全 文 ：RP-HPLC法测定郁李仁中郁李仁苷 A和阿福豆苷含量
霍琳 ,陈晓辉 ,曹阳 ,戴荣华 ,毕开顺＊
(沈阳药科大学药学院 , 沈阳 110016)
摘要　目的:建立同时测定不同产地 、不同种属郁李仁中郁李仁苷 A和阿福豆苷含量的 RP-HPLC分析方法。方法:采用
KromasilC18(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱 ,流动相为甲醇 -0.1%醋酸水溶液(52∶48, v/v),流速 1.0 mL· min-1 ,检测波长
264nm, 柱温 35 ℃。结果:郁李仁苷 A和阿福豆苷浓度分别在 2.512 ～ 40.19 μg· mL-1(r=0.9997), 0.996 ～ 15.94 μg·
mL-1(r=0.9995)范围内与峰面积呈现良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为 98.8%和 100.2%。结论:此方法快速 、准
确 , 重复性好 ,可作为测定不同种属郁李仁药材中郁李仁苷 A和阿福豆苷含量的方法。
关键词:郁李仁;郁李仁苷 A;阿福豆苷;RP-HPLC
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2010)05-0831-03
RP-HPLCdeterminationofprunusideAandafzelininSemenPruni
HUOLin, CHENXiao-hui, CAOYang, DAIRong-hua, BIKai-shun＊
(ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China)
Abstract　Objective:ToestablishanRP-HPLCmethodforthedeterminationofprunusideAandafzelininSe-
menPruniofdiferentspeciesanddiferentareas.Methods:ThechromatographicmethodwascarriedoutonKro-
masilC18column(250 mm×4.6mm, 5 μm)usingmethanol-0.1%aceticacidsolution(52∶48, v/v)asthemobile
phase;Theflowratewas1.0mL· min-1;thedetectionwavelengthwassetat264nm, andthecolumntemperature
was35 ℃.Results:Thelinearrangewere2.512-40.19 μg·mL-1(r=0.9997)forprunusideAand0.996 -
15.94 μg· mL-1(r=0.9995)forafzelinrespectively.Theaveragerecoveries(n=9)were98.8% and100.2%.
Conclusion:Themethodissimple, accuratewithgoodreproducibility.Itcanbeappliedinquantitativeofdetermi-
nationofprunusideAandafzelininSemenPruni.
Keywords:SemenPruni;prunusideA;afzelin;RP-HPLC
郁李仁 (SemenPruni)为蔷薇科植物欧李
PrunushumilisBge.、郁李 PrunusjaponicaThunb.或
长柄扁桃 PrunuspedunculataMaxim.的干燥成熟种
子 ,为常用中药 ,收载于中国药典 2005年版一部中 ,
具有润燥滑肠 、下气 、利水的作用 ,用于津枯肠燥 、食
积气滞 、腹胀便秘 、水肿 、脚气 、小便不利[ 1] 。药理
研究证明郁李仁苷 A和阿福豆苷是郁李仁的活性
成分 ,其中郁李仁苷 A具有强烈的泻下作用 ,为郁
李仁特效成分 [ 2] 。目前关于阿福豆苷与郁李仁功
效的关系尚未有明确报道 ,现有文献资料显示郁李
仁中黄酮类成分为其主要活性成分 ,而阿福豆苷为
郁李仁中的黄酮类成分 ,生药发挥治疗效果的物质
基础是其含有的多个化学成分的协同作用 ,故只进
行单一成分的含量测定不能全面评价其质量和药效
作用 ,所以有必要对同类化学成分进行化学成分和
含量测定研究 。对于阿福豆苷的药理作用有待进行
进一步药理研究。关于郁李仁中郁李仁苷 A的含
量测定方法仅有薄层扫描法 [ 3] ,关于阿福豆苷的含
量测定未见报道 。本研究收集了河北 、吉林 、辽宁 、
内蒙古 、河南和宁夏等地不同种属的郁李仁样品 11
批 ,采用 RP-HPLC法同时测定郁李仁中郁李仁苷
A和阿福豆苷含量 ,为准确评价郁李仁药材质量提
供了依据 。
1　仪器与试药
Agilent1100型高效液相色谱仪及 G1315B
DAD检测器 。BP210S电子分析天平(德国 Sartorius
—831—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(5)
＊ 通讯作者　Tel:(024)23986016;E-mail:bikaishun@yahoo.com
DOI :10.16155/j.0254-1793.2010.05.030
公司);对照品郁李仁苷 A和阿福豆苷为自制 ,其结
构经 UV、MS、1HNMR、13NMR等确证 ,通过 DAD检
测器经峰面积归一化法检测出郁李仁苷 A和阿福
豆苷纯度均大于 98%。郁李仁药材收集于不同地
区 ,经沈阳药科大学中药学院孙启时教授鉴定为欧
李 PrunushumilisBge.、郁李 PrunusjaponicaThunb.
