全 文 ：验结果可以看到巴戟天药材中含有丰富的微量元素
Fe、Mn、Zn、Cu，这些微量元素与巴戟天温补肾阳、滋
补壮阳、强筋壮骨、祛除风湿的功效有一定的关
系〔3〕。
Cd是一种毒性极强的累积性的环境污染物，能
够对人类健康造成不良影响。Cd 在体内积聚对肾、
肝、骨、生殖系统、免疫系统都有损害，而且还有致
癌、致畸、致突变作用〔9〕。从实验结果可见经过盐
制和甘草制以后，有害元素 Cd 含量也降低。重金
属超标是影响中药材质量的一个重要因素，一定的
炮制方法能否有效地降低中药材重金属含量呢，还
有待以后进行更深入的研究。
不同炮制方法不单止使药材微量元素含量产生
变化，而且会对微量元素的溶出产生影响〔7〕。虽然
本实验结果显示经炮制后巴戟天中人身体必须微量
元素 Fe、Mn、Zn、Cu含量均有不同程度的降低，是否
会对巴戟天的药效有影响呢，还有待进一步的研究。
巴戟天药材一般以水煎液入药，日后可以进一步研
究不同炮制方法对巴戟天药材微量元素溶出的影
响，从而更全面地评价不同的炮制方法对巴戟天药
材药效的影响。
参 考 文 献
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不同炮制方法对附子中乌头总碱
和双酯型生物碱含量的影响
赵 纳，侯大斌* ，刘向鸿
( 西南科技大学生命科学与工程学院，四川 绵阳 621000)
摘要 目的:探讨不同炮制方法对附子中有效成分含量的影响。方法: 分别采用炒法、蒸法、胆水浸泡及混合
溶液浸泡对附子进行炮制。采用 UV和 RP-HPLC方法分别测定附子四种加工品中总生物碱和新乌头碱、乌头碱、
次乌头碱等双酯型生物碱的含量。结果表明:附子不同炮制品中生物碱的含量呈现明显的差异，蒸制品和炒制品
含量可以达到中国药典规定酯型生物碱以乌头碱计，不得过 0. 15%的规定。结论:不同炮制方法对附子生物碱含
量有显著影响。
关键词 附子;炮制; HPLC;乌头碱;双酯型生物碱
中图分类号: R283. 1 文献标识码: A 文章编号: 1001-4454( 2011) 01-0039-04
收稿日期: 2010-07-12
基金项目:国家“十一五”科技支撑计划重大专项课题( 2007BAD89B15) ;四川省农作物育种攻关课题( 2006YZGG12-22)
作者简介:赵纳( 1985-) ，女，硕士研究生，主要从事药用植物资源的开发与利用研究; E-mail: zhaona_oliy@ 163. com。
* 通讯作者:侯大斌，Tel: 0816-6089523，E-mail: dbhou@ 126. com。
附子为毛茛科乌头 Aconitum carmichaeli Debx.
的子根的加工品〔1〕。具有回阳救逆、补火助阳、逐
风寒驱湿邪的功效。在中国的药用历史和栽培历史
悠久，是中国常用的中药和四川道地药材。现代化
学与药理研究已经表明生物碱类成分是附子的主要
有效成分和毒性成分，其中双酯型生物碱既是重要
的有效成分，也是剧毒成分。附子中双酯型生物碱
最具代表性的为: 乌头碱 ( aconitine ) 、新乌头碱
·93·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 1 期 2011 年 1 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2011.01.017
( mesaconitine) 与次乌头碱 ( hypaconitine)〔2〕等。乌
头类药材生品毒性比较大，临床用量较小，故一般需
经炮制后方能入药。附子的毒性与炮制方法息息相
关，炮制不及，则可中毒; 炮制太过，则不能保证药
效。附子的炮制不但要考虑减毒，更应重视存效。
本实验中采用炒法、蒸法、胆水处理及胆水、盐水混
合处理对附子进行炮制。初步探讨了四种炮制方法
对其炮制品中双酯型生物碱的含量影响，以期为附
子的炮制工艺和质量控制研究提供科学依据。
1 材料、试剂和仪器
1. 1 材料 材料购于四川江油附子 GAP 基地，经
西南科技大学侯大斌教授鉴定为乌头 Aconitum car-
michaeli Debx. 的子根。
1. 2 试剂 新乌头碱 ( 0799-9403 ) 、乌头碱
( 110720-200409) 、次乌头碱 ( 0798-9403 ) 对照品均
购自中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯( 美
国 Fedia公司) ，其他药品为分析纯，水为超纯水。
