全 文 ：　　收稿日期: 2001-11-26
　　基金项目:湖南省教育厅资助项目 ( 01B007) ,本文第Ⅰ
报见湖南农业大学学报 (自然科学版 ) , 2002, 28( 2): 122-124
　　作者简介: 吴铁明 ( 1962-) ,男 ,汉族 ,湖南汨罗人 ,湖南
农业大学副教授 .
　　文章编号: 1007-1032( 2002) 04-0305-03
野生重瓣大花萱草的选育
Ⅱ . 组织培养快速繁殖
吴铁明 ,于晓英 ,冯爽英 ,印　芳 ,向佐湘 ,彭尽晖
(湖南农业大学植物科学技术学院 ,湖南 长沙　 410128)
摘　要: 为了快速繁殖野生重瓣大花萱草 ,分别以心叶、带生长点的茎段及成熟叶等为外植体 ,在 M S培养基中分
别添加不同质量浓度的 2, 4-D和 6-BA进行愈伤组织培养 ,结果表明:在 MS+ 2, 4-D 2 mg / L+ 6-BA 1 mg / L的培
养基上 ,心叶的愈伤组织诱导率最高 ,为 32. 7% ;带生长点的茎段愈伤组织诱导率为 7. 3% ;成熟叶的愈伤组织诱
导率最低 ,几乎为 0;诱导愈伤组织培养基中 2, 4-D 2 mg /L+ 6-BA 1 mg / L的组合效果最好 .再生植株以球状体愈
伤组织的分化苗效果最好 .
关　键　词: 野生重瓣大花萱草 ;愈伤组织 ;球状体
中图分类号: S682. 4　　　　　　　　文献标识码: A
Selection and Breeding of Wild Hemerocallis f ulva var. f lorepleno
Ⅱ . Rapid Clonal Propagation of Wild Hemerocallis f ulva var.
f lorepleno in Vitro Culture
WUTie -ming , YU Xiao -ying , FENG Shuang-ying ,YIN　Fang ,XIANG Zuo -xiang ,PENGJin-hui
( Colleg e of Plant Science and Technology , HN AU , Chang sha　 410128, PRC)
Abstract: In order to provide a theoretical base for rapid clonal propagation of w ild multipetal
Hemerocallis fulval , by using the spi re, mature leaf and stem-segment with buds as the explants, in
vit ro culture wild multipetal Hemerocallis f ulval was studied. The result of the experiments indica ted
that the spi re was the appropriate explants. When the explants w ere cultured on M S medium
containing 2 mg /L 2, 4-D, 1 mg /L 6-BA, the induction rate of callus of spire was 32. 7% , the
induction rate of callus of stem-segment with buds w as 7. 3% , the induction ra te of callus of mature
leaf was 0, and spheroid w as the most ef fect w ay of reg eneration of plant.
Key words: Hemerocallis fulva var. f lorepleno; callus; spheroid
　　野生重瓣大花萱草高度重瓣 ,无法获得种子进
行有性繁殖 ,一般采用分株繁殖 .由于繁殖系数低 ,
难以满足生产的需要 ,如果用组织培养的方法可大
幅度提高萱草属植物的繁殖系数 ,短期内培育大批
量的优质种苗 [1 ] .目前 ,中国有关萱草属植物组织培
养研究多数为黄花菜和大花萱草 [1～ 6 ] .为加速野生
重瓣大花萱草的推广 ,快速繁殖出优质的种苗 ,笔者
于 1998年 10月到 1999年 6月以野生重瓣大花萱
草的叶和带生长点的茎段为外植体进行了组织培养
试验 ,现将结果报道如下 .
1　材料和方法
1. 1　材　料
供试材料为重瓣大花萱草心叶、成熟叶及带生
长点茎段 .
第 28卷第 4期 湖南农业大学学报 (自然科学版 ) 　 Vol. 28 No. 4
2002年 8月 Journal of Hunan Ag ricultural Univ ersity ( Natural Sciences) Aug. 2002
DOI : 10. 13331 /j . cnki . jhau. 2002. 04. 010
1. 2　方　法
取重瓣大花萱草的心叶、老叶及带生长点茎段
作为外植体 ,先用自来水冲洗干净 ,并用 0. 25%的
HgCl2消毒 10 min,然后用无菌水冲洗 5～ 6次 ,再
用无菌滤纸将水分吸干 ,在无菌条件下将外植体切
成长 0. 5～ 1. 0 cm备用 .在培养温度 ( 25± 2)℃ ,每
天光照 12 h,光照度 1 200～ 2 200 lx条件下进行下
述试验 .
