全 文 ：老龄小鼠血清中的 SOD活性(P 均<0.01),明显降
低老龄小鼠血清中的 MDA 含量(P 均<0.01)。阳
性药银杏叶片也可明显提高老龄小鼠血清中 SOD
活性(P<0.05),降低 MDA 含量(P<0.05)。结果
提示复方黄酮胶囊具有抗氧化作用 。
表 1　复方黄酮胶囊对小鼠血清 SOD 活性及 MDA 含量的
影响( x±s , n=10)
Tab 1　Effect of compound F lavone capsules on SOD activi-
ty and MDA content in aging mice( x±s , n=10)
组别 剂量/ mg·kg -1 SOD活性/
u·L -1
MDA 含量/
nm ol·L -1
青年对照组 - 652.4±275.5a 3.7±0.9b
老龄对照组 - 411.9±138.1 4.9±1.0
银杏叶片 19.2 518.9±88.6a 3.8±0.8a
复方黄酮胶囊 12.0 562.9±75.6b 3.4±0.9b
复方黄酮胶囊 24.0 605.9±66.3b 3.0±0.7b
注:与老龄对照组比较 , aP <0.05 , bP<0.01
4　讨论
银杏叶的主要活性成分为黄酮苷和特有的萜烯
等。黄酮苷主要是山柰酚及槲皮素的葡萄鼠李糖
苷 ,萜烯主要是银杏内酯和白果内酯。银杏内酯即
苦味素 ,分别有银杏内酯 A , B , C , M , J 和银杏新内
酯共 6种 。此外 ,还含有酚类 、生物碱类 ,以及钙 、
镁 、钾 、磷 、锶 、铁等多种元素和 17种氨基酸等有效
成分 。具有改善微循环 、降血脂 、抗氧化 、增加学习
记忆等多方面的药理作用。临床应用于治疗冠心
病 、心绞痛 、脑梗死 、痴呆症 、糖尿病肾病等症[ 4] 。
复方黄酮胶囊主要是由银杏叶提取物和山楂叶
提取物等按一定的制剂工艺制成的复方中药新制
剂 ,主要用于治疗心脑血管疾病 。黄酮类化合物槲
皮素等为复方黄酮胶囊中的主要有效成分 ,具有保
护心肌缺血缺氧 、抗氧化 、清除自由基 、抗血小板聚
集等作用[ 5] 。
自由基反应可以引起脂质过氧化从而导致细胞
膜的损伤 ,并可直接作用于蛋白质 、糖类及 DNA 等
生物大分子 ,造成细胞膜和细胞核中遗传分子的损
伤 ,导致机体衰老 、心脑血管疾病 、糖尿病和痴呆症 ,
甚至诱发肿瘤等多种疾病的发生和发展。
本实验结果发现 ,与老龄对照组比较 , 青年对
照组小鼠血清中的 SOD活性明显增高(P<0.05),
同时青年对照组小鼠血清中的 MDA 含量显著降低
(P<0.01);这表明 ,SOD活性随年龄的增长而明显
降低 ,而 MDA 含量则随年龄的增长而明显增高。
提示本实验所采用的实验动物基本可反映老年机体
的氧自由基增高和衰老的情况 ,使组间具有一定的
可比性。
本实验还发现 ,复方黄酮胶囊高 、低剂量组均可
明显提高老龄小鼠血清中的 SOD 活性(P 均 <
0.01),明显降低老龄小鼠血清中的 MDA 含量(P
均<0.01),提示该药具有明显的清除氧自由基和抗
氧化的作用 ,这初步为该制剂临床应用于治疗心脑
血管疾病提供了实验依据。
参考文献:
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皮素的含量[ J] .中国医院药学杂志, 2006 , 26(4):386-387.
