全 文 ：《农业网络信息》2006年第6期 农业实验与产业化
收稿日期:2006-04-07;修回日期:2006-04-24
作者简介:孟庆敏(1977-),女,硕士研究生,研究方向:园林植物的组织培养。
六倍利又名山梗菜,为桔梗科,半边莲属,多年生草
本植物,需要多做一年栽培。其株高12~20cm,近基部的
叶稍大,呈广匙形,茎上部叶较小,呈披针形。花期春季,
是良好的园林绿化材料,多用于片植或丛植于林缘草地
中,也可作模纹花坛的配置材料;六倍利含有多种药物
成分,具有多种疗效,是一种使用广泛的药草。一般用种
子繁殖,但使用组培技术可以增加其繁殖系数,扩大其
应用范围,并能保证优良品种的性状不发生改变。
1 实验材料与方法
1.1 试验材料
供试材料取自黑龙江省森林植物园花坛的陆地实生苗。
1.2 研究方法
1.2.1 取材与消毒
取实生苗剪成 3~5cm的小段,加洗涤剂,浸泡
10min左右,其间不停搅拌,然后在自来水下冲洗
30min,在超级工作台上用酒精杀菌20s,无菌水冲洗2~
3遍,用 0.1%的升汞消毒 3min,无菌水冲洗 4~5次,剪
切,顶芽带两片叶,茎节带一片叶,茎段切割为长0.5cm
左右,叶片边缘剪切,接种到培养基上。
1.2.2 试验用培养基及培养条件
初始培养基:MS、MS+6-BA1.0mg/l
诱导、分化培养基:MS+6-BA0~1.0+NAA0~0.1mg/l
生根培养基:MS+NAA0-1.0mg/l
以上培养基均附加 2%蔗糖,0.8%的琼脂,以
1.0mol/lNaOH或HCI调pH至5.7~6.0,在121℃下灭菌
15min。培养室一般保持温度为23℃~25℃,光/暗周期
16/8h,光强1000~1500lx,湿度60%~70%。
2 结果与分析
2.1 无菌苗的获得
以实生苗顶芽、茎节为最初外植体,接种到初始培
养基上。接种后检查污染和褐变情况,发现污染及时清
理,发现褐变及时转换新鲜培养基。
从表1可见,MS+6-BA1.0的分化率明显高于MS,
而且不同培养基的褐变程度不同,展叶抽枝形成无菌
苗的时间也不同。在MS培养基上,顶芽和茎节长势良
好,可不用转换培养基,接种3d,侧芽萌动,一周后芽开
放,展叶、抽枝,20d即可生成株高 3~5cm的完整植株,
顶芽和茎节的差异并不明显。在MS+6-BA1.0培养基上
有褐变现象,一般在10d左右转一次瓶既可解决。接种
后 15d后芽开放,展叶、抽枝,30d形成无菌苗,因为茎
节的侧芽发育,而且茎上可以生成分化芽,其成苗率比
顶芽更适合初始培养。
2.2 不同外植体的诱导和分化
2.2.1 茎节的诱导和分化
取无菌苗的茎节转入诱导、分化培养基,诱导愈伤
组织和丛生芽。从表2看出转入诱导、分化培养基35d
的观察结果:侧芽展叶抽枝,形成愈伤组织及分化的能
力因激素的浓度不同而有差异。
茎节在各培养基上均能出现愈伤组织,6-BA浓度
越小出愈率越低,30d左右开始分化,在MS+6-BA1.5+
NAA0.05上分化率最高,每平方厘米愈伤组织可产生
约 20个芽,在芽高约为 2~3cm时切下移至生根培养
基,继续培养,如不及时继代则分化芽将不继续发育,
逐渐枯萎。
六倍利的组织快繁技术
孟庆敏,卓丽环
(东北林业大学,黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:以六倍利(Lobeliaerinus)茎节,顶芽,叶片,叶柄、茎为材料,采用MS培养基,加入不同种类和浓度的激素进行培
养。通过研究发现培养基MS+6-BA1.5+NAA0.05mg/l产生愈伤组织及分化最好,MS+NAA0.05mg/l生根最好。
