胡索(醋制)、大黄(酒制)、黄连 、吴茱萸等药
材组成 ,具有行气活血 ,和胃止痛的功效。主治气滞
血瘀引起的胃脘痛 ,以及慢性浅表性胃炎见有上述
症状者 。原标准[ 1]中延胡索的 TLC定性鉴别和盐
酸小檗碱 TLCS定量方法重现性差 ,偏差大。为了
能有效的控制该制剂质量 ,本实验对延胡索的 TLC
方法进行了优化 ,改用 RP-HPLC法对盐酸小檗碱进
行含量测定 ,同时增加了黄连 、吴茱萸 、荜澄茄的薄
层定性研究 ,从而更好地控制该药物的质量 。
1　仪器与试药
瑞士梅特勒公司 AG285、XS204型电子天平;昆
山市超声仪器有限公司 KQ-500B超声波清洗器(功
868
2008年 6月
第 30卷　第 6期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
June2008
Vol.30　No.6