全 文 ：UPLC同时测定灯心草中绿原酸、隐绿原酸、
咖啡酸和木犀草素的含量
丁淑敏1，2，3，朱粉霞1，施亚琴1，贾晓斌1*
(1. 江苏省中医药研究院 /国家中医药管理局中药释药系统重点研究室，江苏 南京 210028;2. 常州大学制
药与生命科学院，江苏 常州 213164;3. 南京中医药大学，江苏 南京 210046)
摘要 目的:建立灯心草中绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸和木犀草素 UPLC 含量测定方法。方法:采用 Agilent
Poroshell 120 EC-C18色谱柱(100 mm × 3. 0 mm，2. 7 μm) ，以乙腈-0. 1%的甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速
0. 4 mL /min，检测波长 325 和 350 nm，柱温 30 ℃。结果:绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸和木犀草素分别在 0. 65 ～
64. 96 μg /mL(r1 = 0. 9997)、0. 16 ～ 16. 32 μg /mL(r2 = 0. 9999)、0. 33 ～ 32. 64 μg /mL(r3 = 0. 9999)和 0. 41 ～ 40. 60
μg /mL(r4 = 0. 9998)内线性关系良好;平均加样回收率(n = 6)在 95. 8% ～ 102. 7%，RSD 均小于 4. 7%。结论:该
方法快速、准确、重现性好，可用于灯心草中绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸和木犀草素的含量测定。
关键词 灯心草;酚酸;黄酮;超高效液相色谱(UPLC)
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)02-0246-03
收稿日期:2012-10-15
基金项目:江苏省中医药领军人才项目(2006)
作者简介:丁淑敏(1978-) ，女，在读博士研究生，专业方向:中药药效物质基础及质量控制研究;Tel:025-85637809，E-mail:dsm@ cc-
zu. edu. cn。
* 通讯作者:贾晓斌，Tel:025-85637809，E-mail:jxiaobin2005@ hotmail. com。
灯心草为灯心草科灯心草属植物灯心草 Juncus
effusus L. 的干燥茎髓，具有清心火、利小便之功效，
用于治疗心烦失眠、尿少涩痛、口舌生疮〔1〕。灯心
草的化学成分主要有菲类、黄酮类、酚类和萜类
等〔2-4〕。历版中国药典关于灯心草的质量控制仅限
于性状鉴别而无含量测定指标，对灯心草的含量测
定方面的研究国内笔者仅见关于去氢厄弗酚的含量
测定〔5〕。为此，本实验建立了 UPLC 同时测定灯心
草中绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸和木犀草素含量的方
法，该方法快速、准确，可为全面规范灯心草药材质
量提供参考。
1 仪器与材料
Waters Acquity UPLC 超高效液相色谱仪，包括
二元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱、二极管阵列
检测器(DAD)以及 Waters Empower2 软件(美国，
Waters 公司) ;UV-2802 型紫外分光光度计(上海尤
尼柯仪器有限公司) ;Mettler Toledo -MT5 电子天平
(Mettler Toledo 分析仪器有限公司) ;KQ5200DE 型
数控超声仪(昆山市超声仪器有限公司)。
乙腈(美国，Merck 公司)、甲酸和甲醇(美国，
Tedia Company 公司)均为色谱纯。绿原酸(批号:
110753)、咖啡酸(批号:110885)和木犀草素(批号:
111520)购自中国食品药品检定研究院，隐绿原酸
(批号:110676)购自成都普瑞科技开发有限公司。
7 批灯心草药材分别来自江西、江苏和四川等地，经
南京中医药大学生药学教研室吴德康教授鉴定为灯
心草科灯心草属植物灯心草 Juncus effusus L. 的干
燥茎髓。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱
柱(100 mm × 3. 0 mm，2. 7 μm) ，流动相 A 为乙腈，
B为 0. 1%的甲酸水，梯度洗脱条件:0 ～ 1 min，5%
～11% A;1 ～ 5 min，11% ～ 13% A;5 ～ 7 min，13%
～25% A;7 ～ 10 min，25% ～ 25% A;10 ～ 12 min，
25% ～ 27% A;12 ～ 18 min，27% ～ 45% A。流速:
0. 4 mL /min;柱温:30 ℃;绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸
检测波长 325 nm，木犀草素检测波长 350 nm;进样
量 4 μL。对照品及样品色谱图见图 1。
2. 2 对照品溶液的制备 分别取绿原酸、隐绿原
酸、咖啡酸和木犀草素对照品适量，精密称定，加甲
醇制成对照品储备液，备用。依次精密量取上述 4
个对照品储备液适量置同一 10 mL量瓶中，加 50%
甲醇稀释至刻度，制成含绿原酸 64. 96 μg /mL、隐绿
原酸 16. 32 μg /mL、咖啡酸 32. 64 μg /mL、木犀草素
40. 60 μg /mL的混合对照品溶液。
2. 3 供试样品溶液的制备 取灯心草粉末(过 60
目筛)约 1. 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入
50%甲醇 50 mL，称定质量，超声(功率 250 W，频率
33 kHz)30 min，放至室温，用 50%甲醇补足失重，摇
匀，经 0. 22 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
·642· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 2 期 2013 年 2 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2013.02.026
图 1 对照品(A-1，A-2)和灯心草样品(江西，B-1，B-
2)UPLC 图(A-1，B-1:325 nm;A-2，B-2:350 nm)
1. 绿原酸 2. 隐绿原酸 3. 咖啡酸 4. 木犀草素
2. 4 线性关系考察 分别精密移取上述混合对照
品溶液，加 50%甲醇稀释，稀释倍数分别为 0、2、10、
20、40 和 100 倍，得一系列对照品混合溶液，摇匀。
在上述色谱条件下进样分析，以各成分峰面积为纵
坐标(Y) ，质量浓度(μg /mL)为横坐标(X) ，绘制标
准曲线，计算回归方程和线性范围见表 1。
2. 5 检出限和定量限的测定 将“2. 2”项下的混
合对照品溶液用 50% 甲醇逐级稀释后，以 S /N≥3
～ 4 计算检测限(LOD) ，以 S /N≥10 ～ 12 计算最
小定量限(LOQ) ，见表 1。
2. 6 精密度试验 取同一混合对照品溶液，在上述
色谱条件下连续进样 6 次，计算绿原酸、隐绿原酸、咖
啡酸和木犀草素峰面积的 RSD 分别为 0. 080%、
0. 35%、0. 82%、1. 2%，表明仪器精密度良好。
2. 7 重复性试验 取灯心草 (江西，批号:
20120316)粉末 1. 5 g，按“2. 3”项下操作，平行制备
6 份供试品溶液，在上述色谱条件下进行分析，计算
绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸和木犀草素含量的 RSD分
别为 2. 4%、2. 0%、2. 2%、2. 7%，表明重复性良好。
2. 8 日间精密度试验 于第一个工作日取同一批
灯心草(江西，批号:20120316)3 份，按“2. 3”项下
平行操作，在上述色谱条件下进行测定;第二、第三
个工作日同法操作，计算 4 种被测定成分含量的
RSD 分别为 2. 6%、3. 4%、3. 3%、4. 5%，(n = 9) ，结
果显示方法日间精密度良好。
2. 9 稳定性试验 取灯心草 (江西，批号:
20120316)粉末 1. 5 g，按“2. 3”项下操作，经 0. 22
μm 微孔滤膜滤过至棕色量瓶中，在上述色谱条件
下分别在 0、2、4、6、8、12 h 进样分析，计算绿原酸、
隐绿原酸、咖啡酸和木犀草素峰面积的 RSD 分别为
2. 0%、2. 3%、1. 9%、2. 6%，表明供试品溶液在 12 h
内稳定。
2. 10 加样回收率试验 精密称定已知含量的灯
心草样品(江西，批号:20120316)粉末 6 份，每份
0. 75 g。分别精密加入对照品适量，按“2. 3”项下
方法制成供试品溶液，在上述色谱条件下进行分析，
计算平均回收率，结果见表 2。
2. 11 样品含量测定 取所收集的灯心草样品粉
末约 1. 5 g，精密称定，按“2. 3”项下方法制备供试
品溶液，在上述色谱条件下进行分析，计算绿原酸、
隐绿原酸、咖啡酸和木犀草素含量，结果见表 3。
表 1 4 种成分回归方程和线性范围
化合物 回归方程 r 线性范围 /(μg /mL) LOD/ng LOQ /ng
绿原酸 Y1 = 2. 840 × 10
4X1 － 36. 17 0. 9997 0. 65 ～ 64. 96 0. 13 0. 49
隐绿原酸 Y2 = 2. 537 × 10
4X2 + 70. 21 0. 9999 0. 16 ～ 16. 32 0. 17 0. 63
咖啡酸 Y3 = 4. 943 × 10
4 X3 － 2825 0. 9999 0. 33 ～ 32. 64 0. 07 0. 24
木犀草素 Y4 = 2. 614 × 10
4X4 － 9062 0. 9998 0. 41 ～ 40. 60 0. 81 1. 61