关键词:六倍利;组织培养;愈伤组织;分化
表1 不同培养基的培养效果
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表5 不同浓度NAA的生根诱导
表4 不同激素配比对叶片、叶柄、茎段的影响
《农业网络信息》2006年第6期 农业实验与产业化
表3 不同激素配比对顶芽的影响
表2 不同激素配比对带叶茎节的影响
从表3可以看出,顶芽在所有培养基上均能产生
愈伤组织,但是其形态有显著差异:在培养基MS+6-
BA1.5+NAA0.05上一周左右产生愈伤组织,30d左右分
化,每平方厘米可分化约 15个芽,生根与带叶茎段相
同;6-BA浓度低或高都会影响其分化率;NAA的浓度
对分化的影响也很明显,它的浓度增加会大大降低六
倍利的分化率,由此可以看出激素的浓度对分化的影
响非常重要。
2.2.3 叶片、叶柄与茎段的诱导和分化
叶片、叶柄和茎段的培养比顶芽和茎节难分化。
从表 4可以看出在多种培养基上均产生愈伤组织,叶
片与叶柄在 MS+6-BA1.0+NAA0.05,MS+6-BA1.5+
NAA0.05上可以分化,但不能发育形成分化芽,而茎段
在每种培养基上都能分化,虽然分化率很低,但在MS+
6-BA1.5+NAA0.05上可以产生分化芽,每平方厘米约
为2个,芽高在2cm左右时无论是否切割下来移瓶均
不能继续发育成完整植株,逐渐死亡。
2.3 生根阶段
由表5可以看出六倍利极易生根,在MS培养基上
即可生根,但是少且没有分枝,对移栽存在一定困难;
在MS+NAA0.05上不但生根最好,而且长势旺盛,适合
移栽;在MS+NAA0.1和 MS+NAA0.15上,虽然生根
好,但是植株生长差,叶黄、茎细,植株弱,不利于移栽
与应用。
2.2.2 顶芽的诱导和分化
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(上接第157页)
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2.4 移栽阶段
在根长到2~3cm时出瓶,不需要炼苗,由三角瓶中
取出后,洗净根部的琼脂,直接移栽于温室中,在散射
光下进行培养。培养土为园土:沙为3∶1,移栽一周后观
察,共移栽 35棵,成活 33棵,且长势良好,成活率达
94.3%。
3 结论与讨论
(1)培养于MS培养基的带叶茎段和顶芽虽然能形
成完整植株,但一个切段只能形成一个植株,并不能增
加其繁殖系数,与种子繁殖的差异不明显,意义不大,
不能用于生产中。
(2)培养基MS+6-BA1.0+NAA0.05可以产生愈伤
组织并能生成分化芽,与添加其他浓度的培养基相比
分化率最高,投资相对低廉,是六倍利快繁技术中比较
理想的愈伤、分化培养基,可以用于生产。
(3)任何培养基上的分化芽如果不及时从其中移
植到MS基础培养基中,将不会继续发育,逐渐死亡。所
以要得到健壮的分化苗,及时移瓶是关键。
(4)不添加任何激素的MS培养基可以作为壮苗培
养基。在含有激素的培养基上虽然能够产生愈伤组织
和分化芽,但生长在其中的苗往往叶色黄绿、茎较细,
较脆弱,不适合在外界环境中生长,将较弱的小苗移到
MS培养基上一周左右即茎变粗,叶片绿色转浓,植株
变得健壮。
(5)六倍利在MS+NAA0.05上生根效果最好,而且
植株健壮,叶绿、茎粗,主根粗,而且分枝多,适合移栽。
(6)六倍利的茎、叶片、叶柄均能产生愈伤组织,但
是分化率低,而且很难产生完整的分化植株,要应用在
生产中还有待于在今后做进一步研究。
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