或长柄扁桃 PrunuspedunculataMaxim.的干燥成熟
种子。甲醇 、冰醋酸为色谱纯 ,水为自制重蒸水 。
2　方法与结果
2.1　混合对照品溶液制备 分别取对照品郁李仁
苷 A和阿福豆苷适量 ,精密称定 ,分别置 50 mL量
瓶中 ,用甲醇溶解并定容至刻度 ,分别制成浓度为
0.1256 mg· mL-1和 0.0996 mg· mL-1的对照品储
备液。分别精密移取郁李仁苷 A对照品储备液和
阿福豆苷对照品储备液适量 ,置同一 10mL量瓶中 ,
加甲醇制成含郁李仁苷 A20.10 μg· mL-1及阿福
豆苷 7.968 μg·mL-1的混合对照品溶液。
2.2　供试品溶液制备 将郁李仁药材粉碎过 20目
筛 ,称取样品粉末约 0.4 g,精密称定 ,置圆底烧瓶
中 ,精密加甲醇 4 mL,称定重量 ,加热回流 1 h,放
冷 ,再称重 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,经
0.22μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液作为供试品溶液 。
2.3　色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:Kroma-
silC18(250 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:甲醇 -
0.1%醋酸水溶液 (52∶48, v/v);流速:1.0 mL·
min-1;检测波长:264 nm;柱温:35 ℃;进样量:10
μL。在上述色谱条件下取供试品溶液进样分析 ,理
论塔板数按郁李仁苷 A计算不低于 7000,郁李仁苷 A
和阿福豆苷色谱峰分离度良好 ,与相邻色谱峰的分离
度均大于 1.5,拖尾因子均在 0.95 ～ 1.05之间。
2.4　线性关系考察 依次分别精密量取郁李仁苷
A对照品储备液 0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 2.4, 3.2 mL及阿
福豆苷对照品储备液 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6 mL,
一一对应分别置 10 mL量瓶中 ,用甲醇定容至刻度 ,
摇匀 ,即得系列混合对照品溶液 。在上述色谱条件下
进样分析 ,记录色谱图 。以对照品峰面积 Y为纵坐
标 ,以溶液浓度 X(μg·mL-1)为横坐标 ,绘制标准曲
线 ,得郁李仁苷 A和阿福豆苷的回归方程分别为:
Y=10.79X+0.7870 r=0.9997(n=6)
Y=16.94X+4.178 r=0.9995(n=6)
结果表明:郁李仁苷 A浓度在 2.512 ～ 40.19 μg·
mL-1范围内 ,阿福豆苷浓度在 0.996 ～ 15.94 μg·
mL-1范围内具有良好的线性关系。
2.5　精密度试验 吸取混合对照品溶液(郁李仁苷
A浓度为 20.10 μg· mL-1 ,阿福豆苷为 7.968 μg·
mL-1),在上述色谱条件下连续进样 6次 ,测得郁李
仁苷 A和阿福豆苷峰面积的 RSD(n=6)分别为
0.8%和 0.7%。
2.6　重复性试验 取同一批郁李仁样品 (黑龙
江),按 “2.2”项下方法操作 ,平行制备 6份溶液 ,在
上述色谱条件下进样测定 ,计算郁李仁苷 A和阿福
豆苷含量平均值(n=6)分别为 197.8 μg· g-1和
101.2 μg·g-1 , RSD分别为 2.0%和 2.8%,结果表
明重复性良好 。
2.7　稳定性试验 取同一供试品溶液(黑龙江)分
别于 0 , 2, 4, 8, 12, 24 h在上述色谱条件下测定 ,计
算郁李仁苷 A和阿福豆苷含量的 RSD(n=6)分别
为 2.6%和 2.8%,结果表明供试品溶液在 24 h内
稳定性良好。
2.8　加样回收率试验 称取已知含量的郁李仁样
品(黑龙江)9份 ,每份 0.2g,精密称定 ,按低 、中 、高
浓度分别精密加入混合对照品溶液(含郁李仁苷 A
40.19 μg·mL-1 ,阿福豆苷 15.94 μg· mL-1)0.5,
1.0, 1.5mL,每一浓度 3份 ,按 “ 2.2”项下方法制备
溶液 ,在上述色谱条件下进行分析 ,结果郁李仁苷 A
低 、中 、高浓度回收率 (n=3)分别为 99.4%,
99.0%, 97.9%;RSD分别为 2.2%, 1.3%, 2.7%;
平均回收率(n=9)为 98.8%。阿福豆苷低 、中 、高
浓度回收率 (n=3)分别为 97.9%, 102.0%,
100.6%;RSD分别为 1.2%, 2.1%, 2.1%;平均回
收率(n=9)为 100.2%。
2.9　样品测定 取所收集郁李仁药材粉末 0.4 g,
精密称定 ,按 “ 2.2”项下方法制备供试品溶液 ,在上
述色谱条件下测定 ,采用外标法计算郁李仁中郁李
仁苷 A和阿福豆苷含量。结果见表 1,代表性色谱
图见图 1。
3　讨论
3.1　本研究用 DAD检测器在 200 ～ 400 nm全波长
扫描 ,选取郁李仁苷 A和阿福豆苷的最大吸收波长
264 nm为检测波长 ,大大提高了检测灵敏度。研究