[收稿日期] 2008-03-20
[ 基金项目] 国家自然科学基金项目(编号:30470193)　[ 作者简介] 殷丹 ,女 ,博士研究生 , E-mail:y d410@126.com　[ 通讯作者] 陈科力 ,男,
教授 ,电话:027-62326589 , E-mail:kelich en@126.com
江南卷柏提取物体外抗单纯疱疹病毒 I型的实验
殷丹 ,陈科力　(湖北中医学院 中药资源和中药复方教育部重点实验室 ,湖北 武汉 430065)
[ 摘要] 　目的:对江南卷柏不同部位提取物在体外抗单纯疱疹病毒 I型(HSV-I)的作用进行研究 ,并对其抗病毒作用机制进
行初步探讨。方法:采用不同部位的提取物培养 HSV-I感染的 Hep-2 细胞 , 观察比较细胞病变效应(CPE), 72 h 后以空斑减
数法测定细胞活性。结果:在 Hep-2细胞体系中 , 江南卷柏各不同部位提取物均具有一定的抑制 H SV-I 对细胞的致病变作
用 ,使细胞存活率提高 , 其中含有脂溶性双黄酮和水溶性黄酮苷的部分是主要的活性部位。结论:江南卷柏可以作为新潜在
的抗 HSV-I 的资源植物。
[ 关键词] 　江南卷柏;单纯疱疹病毒 I型;不同部位
[中图分类号] R285　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2009)05-0349-04
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Study on the inhibitory action on HSV-I replication in vitro by the extracts from Selaginella
moelledorf ii
YIN Dan , CHEN Ke-li(Hubei Co llege of TCM Ministry o f Educa tion Key Labor atory of Resource and Compound Recipe
of Chine se Medicines , Hubei Wuhan 430065 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To investig ate the anti-Herpes simple x virus(H SV-I)activity of diffe rent ex tracts f rom Selaginella
moel ledor f ii , and their antiv ir al mechanism.METHODS　Hep-2 cells infected by H SV-I wer e cultured with diffe rent ex tracts
for 72 hours and their inhibito ry effects on HSV-I replication were evaluated by cell sur viv al ra te s acco rding to plaque reduction
assay.RESULTS　In the Hep-2 cell sy stem , all the ex tr acts could inhibit cytopa thic effect(CPE)of cells infected by HSV-I ,
and increase cellssurvival rates.The active sites w ere lipid so luble biflavone and hydro so luble flavonoid glyco side.CONCLU-
SION　S elaginella moelledor f ii can be taken into account as new po tential resource plants w ith anti-HSV-I action.
KEY WORDS:Selaginella moelledor f ii;Herpe s simplex virus I;different ex tracts
　　单纯疱疹病毒(herpes simplex virus , HSV)属疱
疹病毒科 ,为 DNA 病毒。它有两个主要的血清型 ,即