1. 3 仪器 Varian 1200LC /MS 液相色谱-质谱联
用仪( 带紫外检测器，美国 Varian 公司) ，旋转蒸发
仪( Buchi公司) ，电子分析天平( Sartorius 公司) ，优
普超纯水制造系统( 上海优普实业有限公司) ，超声
波清洗器( 昆山市超声仪器有限公司) ，T6S 紫外可
见分光光度计( 北京普析通用仪器有限公司) ，中草
药粉碎机( 天津泰斯特仪器有限公司) 。
2 方法与结果
2. 1 样品的制备
2. 1. 1 生附子:取新鲜附子，除去须根及泥沙，冲
洗干净。装入牛皮纸袋内，烘干至恒重，粉碎过 60
目筛，装于密封袋内，备用。
2. 1. 2 附子炒制品:取适量附子生品于炒锅中，加
热过程中火力大小一定，并不断搅拌使之受热均匀。
炒的时间梯度依次为 20、40、60、80、100、120 min。
迅速取出后烘干至恒重 . 粉碎，过 60 目筛。
2. 1. 3 附子蒸制品:取适量完整生附子，装入牛皮
纸袋放入高压蒸汽灭菌锅内。在 121 ℃ ( 蒸汽压力
0. 1 MPa) 蒸制，将蒸的时间进行梯度设置为 20、30、
40、50、60 min。取出后烘干至恒重，粉碎，过 60 目
筛。
2. 1. 4 附子胆水处理制品:取适量完整生附子，浸
入胆水溶液( 胆水浓度 50%，温度 30 ℃ ) 中浸泡 3、
6、9、12、15 d。取出后烘干至恒重，粉碎，过 60 目
筛。
2. 1. 5 附子胆水、盐水混合处理制品:取适量完整
生附子，浸入混合液 ( 胆水 ∶ 水 ∶ 食盐的混合比为
1. 3∶ 1∶ 1，温度 30 ℃ ) 中浸泡 3、6、9、12、15 d。取出
后烘干至恒重，粉碎，过 60 目筛。
2. 2 乌头类总生物碱含量测定 采用酸性染料比
色法〔3〕测定附子中乌头类总生物碱含量，以乌头碱
标品为对照做标准曲线，以乌头碱的浓度( μg /mL)
为横坐标，以光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求得
回归方程: Y = 0. 0445x + 0. 0017，r2 = 0. 9995，乌头
碱含量在 2 ～ 20 μg /mL 范围内，其光密度与乌头碱
浓度呈良好的线性关系。称取生附子和各炮制品粉
末 3 份，生附子 0. 2 g，其他 0. 5 g，进行含量测定，结
果见表 1。结果表明，炮制前生附子中乌头类总生
物的含量为 5645 ( mg /kg) ，炮制后附子中乌头类总
生物碱含量均有不同程度的减少。
表 1 附子各炮制品中乌头类总生物碱含量测定结果
样品 含量 / ( mg /kg)
生附子 5645 － － － －
炒制品 2645 2501 2465 2411 2330
蒸制品 2893 2884 2650 2614 2555
胆制品 2600 2560 2528 2474 2438
混合制品 2690 2582 2533 2519 2515
注: 从左至右炮制时间递增
2. 3 HPLC法测定双酯型生物碱的含量
2. 3. 1 色谱条件:美国 Zorbax extend C18 ( 150 mm
×4. 6 mm，5. 0 μm) 色谱柱;流动相为乙腈-0. 1%乙
二胺; 梯度洗脱，时间程序为 0→15→30→35→60
min，乙腈体积分数相应为 35% →50% →75% →
35% →35% ;流速为 1. 0 mL /min;进样量 20 μL;柱
温为 30 ℃ ;检测波长 240 nm。
2. 3. 2 对照品溶液的配制:精密称取新乌头碱、乌
头碱、次乌头碱适量，分别置于 10 mL 的容量瓶中，
用甲醇色谱纯溶解并定容，摇匀，作为对照品储备
液，其他不同浓度的对照品溶液由储备液稀释得到。
2. 3. 3 供试品溶液的配制: 称取附子不同的炮制
品各 2 g( 平行 3 次) ，加浓氨试液 8 mol /L 润湿，加
乙醚 80 mL，超声处理 50 min，过滤，并用乙醚洗涤，
收集、合并所有滤液，浓缩，挥干溶剂。加入甲醇溶
解残渣，定容到 10 mL的容量瓶;称取生附子粉 0. 5
g，加浓氨 2 mL润湿，加乙醚 20 mL，其余步骤同炮
制品的处理方法。
2. 3. 4 线性关系的考察: 分别取对照品溶液稀释
不同倍数，进行 HPLC测定。按照“2. 3. 1”色谱条件
测定峰面积，以平均峰面积 ( Y) 对应对照品进样量
μg( X) 进行线性回归，得回归方程新乌头碱 Y1 =
126922X1 －41228，R
2