过程中尝试了不同比例甲醇 -水 、甲醇 -0.05%磷
酸水溶液 、甲醇 -0.03%磷酸水溶液和甲醇 -0.1%
醋酸水溶液作为流动相 ,结果表明用甲醇 -0.1%醋
酸水溶液系统色谱峰峰形较好 , 2种化学成分均有
较好分离 ,故选取甲醇 -0.1%醋酸水溶液作为流动
相。实验中曾试过用 HypersilC18柱(250 mm×4.6
mm, 5 μm,大连依利特公司)、DiamonsilC18柱(250
mm×4.6 mm, 5 μm,迪马公司)和 KromasilC18柱
—832— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(5)
表 1 郁李仁中郁李仁苷 A和阿福豆苷的含量
(μg· g-1 , n=2)
Tab1 ContentsofprunusideAandafzelin
inSemenPrunisample
种属
(species)
来源
(origins)
郁李仁苷 A
(prunusideA)
阿福豆苷
(afzelin)
欧李(Prunus 黑龙江哈尔滨 203.7 101.7
humilisBge.) (Harbin, Heilongjiang)
辽宁沈阳 251.7 89.0
(Shenyang, Liaoning)
内蒙古呼和浩特 220.7 84.6
(Hohhot,
NeiMonggol)Ⅰ
河南信阳 39.60 21.67
(Xinyang, Henan)
吉林 (Jilin)Ⅰ 111.6 64.89
吉林(Jilin)Ⅱ 384.3 93.2
宁夏(Ningxia) 130.4 63.22
郁李 河北石家庄 未检出 未检出
(Prunusjaponica (Shijiazhuang, (notdetected)(notdetected)
Thunb.) Hebei)Ⅰ
深圳(Shenzhen) 51.60 59.06
内蒙古呼和浩特 未检出 未检出
(Hohhot, Nei (notdetected)(notdetected)
Monggol)Ⅱ
长柄扁桃 河北石家庄 未检出 未检出
(Prunuspedunculata (Shijiazhuang, (notdetected)(notdetected)
Maxim.) Hebei)Ⅱ
图 1 对照品(A)和黑龙江样品(B)HPLC色谱图
Fig1 HPLCchromatogramsofreferencesubstances(A)andPrunushu-
milisBge.samplefromHeilongjiang(B)
1.阿福豆苷(afzelin) 2.郁李仁苷 A(prunusideA)
(250 mm×4.6mm, 5 μm,大连中汇达公司)3种不
同型号色谱柱在该色谱条件下进行试验 ,结果表明
3种色谱柱下郁李仁苷 A和阿福豆苷色谱峰均有较
好的分离 ,符合系统适用性试验的要求 ,最终选择
KromasilC18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm,大连中汇
达公司)。
3.2　本研究以郁李仁苷 A和阿福豆苷的含量为考
察指标 ,对提取溶剂 、提取方法 、溶剂倍量和提取时
间分别进行了考察:采用超声提取法考察了乙酸乙
酯 、乙醇和不同比例甲醇的提取效率 , 结果表明
80%甲醇提取效率最高;以 80%甲醇作为提取溶剂
比较了回流提取与超声提取 2种提取方法 ,发现回
流提取效率较高;在上述基础上 ,考察了回流提取时
间和提取溶剂倍量对实验结果的影响 ,结果表明 10
倍量提取溶剂 ,回流提取 1 h,即可将药材中待测成
分提取完全。
3.3　本研究对 11批不同产地 、不同种属郁李仁中
郁李仁苷 A和阿福豆苷含量进行了测定 ,结果表明
不同产地 、不同种属郁李仁中郁李仁苷 A和阿福豆
苷含量差异较大 ,所收集药材中有个别样品未能检
测到郁李仁苷 A和阿福豆苷 。分析产生含量差距
较大的原因可能是由于各种植地之间的土壤和气候
等自然因素的不同 、采收时间的不同以及采收后干
燥和储存方法的不同等所致 。本法快速 、简便 ,重复
性好 ,可作为测定不同种属郁李仁药材中郁李仁苷
A和阿福豆苷含量的方法。
参考文献
1 ChP(中国药典).2005.VolⅠ (一部):144
2 JIYu-bin(季宇彬).PharmacologyandApplicationofEfective
ComponentsinTraditionalChineseMedicine(中药有效成分药理
与应用).Harbin(哈尔滨):HeilongjiangScienceandTechnology
Press(黑龙江科学技术出版社), 1995.13
3 YANGGuo-qin(杨国勤), XUGuo-jun(徐国钧), JINRong-
luan(金蓉鸾), etal.StudyontheanalysisofYulirenbyTLCand
electrophoresis(10种郁李仁有效成分的分析鉴定研究).JChina
PharmUniv(中国药科大学学报), 1992, 23(2):77
(本文于 2009年 6月 22日收到)
—833—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(5)