HSV-Ⅰ和 HSV-Ⅱ。其中 HSV-I主要引起生殖器以外
的皮肤 、黏膜(口腔黏膜)和器官(脑)的感染[ 1] 。目前
临床应用的主要是阿昔洛韦等核苷类药物 ,其毒性
大 ,加之容易产生耐药性 、抗病毒谱窄且价格昂贵;而
中草药来源广泛 ,其抗病毒作用已取得一定进展 ,所
以筛选研制出低毒高效的抗病毒药物尤为重要[ 2] 。
江南卷柏又名地柏枝 ,为卷柏科植物江南卷柏 Sela-
ginellamoelledor f i i的全草 ,具有凉血止血 ,清热利湿
的功效[ 3] 。江南卷柏具有抗肿瘤 ,抗病毒 ,抑菌等作
用 ,特别对柯萨奇病毒有很好的抑制作用[ 4] ,但对于
其抗 HSV-I的作用未见报道 。故本实验采用空斑减
数法对江南卷柏不同部位的提取物体外对 HSV-I的
作用进行了初步研究。
1　材料
1.1　药物　江南卷柏 Selaginel la moelledor f ii 的
全草采集于湖北宜昌雾渡河 ,原植物经湖北中医学
院陈科力教授鉴定。
将采集的江南卷柏植物材料晒干 ,去除杂质 ,粉
碎成粗粉 。称取粗粉50.0 g ,首先用石油醚脱脂 ,再
用 95%乙醇回流提取 3次 ,滤过 ,合并滤液 ,滤液用旋
转蒸发器回收溶剂后干燥 ,此干膏先以醋酸乙酯萃
取 ,再以正丁醇萃取。将醋酸乙酯萃取液回收溶剂后
干燥 ,编号为 1号(醋酸乙酯部位)。将 1号(醋酸乙
酯部位)溶于低质量分数乙醇溶液中 ,以大孔树脂纯
化 ,回收乙醇后干燥 ,编为 2号(脂溶性总双黄酮部
位),含量测定表明 ,2号含总黄酮以穗花杉双黄酮计
达 50%以上 ,其中穗花杉双黄酮的含量占总黄酮的
80%以上[ 5] 。3号为穗花杉双黄酮 ,为本实验室提取
纯化制得。在高效液相色谱上与穗花杉双黄酮对照
品(购自武汉生物药品检定所)对照 ,用归一法计算得
其纯度 97%。将正丁醇萃取部分回收溶剂后干燥 ,
编为 4号(正丁醇部位),该部位经分析含有多种水溶
性黄酮苷。阳性药物阿昔洛韦编号为 A号。
1.2　试剂　MEM(Gibico);新生牛血清(三利生物
制品厂);MTT(Amersco);阿昔洛韦(武汉长联来
福生化药业有限责任公司);羧甲基纤维素钠(中国
医药集团上海化学试剂公司);结晶紫(天津市福晨
化学试剂厂)。
1.3　细胞　人喉癌上皮细胞(Hep-2细胞 ,武汉大
学医学院病毒学研究所);细胞生长液为 MEM 加新
生牛血清至 10%;细胞维持液为 MEM 加新生牛血
清至 2%,其中含有 1%羧甲基纤维素钠。
1.4　病毒　HSV-I F 株 ,为标准株 ,武汉大学医学
院病毒学研究所提供 ,经 Hep-2细胞活化增殖 ,细
胞病变达 75%以上时收获 ,反复冻融 3次 , 3 000 r·
min-1离心 30 min ,上清液分装后-20 ℃保存备用。
在 Hep-2细胞上测定其 TCID50为 10-6 , 实验中使
用的感染剂量为 100TCID50 。
2　方法
2.1　药物对细胞的毒性测定　取已经生长成单层
Hep-2细胞的 96孔培养板 ,弃去培养液 ,分别加入
1 ～ 4号的不同浓度的药物培养液 , 37 ℃, 5% CO 2
培养 72 ～ 120 h ,每 12 h观察细胞形态 ,并与正常细
胞作对照 ,每一药物剂量均重复 4孔 , MTT 法检测
细胞活性 ,确定药物的无毒剂量。
2.2　药物体外抗病毒试验　根据病毒的复制周期 ,
设计药物抗病毒作用的 3种途径 ,分 3个处理组 ,同
时根据药物细胞毒性试验的结果 ,在无毒剂量之内
确定 5个终浓度 ,以这 5种浓度的药物培养液进行
实验 。每一个处理组都设立病毒对照组 、阳性药物
·350· 中国医院药学杂志 2009年第 29卷第 5期 Chin H osp Ph arm J , 2009 Mar , Vol 29 , No.05
对照组和正常细胞对照组 ,这 3种对照组与处理组
同时同法操作。
2.2.1　药物对细胞的保护作用　将不同浓度的药物
培养液 200μL加入生长完好的单层 Hep-2细胞 24孔
培养板中 ,37 ℃,5%CO2孵育1.5 h 后 ,弃去含药培养
液 ,再加入 200 μL 病毒液 , 37 ℃, 5%CO2孵育 1.5 h
后 ,弃去病毒液 ,再加入细胞维持液继续培养 ,观察。
2.2.2　药物对病毒直接灭活作用　将不同浓度的