1 = 0. 9997;乌头碱 Y2 = 114548X2
·04· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 1 期 2011 年 1 月
+ 11483，R22 = 0. 9999; 次乌头碱 Y3 = 174043X3 －
62020，R23 = 0. 9996，结果表明，新乌头碱、乌头碱、次
乌头碱在 40 ～ 3000 μg、3 ～ 450 μg、20 ～ 650 μg 范围
内具有良好的线性关系。
2. 3. 5 精密度试验: 精密吸取附子炒制品 ( 20
min) 的供试溶液 20 μL，重复进样 5 次，测定新乌头
碱、乌头碱、次乌头碱峰面积，计算 RSD 分别为
1. 15%、1. 63%、1. 01%。
2. 3. 6 稳定性试验: 取同一炒制品( 20 min) 供试
品溶液，分别于 0、2、4、6、8 h 进样 20 μL，记录峰面
积。其新乌头碱、乌头碱、次乌头碱峰面积平均值为
68522816、1351750、22989120，RSD 分别为 1. 52%、
2. 23%、1. 47%。表明供试品溶液在 8 h内稳定。
2. 3. 7 加样回收率试验: 精密称量附子胆制品
0. 1 g，共 3 份，每份分别准确加入各标准储备液，按
上述方法测定含量，计算回收率，结果见表 2。
表 2 新乌头碱、乌头碱、次乌头碱加样回收试验( n =3)
取样量
/ g
原含量
/mg
加样量
/mg
测定量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
新乌头碱 0. 104 0. 3402 0. 4 0. 7630 98. 77 99. 06 1. 46
0. 103 0. 3425 0. 3 0. 6420 99. 85
0. 103 0. 3384 0. 3 0. 6346 98. 55
乌头碱 0. 106 0. 0848 0. 08 0. 1641 99. 17 98. 85 2. 01
0. 102 0. 0835 0. 08 0. 1620 98. 20
0. 103 0. 0843 0. 04 0. 1236 99. 17
次乌头碱 0. 102 0. 448 0. 4 0. 8410 99. 82 99. 87 1. 87
0. 106 0. 4434 0. 4 0. 8421 99. 71
0. 108 0. 4521 0. 4 0. 8523 100. 04
2. 3. 8 样品含量测定: 吸取附子各炮制品供试液
20 μL，每个供试品溶液测定 3 次，按“2. 3. 1”项下
色谱条件下测定附子中三种双酯型生物碱的含量，
结果见表 3。
表 3 附子不同炮制品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量( n =3)
炮制方法 炮制时间 新乌头碱 /( mg /kg)
乌头碱 /
( mg /kg)
次乌头碱 /
( mg /kg)
酯型生物碱合计 /
( mg /kg)
蒸法 20 min 456. 235 559. 379 511. 550 1527. 164
30 min 680. 895 200. 769 601. 160 1482. 823
40 min 106. 756 21. 733 248. 753 377. 215
50 min 59. 365 8. 863 151. 226 219. 454
60 min 38. 385 － 18. 850 57. 207
炒法 20 min 3013. 861 85. 099 739. 091 3818. 051
40 min 318. 699 52. 492 270. 534 641. 725
60 min 208. 007 43. 708 208. 063 459. 779
80 min 187. 622 39. 571 189. 668 416. 862
100 min 48. 235 3. 736 21. 744 73. 715
胆水处理 3 d 3402. 012 84. 916 441. 752 3928. 679
6 d 3318. 218 408. 222 381. 392 4107. 833
9 d 2684. 498 344. 297 521. 508 3550. 303
12 d 2125. 101 266. 081 189. 318 2606. 500
15 d 1847. 056 211. 636 90. 223 2148. 915
