全 文 ：大花萱草 ———金娃娃的初代培养和无性系的建立
王汉海 , 程贯召 , 杜延飞 , 赵月玲
(潍坊学院　生物系 ,山东 潍坊　261043)
　　摘　要:外植体及取材部位对大花萱草愈伤组织的诱导和丛生芽的形成都有显著的影响 ,
实验证明花托是理想的外植体取材部位 ,适当的培养基可使花托的诱导率达 100%;培养基中
6-BA和 NAA不同的浓度比及不同的取材部位 ,使增殖系数及丛生芽的质量有明显差异 ,实
验中丛生芽的增殖系数最高可达 16。
关键词:大花萱草;组织培养;丛生芽;增殖系数
中图分类号:Q944.53　　文献标识码:A　　文章编号:1671-4288(2002)02-0009-02
　　大花萱草金娃娃是由美国引进 ,经高科技培
养的百合科多年生宿根多倍体草本花卉 ,植株矮 ,
花期长 ,叶似兰花 ,花如百合 ,有极高的观赏价值。
该品种在北方表现出极好的特性:抗寒 、抗旱 、抗
病虫害 ,对盐碱地有特别的耐性 ,是优秀的园林绿
化新材料[ 1] 。该品种结实率低 ,种子萌发率低 ,多
以分株繁殖 ,繁殖系数每年为 3 ～ 5[ 2] ,不仅占用
大量土地 ,也满足不了市场对绿化用苗木的需求。
我们自99年开始进行金娃娃的组培快繁研究 ,不
仅在短期内可获得大量苗木 ,并可利用建立的再
生体系结合现代生物技术选育新品种。
1　材料及方法
1.1　材料
在6 ～ 7 月份金娃娃的盛花期 ,于连续 3 ～ 4
个晴天的下午一点左右 ,采集花及茎尖作试验材
料(材料采自潍坊学院生物系组培实验室苗圃)。
1.2　方法
1.2.1　初代培养　将采集的花及茎尖用自来水
冲洗 , 75%酒精消毒 10s , 0.1%HgCl2 浸泡 15min ,
无菌水冲 4 ～ 5遍 ,将花分为花瓣 、花托 、子房 、花
柄 ,将茎尖剥去外部的叶片残余组织 ,每瓶 4个 ,
共10瓶 40 个接种于 C1—C7中。培养基成分见
表1 ,四周后统计结果。
1.2.2　材料发育时期的选择　分别采用花托不
同发育时期作材料 ,花蕾长分为 1 ～ 2cm;2 ～ 3cm;
3 ～ 4cm;4 ～ 5cm;>5cm(开放),每瓶 4个共 10瓶
分别接种于C7 ,13天后观察 ,四周后统计结果 。
1.2.3　材料的分化及增殖　将诱导的愈伤组织
切成 3×3×3mm 的小块接种于不同 6-BA 、NAA
浓度的培养基中 , 30天后统计结果 ,以探讨适宜
的浓度配比。
表 1　材料启动用培养基成分
序号 培养基类型 激素类型及含量(mg L)
C1 MS IAA0.5
C2 MS IBA0.5
C3 MS NAA0.5
C4 MS 6-BA0.5
C5 MS 6-BA0.5+IAA0.5
C6 MS 6-BA0.5+ IBA0.5
C6 MS 6-BA0.5+ NAA0.5
2　结果
2.1　不同外植体 、取材部位与培养基的影响
接种 3天后 ,材料均有不同程度的翻卷 、皱
缩 ,子房开始膨大 , 2 周后材料开始产生愈伤组
织。茎尖有愈伤组织 ,同时有丛生芽发生。4周
后统计结果。见表 2。
　　由表 2可以看出 ,花瓣 、花柄和子房不宜作启
动材料。子房虽有膨大变形但在 20天后即干枯
死亡 ,花瓣未见有愈伤组织的产生 ,约 8 天后死
亡 ,花柄在与花托相连处有少量愈伤组织产生 ,茎
尖和花托在C6 、C7中均有较好的启动率 ,分别高
达87.5%、97.5%和 97.5%、100%;在工厂化生产
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第 2 卷第 2期
Vol.2　No.2 　　　　　　　　　　　　　
潍坊学院学报
Journal of Weifang University
　　　　　　　　　　　　　2002年 4 月
Apr.2002
收稿日期:2002—01—18
作者简介:王汉海(1968—),男 , 潍坊寿光人 ,潍坊学院生物系讲师 ,研究方向:主要从事植物组织培养研究。
中考虑成本 ,NAA的价格低廉 ,以 C7为最佳培养
基。
表 2　外植体在培养基中的启动表现比较
培养基
类型
不 同 部 位 材 料 启 动率(%)
花瓣 花托 花柄 子房 茎尖 平均启动率
C1 / 55 / / 40 19
C2 / 55 / / 70 25
C3 / 62.5 5 / 57.5 25
C4 / / 5 / 62.5 13.5
C5 5 80 / / 100 37
C6 / 87.5 7.5 / 97.5 39
C7 7.5 97.5 12.5 / 100 43.5
合计 1.79 62.5 4.29 0 75.4 28.8
2.2　最佳个体发育时期的确定
花托为启动表现最好的材料 ,约 2周后可见
每块材料均有愈伤组织产生 , 30天后统计结果见
表3 。
表 3　不同时期花托启动表现比较
花蕾大小(cm) 接种数 启动数 启动率(%)
1～ 2 40 22 55
2～ 3 40 21 52.5
3～ 4 40 38 95
4～ 5 40 40 100
>5 40 28 70
　　花发育早期 ,花托很小 ,诱导成功率低 ,花成
熟后(>5cm)时 , 花托诱导率开始下降 ,在花蕾
3cm 至花未开放时为最适宜的外植体选择。
2.3　外源激素对芽分化的影响
愈伤组织接种后 2周 ,部分材料即明显转绿 ,
3周后即有不定芽发生 ,4周后统计不定芽及分化
率 ,结果见表 4。
表 4　外源植物激素对花托愈伤组织
不定芽分化率(%)的影响
NAA
6 -BA
0.05 0.1 0.2 0.5 1.0
0.05 70 75 87.5 87.5 85
0.1 75 77.5 95 100 95
0.2 67.5 87.5 100 100 100
0.5 70 80 100 100 100
　　花托诱导出的愈伤组织 ,芽分化率随 6-BA
含量的升高分化率增高 ,NAA含量也有类似的情
况 ,以NAA0.5分化率最高 ,NAA1.0 或>1.0时 ,
愈伤组织的增加反而降低了增殖率 。实验中 ,由
茎尖和花托诱导出的愈伤组织 ,在植物激素的作
用下 ,丛生芽的增殖表现出不同的特性 ,结果见图
1。
图 1　激素对花托 、茎尖愈伤组织诱导
丛生芽增殖系数的比较
花托愈伤组织在 NAA0.5时 ,随 6-BA的增
加 ,不定芽增殖系数也提高 ,最高可达 16 ,但随 6
-BA的增加 ,分化苗表现黄弱 ,且玻璃化苗相应