药物培养液 200 μL 和病毒液 200 μL 混合 , 37 ℃,
5%CO 2孵育1.5 h后 ,再加入生长完好的单层 Hep-
2细胞 24 孔培养板中 , 37 ℃, 5%CO 2孵育 1.5 h
后 ,弃去含药与病毒培养液 ,再加入细胞维持液继续
培养 ,观察 。
2.2.3　药物对病毒增殖的抑制作用　将 200μL 病
毒液加入生长完好的单层 Hep-2 细胞培养板中 , 37
℃,5%CO2孵育 1.5 h后 ,弃去病毒液 ,再加入不同
浓度的药物维持液继续培养。
2.3　数据处理　以上 3个处理组在 37 ℃,5%CO 2
继续培养 72 ～ 120 h ,参照正常细胞对照组 ,病毒对
照组 ,每天观察细胞生长情况及相应 CPE 程度 。当
病毒对照组出现 75%以上典型 CPE 、有较多空斑
时 ,每孔以 10%甲醛溶液固定 30 min ,继用 1%结晶
紫溶液染色 5 min ,清水漂洗晾干后作空斑计数 ,计
算空斑减数率 ,即药物对病毒的抑制率。细胞存活
率%=药物组平均 OD 值/正常细胞对照组平均
OD值×100%。空斑减数率(%)=(病毒对照组空
斑数-药物组空斑数)/病毒对照组空斑数×100%。
半数细胞毒性浓度 TC50为使药物组 OD值比正常
细胞对照组降低 50%的药物浓度;半数病毒抑制浓
度 IC50为保护 50%的细胞免受病毒破坏的药物组
浓度 ,用 SPSS11.5 软件来计算 。采用治疗指数
(TI)作为评价指标来衡量药物对 HSV-I的抑制效
力。TI =TC50/ IC50 。 TI 值越大 , 表明药物抑制
HSV-I的作用越强[ 6] 。
3　结果
3.1　药物对细胞的毒性　不同药物样品作用于
Hep-2细胞 72 h后 ,用 MTT 法测定细胞活性 。结
果显示:正丁醇部位对细胞的毒性最小 , 穗花杉双
黄酮对细胞的毒性最大。对照药物阿昔洛韦在实验
浓度范围内没有测出细胞毒性 。不同药物的细胞毒
性高低排列为:4号<1号<2 号<3号 ,其 TC50值
分别为 240 , 85 ,60 ,53 ,A号为 500(估算)。
3.2　药物抗 HSV-I 病毒的作用
3.2.1　药物对细胞的保护作用　不同浓度的各种
药物与细胞事先作用1.5 h后 ,接种病毒 ,结果以上
药物都没有显现出对感染 HSV-I 细胞的保护作用 ,
各孔细胞均发生病变 ,融合成多核巨细胞形成空斑 ,
空斑数量与病毒对照组相同 。
3.2.2　药物对病毒直接灭活作用　药物和病毒直
接作用后再感染细胞 ,结果显示以上药物都具有较
强的直接杀死 HSV-I病毒的作用 ,其最大病毒抑制
率均在 70%至 85%之间 ,作用不低于阿昔洛韦 。其
中 ,穗花杉双黄酮杀死病毒的 IC50值依次小于总双
黄酮部位及醋酸乙酯部位。各提取物在有效浓度范
围内最高病毒抑制率见图 1;各提取物杀死病毒的
IC50结果 1 , 2 , 3 , 4 , A 号分别为 30.4 , 20.8 , 16.5 ,
20.710 mg·L -1 。其治疗指数 TI值比较见图 2 。
3.2.3　药物对病毒增殖的抑制作用　在本实验中 ,
各提取物都显示出具有很好的抑制 CVB3病毒在细
胞内生物合成的效力 ,其最大病毒抑制率均在 90%
至 95%之间 ,作用与阿昔洛韦相当 。其中 ,穗花杉
双黄酮杀死病毒的 IC50值同样依次小于总双黄酮部
位及醋酸乙酯部位 。各提取物在有效浓度范围内最
高病毒抑制率见图 3;各提取物杀死病毒的 IC50结
果 1 , 2 , 3 , 4 , A 号分别为20.3 , 11.8 , 8.5 , 43.3 , 10
mg·L-1 。其 TI 值比较见图 4。
4　讨论
本研究发现江南卷柏提取物能减轻 HSV-I 病
毒感染细胞 CPE 的程度 ,并且其细胞毒性较小。本
实验从 3 个方面初步探讨了江南卷柏提取物抗
HSV-I病毒的作用机制 。实验结果显示 ,江南卷柏
提取物可能具有抑制 HSV-I 病毒增殖的作用和直
接灭活病毒的作用 。除正丁醇部位外 , 其抑制
HSV-I在细胞内进行增殖的效力比直接灭活病毒
的效力要强。
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　　实验结果显示 ,穗花杉双黄酮对病毒直接灭活
作用的 IC50和抑制病毒增殖作用的 IC50均小于醋酸
乙酯提取部位与总黄酮提取物 ,说明其作用可能主