( 1)愈伤组织的诱导 .将 3种外植体分别接种
到 MS+ 2, 4-D 2 mg /L+ 6-BA 1 mg /L的培养基
上 ,进行不同外植体愈伤组织诱导 .以心叶为外植
体 ,选 4种不同的外源激素组合添加到愈伤组织诱
导培养基中 ,比较不同组合对外植体愈伤组织诱导
结果 . 4种激素组合为: 2, 4-D 2 mg /L+ 6-BA 1 mg /
L; 2, 4-D 1 mg /L+ 6-BA 2 mg /L; 2, 4-D 2 mg /L+
6-BA 2 mg /L; 2, 4-D 1 mg /L+ 6-BA 1 mg /L.
( 2)分化培养和生根培养 .将来自外植体的愈
伤组织切割接种到分化培养基 MS+ 6-BA 1 mg /L
上进行培养 ,待分化苗长到 3～ 4片叶时 ,转入生根
培养基 1 /2M S+ N AA 0. 5 mg /L中进行生根培养 .
2　结果与分析
2. 1　愈伤组织的诱导效果
将心叶、成熟叶及带生长点茎段接种到愈伤组
织培养基上后发现 ,心叶在培养 2周后 ,与培养基接
触的切口表面增厚变大 , 20 d后明显出现淡黄色瘤
状突起 ,这些瘤状突起随时间的推移而不断增多 (图
1-1) ;成熟叶接种后 ,一般先伸长一小段 ,然后从上
至下慢慢枯化 (图 1-2) ;带生长点茎段接种后会发
生 3种情况: 一是产生淡黄色瘤状突起 ,二是直接长
成完整的幼苗 ,三是从茎基诱导出不定芽 (图 1-3) .
由不同外植体出愈率 (表 1)可见 ,心叶的出愈率最
高 ,带生长点茎段其次 ,成熟叶的最低 ,其原因可能
是心叶的生理机能活跃 ,愈伤组织相对较易形成 ,而
老叶因纤维化程度高 ,接种后很难形成愈伤组织 .带
生长点的茎段的接种则相当于微芽扦插 ,从生长点
直接长出叶片 ,甚至可从茎基长出不定根 ,形成一株
完整的幼苗 ,因而少见愈伤组织的形成 .另外 ,发现
接种的 27个带生长点茎段基部直接诱导出 9个不
定芽 ,并形成不定芽苗 ,其不定芽苗健壮 ,形态正常 ,
可作为野生重瓣大花萱草快速繁殖的一条新途径进
一步研究 .
表 1　不同外植体出愈率
Table 1　Effects of various explants on the generation of callus
外植体 接种瓶数 出愈瓶数 愈伤组织数比接种数 出愈率 /%
心叶 32 11 16 /49 32. 7
成熟叶 20 0 0 /54 0
带生长点茎段 12 1 2 /27 7. 4
不同的外源激素浓度不同 ,诱导愈伤组织的效
果也不同 .以心叶为外植体 ,在分别添加 2, 4-D 2
mg /L+ 6-BA 1 mg /L, 2, 4-D 1 mg /L+ 6-BA 2 mg /
L, 2, 4-D 2 mg /L+ 6-BA 2 mg /L, 2, 4-D 1 mg /L+
6-BA 1 mg /L的 MS培养基上进行培养的结果表
明 ,以添加 2, 4-D 2 mg /L+ 6-BA 1 mg /L对外植体
愈伤组织的诱导效果最好 ,出愈率最高 .
2. 2　分化培养结果
将来自外植体上的瘤状体愈伤组织切割下来 ,
接种到分化培养基 MS+ 6-BA 1 mg /L上 , 2周后便
出现芽的分化 ,并在瘤状体表面产生颗粒状或块状
的致密愈伤组织 ,乳白色 ,有的还具环状纹 ,称之为
球状体 (图 1-4) .将球状体分割 ,继续在分化培养基
MS+ 6-BA 1 mg /L上进行培养 ,便可分化出更健壮
的再生苗 (图 1-5) .在球状体接触培养基的部分又
可形成新的球状体 .
