全 文 ：典群桩帅氏讯二切奴护 户白` 足肠 乙姗翻翻 2 00 0, 2 9 ( 2 ) : 40一 4 2 文章编号 : 10() 1一 97 82 ( 20 00 ) 02一 00 4 -0 0 3
圆柏组织培养繁殖研究
辜夕容 , 石 大兴
(四川农业大学 林学园艺学院 , 四川 雅安 6 2 501 4)
摘 要 : 用 5 年生圆柏幼嫩茎段为外植体 ,研究植物生长调节剂对试管苗的调控作用及增殖效果 ,
结果表明 : 在 1 / 2 Ms + B ^ o . s m g / L + N ^ A o . s m g / L + I B A O. Zm g / L 的培养基上 , 试管苗分化率
为 95 . 0% , 生长发育良好 , 在 MS 十 BA 1 . ogm L/ + NA A 0 . 0 1gm L/ 的培养基上 , 增殖效果较好 。
关键词 : 圆柏 ; 组织培养; 繁殖
中图分类号 : 5 7引 . 4 文献标识码 : A
圆柏 ( sa b初 a hc 1’n 即 5 15) 又名桧 、 刺柏 、 红心柏 、 珍珠柏 。 其材质结构致密 , 耐腐 , 可
作建筑 、 文具 、 文艺品等用材 ; 树干和枝叶可提取柏木脑和柏香油 , 枝叶可入药 , 是一种重
要的造林树种 ; 其寿命长 , 终年常绿 , 树姿优美 , 为国内外常见观赏树种 。 目前 , 圆柏主要
靠实生种苗繁殖 , 易发生变异且繁殖系数低 , 繁殖周期长 。 利用组织培养技术可以保持亲本
的优 良特性 , 并在短期内大量繁殖 。 本研究旨在建立圆柏的无性快速繁殖技术 , 为有效地利
用或控制优良基因型提供依据 。
1 材料与方法
于 8 月上旬取 5 年生实生苗的当年萌发枝 , 剪去针叶 , 用自来水冲洗干净 , 再用洗衣粉
浸洗 2一 3 次 , 切成 1 . sc m 长的小段 , 然后用消洗灵浸洗 s im n , 冲冼干净 。 在接种室内超净
工作台上用 7%5 酒精浸泡 30 5 , 无菌水洗一次 , 再用 0 . %1 Hg 1C 2消毒 s im n , 无菌水冲冼 5 次
后 , 置于灭菌纱布上沥干备用 。 外植体接种于培养基上 ( 以 MS 为基本培养基 , 蔗糖 %3 , 琼
脂 0 . 70 , p SH . 8 , 植物生长调节剂见表 1 ) 。 24 ℃暗培养 d7 , 然后转入培养室室温下培养 ,
光照强度及时间同 日照强度及时间 。
2 结果与讨论
2
.
1 不同培养基对芽诱导的影响
不同培养基接种 2d0 后 , 无根无菌苗的诱导情况见表 1 。
由表 1 可以看出 , 培养基 1/ 2MS + BA 0 . s m g L/ + NAA 0 . s m g L/ + 工BA 0 . Zm g L/ 最有利
于圆柏的生长 , 在此培养基上 , 接种 2d0 左右 , 叶腋处即萌出约 Z lnm 长的绿色小芽 , 部分茎
段基部膨大 , 产生淡黄色微带绿色的愈伤组织 。 3d0 后转入 同样的培养基中继续培养 , 在愈
收稿日期: 199 9一 12一 2 1
作者简介: 辜夕容 ( 19 7 3一 ) , 女 , 硕 士 , 从事植物组织培养研究 。
.
4 0
·
伤组织上有绿色小芽点出现 。
表 1不同培养基对芽诱导率的影响
培养基 ( m g / L )接种数 (瓶 )分化数 (瓶 )分化率 (% )
n曰 UOǎ门乙 Q曰 9山口
AO曰 nDRù丁 1TIT
l / 2 MS
+
BA 0
.
1
+
NA 0
.
5 +
1 / 2 MS
+
BA 0
.
2 + NA 0
.
5 +
l / 2 MS + BA 0
.
5 + NA 0
.
5 +
l / 2 MS + BA 1
.
0 + NA 0
.
5 +
1 / 2 MS + BA Z
,
0 + NA 0
.
5 +
I B A 0
.
2 12
1 6
1 9
1O
IB A 0
.
2
6 0
.
0
8 0
.
0
9 5
.
0
50
.
0
40
.