要来自于穗花杉双黄酮 。正丁醇提取部位主要含有
水溶性的黄酮苷类 ,因其较低的细胞毒性 ,而具有较
高的治疗指数 ,其也是抗病毒的活性部位之一。
参考文献:
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[收稿日期] 2008-10-16
[ 作者简介] 杨宗发 ,男 ,硕士 ,副教授 , E-mail:yzf3721@126.com
均匀设计法筛选丹皮酚-β-环糊精包合物片处方
杨宗发 ,江尚飞 ,张荣发 ,伍彬　(重庆医药高等专科学校 ,重庆 400030)
[ 摘要] 　目的:利用均匀设计筛选出丹皮酚-β-环糊精包合物片的最佳处方。方法:通过调节填充剂 、崩解剂 、黏合剂和润滑剂
含量等因素 ,制备丹皮酚-β-环糊精包合物片 , 考察累积溶出度因素 , 对处方进行筛选。结果:优选处方为:糊精 20 g , 羧甲基淀
粉钠 10 g , 10%淀粉浆0.5 g ,硬脂酸镁0.1 g。结论:该片剂处方合理 ,制备工艺简单易行 ,适合工业化生产。
[ 关键词] 　丹皮酚-β-包合物片;均匀试验;丹皮酚
[中图分类号] R944　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2009)05-0352-03
Study on the formulation optimization of paeonol-β-cyclodextrin tablets by uniform design
YANG Zong-fa , JIANG Shang-fei , ZHANG Rong-fa , WU Bin (Chongqing Medical and Pharmaceutical Co llege ,
Chongqing 400030 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To select the best fo rmula tion o f paeonol-β-cyclodex trin tablets by unifo rm design.METHODS　The
Paeonol-β-cyclodex trin tablets w ere studied by adjusting the content of loading agent , disinteg rating agent , bonding agent and
lubricant.dissolution accumulated r ate were te sted.RESULTS　The optimal propor tion and contents of dex trin , CMS-Na ,
10% sta rch paste and magnesium stearate w ere 20 , 10 , 0.5 , and 0.1 g.CONCLUSION　The fo rmula tion and prepara tion are
practical and reasonable.I t is suitable fo r manufacturing indust ries.
KEY WORDS:paeono l-β-cyclodex trin tablets;unifo rm test;paeonol
　　丹皮酚(paecmol , Pae)又称牡丹酚 ,是毛莨科植
物牡丹 Paeonia Su f f ruticasa Andr.根皮和萝摩科
植物徐长卿 Pycnastelma Paniculatum (Bunge)K.
S chum 干燥根或全草的主要有效成分 。Pae具有镇
静 、催眠 、解热 、镇痛 、抗炎 、抗菌等药理作用[ 1] ,但因
其微溶于水 ,易挥发 ,溶出度低 ,选用 β-环糊精(β-
CD)包合 ,经制成丹皮酚-β-环糊精包合物后能显著
增加丹皮酚的溶解度和生物利用度 ,提高其稳定性。
本试验通过均匀设计法对丹皮酚-β-环糊精包合物
片的处方进行筛选优化 ,得到较为理想的制剂处方。
1　材料
LC-10A TVP 高效液相色谱仪 、SPD-10AVP
·352· 中国医院药学杂志 2009年第 29卷第 5期 Chin H osp Ph arm J , 2009 Mar , Vol 29 , No.05