全 文 ：RP-HPLC法测定郁李仁中苦杏仁苷含量
霍琳 ,陈晓辉 ,王鹏 ,毕开顺＊
(沈阳药科大学药学院 , 沈阳 110016)
摘要　目的:建立 RP-HPLC法测定不同产地 、不同种属郁李仁中苦杏仁苷含量。方法:采用 KromasilC
18
柱(5 μm, 250 mm×
4.6mm);以乙腈 -水(12∶88)为流动相 , 流速 1.0 mL· min-1;检测波长 210 nm;柱温 35 ℃。结果:苦杏仁苷的线性范围为
5.040 ～ 80.6 μg· mL-1(r=0.9999);平均回收率(n=9)为 99.8%。结论:本法简便 , 结果准确 ,重复性好 , 可作为测定不同种
属郁李仁药材中苦杏仁苷含量的方法。
关键词:郁李仁;苦杏仁苷;RP-HPLC
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2009)12-2055-03
RP-HPLCdeterminationofamygdalininSemenPruni
HUOLin, CHENXiao-hui, WANGPeng, BIKai-shun＊
(ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China)
Abstract　Objective:ToestablishanRP-HPLCmethodforthedeterminationofamygdalininSemenPruniofdif-
ferentspeciesanddiferentareas.Methods:ThechromatographicmethodwascariedoutonKromasilC18column(5
μm, 250 mm×4.6 mm)usingacetonitrile-water(12∶88)asthemobilephase;Theflowratewas1.0 mL·
min-1;thedetectionwavelengthwassetat210 nm, andthecolumntemperaturewas35 ℃.Results:Thelinear
rangeofamygdalinwas5.040-80.6μg·mL-1(r=0.9999), andtheaveragerecovery(n=9)was99.8%.Con-
clusion:Themethodissimple, accuratewithgoodreproducibility.Itcanbeappliedinquantitativeofdetermination
ofamygdalininSemenPruni.
Keywords:SemenPruni;amygdalin;RP-HPLC
　　郁李仁 (SemenPruni)为蔷薇科植物欧李
PrunushumilisBge.、郁李 PrunusjaponicaThunb.或
长柄扁桃 PrunuspedunculataMaxim.的干燥成熟种
子 。前 2种习称 “小李仁 ”,后 1种习称 “大李仁”。
作为常用中药 ,收载于中国药典 2005年版一部中 ,
具有润燥滑肠 、下气 、利水的作用 ,用于津枯肠燥 、食
积气滞 、腹胀便秘 、水肿 、脚气 、小便不利[ 1] 。主要
分布于东北 、内蒙古 、河北 、山东和宁夏等地区 。药
理研究证明苦杏仁苷为郁李仁的有效成分之一 ,也
是郁李仁的主要成分 [ 2] 。本研究收集了河北 、吉
林 、辽宁 、内蒙古 、河南和宁夏等地不同种的郁李仁
样品 11批 ,对其中的苦杏仁苷进行了 HPLC含量测
定和比较 ,为郁李仁药材的质量评价提供依据 。
1　仪器与试药
Agilent1100型高效液相色谱仪 , G1315BDAD
检测器(美国 Agilent公司)。BP210S电子分析天平
(德国 Sartorius公司 );苦杏仁苷对照品 (批号
110820-200403,纯度 >98%,中国药品生物制品检
定所);郁李仁药材收集于不同地区 ,经沈阳药科大
学中药学院孙启时教授鉴定 。乙腈 、甲醇为色谱纯 ,
水为自制重蒸水。
2　色谱条件
色谱柱:KromasilC18柱 (5 μm, 250 mm×4.6
mm);流动相:乙腈 -水(12∶88);流速 1.0 mL·
min-1;检测波长 210nm;柱温 35℃;进样量 10μL。
在上述色谱条件下取供试品溶液进样分析 ,理论塔
板数按苦杏仁苷计算不低于 4000。
3　溶液制备