球状体苗的分化一般于中间凹陷处分化成 1株
或 1丛不定芽 ,也有的在球状体轮纹上多处发生不
定芽 .同黄花菜的组织培养一样 [5 ] ,通过诱导球状体
愈伤组织的途径 ,快速繁殖野生重瓣大花萱草较为
理想 .
值得注意的是 ,愈伤组织无论是球状体 ,还是原
始的瘤状体 ,切块都不能太小 ,否则会出现愈伤组织
松散或不分化成苗的现象 .切块在 0. 5 cm左右较为
适宜 ,在培养一个月之后 ,可增殖 2～ 2. 5倍 .
2. 3　生根培养结果
当分化苗长至 3～ 4片叶时 ,将其转入生根培养
基 ( 1 /2M S+ N AA 0. 5 mg /L )中进行生根培养 ,在
培养 10 d左右可形成根系 (图 1-6) .通过试验 ,在生
根培养基中添加 NAA效果较好 ,而且在一定范围
内 ,生根率随 NAA浓度的增加而提高 .
306 湖南农业大学学报 (自然科学版 ) 2002年 8月　
1.外植体诱导愈伤组织 ; 2.成年叶片初始培养 ; 3.直接从茎基部诱导不定芽成苗 ; 4.瘤状体愈伤组织分化苗 ; 5.球状体愈
伤组织分化苗 ; 6.试管苗生根状况
图 1　野生重瓣大花萱草组织培养
Fig . 1　Hemerocall is fulva var . fl orepleno in vitro culture
3　讨　论
萱草属植物组织培养以花梗、花葶和花瓣等花
器官为外植体的居多 [ 1～ 5] ,许多研究都表明 ,萱草属
植物组织培养中花器官的出愈率较叶片高 ,但其取
材却仅限于花季 ,有较大的局限性 ,以心叶为外植体
进行野生重瓣大花萱草的组织培养 ,其出愈率较高 ,
能快速繁殖 ,取材不受季节限制 ,这为快速繁殖良种
或育种材料提供了一条可行的新途径 ,可进一步推
广到其他植物 .
以带生长点的茎段为外植体培养野生重瓣大花
萱草 ,出愈率不高 ,但可从茎基诱导出不定芽 ,再直
接分化成苗 .这类不定芽苗健壮、生长快 ,可考虑通
过直接诱导不定芽进行萱草的快速繁殖 .在观赏植
物中直接用茎段诱导不定芽进行组织培养的例子很
多 ,如花叶万年青、绿巨人等等 .
在野生重瓣大花萱草的组织培养中 ,球状体愈
伤组织分化苗数量多、健壮、分化快 ,建立球状体快
速繁殖体系是一条较理想的途径 .
(续　完 )
参考文献:
[1 ]　吴铁明 ,于晓英 ,彭尽晖 ,等 .野生重瓣大花萱草的选育
研究Ⅰ .生物学特性及施肥效应 [ J ].湖南农业大学学
报 (自然科学版 ) , 2002, 28( 2): 122-124.
[2 ]　郭达初 ,刘克斌 ,柴明良 ,等 .大花萱草组织培养快速繁
殖 [ J].浙江农业学报 , 1993, ( 3): 137-141.
[3 ]　周朴华 ,何立珍 .黄花菜不同外植体形成的愈伤组织再
生苗观察 [ J].武汉植物学研究 , 1994, 11( 3): 253-256.
[4 ]　范银燕 ,崔根芳 .黄花菜无性系快速繁殖技术研究 [ J].
山西农业科学 , 1994, 22( 4): 22-24.
[ 5]　杨乃博 .杂种大花萱草的试管繁殖 [ J ].植物生理学通
讯 , 1985, ( 6): 39.
[6 ]　胡继金 ,王凤翱 ,周朴华 ,等 .黄花菜组织培养快速繁殖
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[7 ]　倪　新 ,马　毓 .多倍体萱草的组织培养及其繁殖 [ J].
园艺学报 , 1986, 11( 3): 202.
307　第 28卷第 4期 吴铁明等　野生重瓣大花萱草的选育研究 (Ⅱ )