0
对上述 5 . 种培养基诱导芽的萌发率进行 X Z检验 , 结果表明 , BA 浓度不同对幼芽诱导效
果有着极显著的影响 ( x Z = 3 0 . 7 6 9 , x Z。 。 , 二 12 . 2 7 7 ) 。 BA 浓度在 0 . 1一 0 . s m g / L 范围内 , 分
化率随浓度的增加而增高 , 在 0 . sm g L/ 时 , 分化率最大 , 达 95 . 0% ; 而浓度高于 0 . s m g / L ,
分化率下降 ; 在浓度为 2 . om g L/ 时 , 分化率最低 , 仅 40 . 0% , 这可能是因为 BA 浓度大了反
而抑制茎段的分化的缘故 。 因此 , B A最适浓度为 0 . sm g L/ 。
2
.
2 不同培养基对无菌苗增殖的影响
当试管苗节间明显伸长 , 有部分针叶能切割节段时进行继代增殖 , 结果如表 2 。
表 2 不同培养基对无菌苗增殖的影响
培养基 ( m g / )L 接种数 (瓶 ) 出芽数 (瓶 ) 总芽数 (个 ) 增殖率 %( ) 增殖系数
072.911067617922
30
18
连ùnU6Q自qCJ乙MS + B A 0 . 5 + NA 0
.
0 1
MS + B A 1
.
0 + NA 0
.
0 1
MS + BA 2
.
0
+
NA 0
.
0 1
在 N从 浓度都为 0 . o lm g L/ 时 , B A浓度不同对幼苗增殖率及增殖系数都有明显的影响 。
表 2 表 明 , B A浓度为 1 . Om g L/ 时 , 增殖率达 10 % , 增殖系数达 6 . 0 , 比浓度为 0 . smg L/ 时
增加了 2 . 8 , 比 2 . Om g / L 增加 3 . 4 , 说明 B A浓度小于 1 . om g L/ 时 , 浓度增加有利于幼苗的分
化和增殖 , 而大于 1 . 腼 g L/ 时 , 对幼芽的形成有抑制作用 。
圆柏增殖的最适培养基为 MS + BA 1 . o m g / L + NAA 0 . o lm g L/ 。
2
.
3 诱导生根和移栽
当试管苗节间明显伸长 , 有部分针叶能切割节段时进行壮苗培养 。 壮苗培养基为不添加
生长调节剂的 MS 培养基 。 经壮苗培养 , 无根健壮小苗在生根培养基 ( l/ ZMS + BI A 1 . Om g L/
十 蔗糖 2 0 9 / )L 上生根 。 2d0 左右 , 从基部直接产生灰白粗壮的根系 , 生根率 6%7 左右 。 3 d0
后 , 开瓶取 出生根小苗 , 洗去基部琼脂 , 移栽于蛙石 : 砂土为 1 : 2 的灭菌基质中 , 遮荫 ,
保湿 , 精心管理 , 成活率在 90 . 0q 以上 。
且不
3 讨 论
3
.
1 木本植物的组织培养相对于草本植物而言比较困难 。 柏科植物组织培养少见成功 ,
取材一般限于种子 , 少用茎段 , 选择成年优树枝条为外植体进行组织培养往往十分困难 。
同外植体或 同一外植体的不 同发育时期 , 所需培养基的培养条件均有差异 。
3
.
2 圆柏的组织培养中 , 如外植体取材为一年生枝下部时 , 几乎不萌动 , 而取其上部或新
萌发侧枝 , 萌动率较高 , 这可能与其内源激素含量有关 。
3
.
3 本实验在启动阶段有愈伤组织产生 , 且在愈伤组织上分化 出了小芽 , 这说明圆柏通过
愈伤组织培养可获成功 , 并可为生产次生代谢产物提供原料 。
3
.
4 适宜的 BA 浓度不论对圆柏的启动还是对圆柏的继代增殖 , 都起着重要的作用 。 BA 浓
度太小 , 分化率和增殖系数均较低 , 不利于圆柏的快速繁殖 , 而 BA 浓度大了 , 又抑制其启
动和增殖 , 同样不利于圆柏的快速无性繁殖 。
参考文献 :
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s t u d i e d
.
T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e p l a n t l e t s g r e w w e l l o n l / ZMS m e d i u m e o n t a i n i n g
BA
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a t 0
.
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.
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.
Zm g / L w i t h t h e s h o o t s d i f f e r e n t i a t i o n
a t t h e r a t e o f 9 5
.
%0
; a e o m b i n a t i o n o f MS w i t h BA a t 1
.
o m g / L a n d NA
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.
O l m g / L
g a v e t h e b e s t r e s u l t f o r m u l t i P l i e a t i o n o f s h o o t s
.
Ke v w o r d s : 撇 b i n a ch j n即 s j s : t i s s u e e u l t u r e : p r o P a g a t i o n
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