3.1　供试品溶液　将郁李仁药材粉碎过 20目筛 ,
经 80 ℃干燥 2 h,精密称取样品粉末约 0.2 g,置
—2055—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(12)
＊ 通讯作者　Tel:(024)23986016;E-mail:bikaishunlyahoo.com
100mL具塞锥形瓶中 ,精密加甲醇 20 mL,称定重
量 ,加热回流 1h,放冷 ,再称重 ,用甲醇补足减失的
重量 ,摇匀 ,滤过 ,精密量取续滤液 1.0 mL置 10 mL
量瓶中 ,用甲醇定容至刻度 ,摇匀 , 0.22 μm微孔滤
膜过滤 ,取续滤液作为供试品溶液。
3.2　对照品溶液　精密称取苦杏仁苷对照品适量 ,
置 100 mL量瓶中 ,用甲醇溶解并定容至刻度 ,摇匀 ,
制成浓度为 0.2016 mg·mL-1的对照品储备液 。精
密量取上述储备液 1.0 mL,置 10 mL量瓶中 ,用甲
醇定容至刻度 ,摇匀 ,即得(每 1 mL中含苦杏仁苷
20.16 μg)。
4　方法学考察
4.1　线性范围的考察　精密量取苦杏仁苷对照品
储备液 0.25, 0.5, 1.0, 2.0 , 3.0, 4.0 mL,分别置 10
mL量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得系列对照
品溶液 。在上述色谱条件下分别注入液相色谱仪 ,
记录色谱图 。以对照品峰面积 Y为纵坐标 ,以溶液
浓度 X(mg· mL-1)为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得苦
杏仁苷回归方程为:
Y=8.18×103 +4.06　r=0.9999
结果表明:苦杏仁苷进样浓度在 5.040 ～ 80.6 μg·
mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系 。
4.2　精密度试验　精密吸取同一浓度对照品溶液
(20.16 μg· mL-1),在上述色谱条件下连续进样 6
次 ,测得苦杏仁苷峰面积的 RSD为 0.7%。
4.3　重复性试验　取同一批样品(内蒙古 Ⅱ),按
“ 3.1”项下方法操作 ,平行制备 6份溶液 ,按上述色
谱条件测定 ,计算苦杏仁苷含量的平均值 (n=6)为
1.88%, RSD为 1.7%。
4.4　稳定性试验　取内蒙古 Ⅱ样品的供试品溶液
分别放置 0, 2, 4, 8, 12, 24 h后 ,在上述色谱条件下
测定。计算苦杏仁苷色谱峰面积的 RSD为 1.9%。
结果表明供试品溶液在 24h内稳定性良好。
4.5　加样回收率试验　称取已知含量的郁李仁样
品(内蒙古Ⅱ)9份 ,每份 0.1g,精密称定 ,按低 、中 、
高浓度分别精密加入苦杏仁苷对照品储备液 4.7,
9.4, 14.1 mL,每一浓度 3份 ,按 “ 3.1”项下方法操
作 ,在上述色谱条件下进行分析 ,结果低 、中 、高浓度
的回收率 (n=3)分别为 97.2%(RSD=2.8%),
98.1%(RSD=1.4%), 102.0%(RSD=2.1%);平
均回收率(n=9)为 99.8%。
5　样品测定
取所收集的郁李仁药材粉末 ,按 “3.1”项下方
法操作 ,在上述色谱条件下测定 ,采用外标一点法计
算样品中苦杏仁苷的含量。结果见表 1,代表性色
谱图见图 1。
表 1　郁李仁样品中苦杏仁苷的含量(n=2)
Tab1　ContentofamygdalininSemenPrunisample
种属
(species
samples)
样品编号
(sample
LotNo.)
来源
(origins)
含量
(content)
/%
欧李(Prunus 1 黑龙江(Heilongjiang) 4.47
humilisBge.) 2 辽宁(Liaoning) 4.25
3 内蒙古Ⅰ(NeiMonggolⅠ) 4.10
4 河南(Henan) 3.28
5 吉林Ⅰ(JilinⅠ) 3.57
6 吉林Ⅱ(JilinⅡ) 4.82
7 宁夏(Ningxia) 3.50
郁李(Prunusjaponica 8 河北Ⅰ(HebeiⅠ) 2.94
Thunb.) 9 深圳(Shenzhen) 2.48
10 内蒙古Ⅱ(NeiMonggolⅡ) 1.88
长柄扁桃(Prunus 11 河北Ⅱ(HebeiⅡ) 3.27
pedunculataMaxim.)