增加 ,故 6-BA应控制在 0.1 ～ 0.2 之间 ,以保证
试管苗质量。而茎尖一直维持比较低的增殖率 ,
随 6-BA浓度的改变未见有明显差异。
3　讨论
不同外植体部位在诱导分化形成愈伤组织的
过程中 ,有很大差异 ,花瓣 、子房 、花柄内部细胞分
化程度较高 ,脱分化成为愈伤组织较困难 ,花托实
际上是一种茎端结构 ,在个体发育及基本结构上
很像茎端[ 3] ,有大量幼嫩的组织存在 ,容易获得愈
伤组织 。茎尖因有分生组织的存在 ,很容易诱导
成功 ,但因茎尖较难获得以及诱导芽增殖率太低 ,
在资源缺乏时不宜作外植体。根据个体发育时期
的不同对诱导器官的形成有一定的影响 , 在烟
草[ 4] 、百合[ 5] 及禾本科植物[ 6] 的组培中均有报道 ,
对新育成的珍稀品种 ,更应注意选择适当时期的
材料 ,确保诱导成功 ,茎尖 、花托诱导愈伤组织不
定芽的增殖系数有显著差异 ,说明茎尖与花托内
源激素的含量有很大差异 ,并会持续影响几代材
料 ,该问题应结合内源激素的测定共同进行 。同
时 ,愈伤组织长期继代 ,会表现出遗传的不稳定
性 ,有利于筛选突变体 ,我们将会对相关因素进行
进一步的探讨 。 (下转第16页)
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潍坊学院学报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2002 年 4月
Permanence and global stability of
ecological prey-competition systems with
peridic coefficients and dispersion
MENG Xin-zhu , WANG Xue-lei
(Dept.of Basic Courses , sust ,Taian 271019 ,China)
Abstract:In the paper , we discuss a nonautonomous prey-competition dispersion systems and all parameters
are time-dependent.The systems are consisted of m+1 patches.The prey species compete each other and disper-
se among m-patches.The predator species also compete each other ,but they are confined to itself patch not to dis-
perse.We gain conditions for boundedness of positive solution and the existence and global attractivity of a positive
periodic solution of the system.
Key Words:Prey-Competition Dispersion Systems;Periodic Coefficient;Boundedness;Global Attractivity;
Periodic solution
责任编辑:谭　坤
(上接第 10页)
参考文献:
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景 , 1999(9):10-11.
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[ 3] 李心理.植物解剖学〔M〕.1984.282.
[ 4] Tran Thanb Van KM.Planta.1973.
[ 5] 许智宏 .植物生物技术〔M〕.上海科技出版社 ,
1998.196.
[ 6] Vasil I K , Vasil V , In:Vasil J K , Thorpe T A , ed.Plant
Cell and Tissue Culture.Kluwer A cacl Pabl.1994.293.
The primary culture and the establishment of clone of
Hemerocallis fulva var.flore-pleno
WANG Han-hai , CHENG Guan-zhao , DU Yan-fei , ZHAO Yue-ling
(Weifang University ,Weifang 261041 ,China)
Abstract:Explant and position of procurement of materials affected the induction of callus and the formation of
shoot clumps of Hemerocallis fulva significantly.It was proved that receptacle was the ideal position of procurement
of explant , and the induction rate of receptacle reached 100% in the appropriate medium.The proliferation coeffi-
cient and quality of shoot clumps varied significantly according to the different concentrations of 6-BA and NAA
and different positions of procurement of materials , in which the highest proliferation coefficient reached 16.
Key words:Hemerocallis fulva;Tissue Culture;shoot clumps;proliferation coefficient
责任编辑:谭　坤
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