盐水、胆水混合处理 3 d 2395. 370 337. 847 223. 270 2956. 488
6 d 1770. 176 319. 607 156. 570 2246. 352
9 d 1435. 853 230. 569 81. 550 1747. 972
12 d 945. 779 167. 312 140. 937 1254. 025
15 d 816. 698 150. 186 89. 570 1056. 454
3 讨论与小结
3. 1 生物碱是附子的主要毒性成分和活性成分，
关于生物碱研究较多的含量测定方法主要集中于双
酯型生物碱等成分的测定。双酯型生物碱( 包括乌
头碱、次乌头碱和中乌头碱等) 是导致使用附子中
毒的主要成分。这类成分性质不稳定，在湿热过程
中易于水解，在水解过程中毒性逐渐降低，药理作用
也逐渐减弱。现有的炮制方法也是利用湿热等方法
来促进双酯型生物碱水解达到降毒作用。
本研究采用蒸法、炒法、胆水处理及盐水、胆水
混合处理对附子进行炮制。炮制前生附子中乌头类
总生物的含量高达为 5645 ( mg /kg) ，炮制后生物碱
·14·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 1 期 2011 年 1 月
含量均有不同程度的降低。蒸法 20 min、炒法 100
min炮制品含量比生附子分别减少了 48. 76%、
58. 72%，蒸法 20 min 炮制品在四种炮制品中含量
损失最小，而炒法 100 min 炮制品在四种炮制品中
生物碱含量损失最大，可能由于在炒制过程中，随着
时间的延长，部分附子出现了糊化，对含量测定产生
影响。在相同的炮制时间内，蒸法炮制乌头类总生
物碱含量下降的速度均比炒法炮制要快。胆水处
理、混合处理炮品含量比生附子均减少 50%以上，
且随着炮制时间的增加，胆水处理比混合处理的生
物碱含量流失大，这也为江油附子炮制前期处理中，
采用胆水和盐水混合溶液浸泡提供一定的理论依
据。2005 年版中国药典〔1〕规定，制川乌中规定，本
品含生物碱以乌头碱计 ( C34 H47 NO11 ) ，不得少于
0. 20%。炮制品中生物碱含量均高于 0. 20%，符合
制川乌生物碱要求。本品含酯型生物碱以乌头碱
( C34H47NO11 ) 计，不得过 0. 15%
〔4〕。为了测定炮制
品中双酯型生物碱的含量，采用高效液相色谱法测
定新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量。
3. 2 高效液相色谱法具有快速简便、准确性好、灵
敏度高等优点，是物质含量分析的一种常用方法。
附子生品中双酯型生物碱为 3994. 842 mg /kg，其中
新乌头碱、乌头碱、次乌头碱含量分别为 2982. 075、
404. 609、608. 158 mg /kg，四种炮制品中双酯型乌头
碱含量均随着时间的增加呈总体下降的趋势。其蒸
法炮制双酯型乌头碱含量最低，下降最快。蒸制 60
min已不能检测出乌头碱的含量。蒸制品中总生物
碱含量较其他炮制品要高，而酯型生物碱的含量较
低。王昌利等通过测定不同炮制条件附子总生物碱
及酯型生物碱的含量也表明，蒸制 10 h 附子中总生
物碱含量较高，酯型生物碱含量较低〔4〕。炒制 100
min，双酯型乌头碱中新乌头碱、乌头碱和次乌头碱
含量分别降为附子生品的 1. 62%、0. 92%、3. 50%。
附子在炒制过程中双酯型生物碱呈减少的趋势，在
20 ～ 40 min新乌头碱的含量减少尤为明显。在不同
溶液浸泡中，双酯型生物碱含量总体均呈明显减少
趋势，达到初步解毒的目的。在药品生产管理和临
床运用中常以新乌头碱、乌头碱、次乌头碱之和代表
附子的双酯型生物碱含量〔5〕。胆制品和混合处理
制品中均不能达到中国药典之规定，说明仅靠溶液
浸泡处理附子，很难使其中有毒成分降低到安全范
围，还需要其他炮制处理工序。
参 考 文 献
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檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽
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·24· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 1 期 2011 年 1 月