6　讨论
6.1　关于郁李仁中苦杏仁苷的含量测定方法文献
报道多采用银量法 [ 1]和薄层扫描法 [ 3] , 而专属性
强 、灵敏度高的 HPLC法文献报道较少。本研究用
DAD检测器在 200 ～ 400 nm全波长扫描 ,选取其最
大吸收波长 210 nm为检测波长 。研究过程中尝试
了不同比例甲醇 -水 、乙腈 -水体系的分离 ,用甲醇
-水流动相系统色谱峰拖尾 ,而采用乙腈 -水系统
色谱峰峰形较好 ,故最终选取洗脱能力强 、分离度好
的乙腈 -水体系作为流动相 。
6.2　本研究以苦杏仁苷含量为考察指标 ,对提取溶
剂 、提取方法 、提取时间和提取次数分别进行了考
察 ,采用超声提取法考察了水 、乙醇和不同比例甲醇
的提取效率 ,结果表明甲醇提取效率最高;以甲醇作
为提取溶剂比较了冷浸提取 、回流提取与超声提取
3种提取方法 ,发现回流提取效率最高 。在此基础
上 ,考察了回流提取的时间和次数对实验结果的影
响 ,结果表明回流提取 1 h,提取 1次即可将药材中
待测成分提取完全 。
6.3　用本法和中国药典 2005年版一部郁李仁 [含
量测定 ]项下方法 ,对 11批郁李仁样品进行测定。
结果表明 , HPLC法测得的苦杏仁苷含量高于药典
法。其中 HPLC法测得辽宁郁李仁样品中苦杏仁苷
的平均含量为 4.25%,药典法测得的平均含量为
3.38%。药典法是通过银量法滴定苦杏仁苷的酶解
产物氢氰酸 ,间接测定苦杏仁苷的含量 ,操作烦琐 ,
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图 1　空白溶剂(A)、对照品(B)、内蒙古Ⅱ样品 (C)、吉林Ⅰ样品(D)河北Ⅱ样品(E)色谱图
Fig1　HPLCchromatogramsofblanksolvent(A), referencesubstance(B), sampleofNeimengguⅡ(PrunusjaponicaThunb.)(C), sampleofJilinⅠ
(PrunushumilisBge.)(D), sampleofHebeiⅡ(PrunuspedunculataMaxim.)(E)
1.苦杏仁苷(amygdalin)
耗时较长。银量法测得苦杏仁苷结果偏低的主要原
因是苦杏仁苷酶解不完全和氢氰酸随水蒸气馏出 ,
挥发损失。
6.4　本研究对 11批郁李仁中苦杏仁苷含量进行了
测定 ,结果表明不同产地 、不同种郁李仁中苦杏仁苷
含量差异不大。本法快速 、简便 ,结果准确 ,重复性
好 ,可作为测定不同种郁李仁药材中苦杏仁苷含量
的方法 。
参考文献
1　ChP(中国药典).2005.VolⅠ (一部):144
2　JIYu-bin(季宇彬).PharmacologyandApplicationofEfective
ComponentsinTraditionalChineseMedicine(中药有效成分药理与
应用).Harbin(哈尔滨):HeilongjiangScienceandTechnologyPress
(黑龙江科学技术出版社), 1995.13
3　YANGGuo-qin(杨国勤), XUGuo-jun(徐国钧), JINRong-lu-
an(金蓉鸾), etal.StudyontheanalysisofYulirenbyTLCandelec-
trophoresis(10种郁李仁有效成分的分析鉴定研究).JChina
PharmUniv(中国药科大学学报), 1992, 23(2):77
(本文于 2009年 4月 29日修改回)
—2057—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(12)