3 讨论
实验考察了 30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇和
100% 甲醇不同提取溶剂的超声提取效果，结果以
50%甲醇提取效果较好。提取时间上考察了50%
·742·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 2 期 2013 年 2 月
表 2 4 种成分加样回收率结果
化合物 样品中量/μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
绿原酸 155. 40 162. 40 316. 30 99. 1 100. 4 2. 4
155. 30 162. 40 312. 90 97. 0
155. 40 162. 40 322. 10 102. 6
155. 50 162. 40 316. 28 99. 0
155. 30 162. 40 323. 20 103. 4
155. 40 162. 40 319. 60 101. 1
隐绿原酸 34. 81 32. 64 66. 72 97. 8 95. 8 2. 1
34. 80 32. 64 65. 77 94. 9
34. 82 32. 64 66. 46 97. 0
34. 79 32. 64 65. 27 93. 2
34. 81 32. 64 66. 70 97. 7
32. 64 32. 64 65. 47 94. 0
咖啡酸 32. 16 32. 64 64. 96 100. 5 97. 4 3. 8
32. 15 32. 64 65. 08 100. 9
32. 17 32. 64 64. 35 98. 6
32. 17 32. 64 62. 34 92. 4
32. 14 32. 64 64. 49 99. 1
62. 38 32. 16 32. 64 92. 6
木犀草素 24. 23 24. 36 50. 27 106. 9 102. 7 4. 7
24. 23 24. 36 47. 83 96. 9
24. 24 24. 36 49. 48 103. 6
24. 25 24. 36 48. 22 98. 4
24. 24 24. 36 48. 89 101. 2
24. 22 24. 36 50. 87 109. 4
甲醇提取 20、30 和 40 min的效果，发现提取时间为
20 min时成分含量较低，30 和 40 min药材各成分差
别不大，表明，提取时间 30 min 为宜。此外，实验还
比较了乙腈-醋酸水、乙腈-甲酸水和甲醇-甲酸水 3
种流动相的分离效果。色谱图显示，甲醇-甲酸水的
分离效果较差;乙腈-甲酸水峰形较乙腈-醋酸水峰
形好。最终采用了峰形和分离效果均较好的乙腈-
甲酸水系统作为流动相。
本实验首次利用 UPLC法对灯心草药材中的绿
原酸、隐绿原酸、咖啡酸和木犀草素的含量进行同时
测定，18 min 内即可同时完成 4 个成分的准确测定，
分析效率高，方法灵敏、具有进一步推广和应用的价
值。
表 3 不同产地灯心草中绿原酸、隐绿原酸、
咖啡酸和木犀草素的含量(n =3，μg /g)
产地(批次) 绿原酸 隐绿原酸 咖啡酸 木犀草素
江西(110817) 61. 75 11. 45 26. 25 36. 81
江西(20120316) 207. 00 46. 38 42. 85 32. 29
江西(111027) 206. 88 41. 24 42. 91 35. 85
江西(120308) 196. 41 54. 59 40. 29 25. 16
江苏(081102) 47. 81 10. 20 29. 60 118. 6
江苏(100316) 169. 90 20. 32 27. 31 84. 83
四川(080517) 92. 63 10. 22 16. 57 43. 70
应用所建立的 UPLC 定量检测方法测定了 7 批
不同产地和批次灯心草药材中以上 4 种成分的含
量，测定结果显示，7 批药材中均含有以上 4 种成
分，且 4 种成分的含量偏差较大。其中，江西产地灯
心草药材中绿原酸和隐绿原酸含量较高;江苏产地
药材中木犀草素含量较高，几种成分的含量差异可
能与灯心草生长气候环境有关;此外，批次较早的江
苏(081102)和四川(080517)灯心草药材中酚酸类
成分含量相对较少，这可能与酚酸类成分稳定性相
对较差有关，其影响因素有待进一步的研究。不同
产地灯心草药材中几种成分的显著差别提示，对灯
心草进行多指标全面质量控制至关重要。应综合分
析灯心草中各类成分在其临床疗效中的作用。
目前对于灯心草的研究主要集中在菲类成
分〔6〕，而黄酮类和酚酸类成分有可能是疗效组分。
本实验为灯心草进行多指标质量控制提供了一定参
考，但灯心草中酚酸及黄酮类成分与其临床疗效物
质基础之间的内在联系，还有待于进一步深入研究。
参 考 文 献
［1］国家药典委员会 . 中华人民共和国药典［S］. 一部 . 北
京:中国医药科技出版社，2010:137-138.
［2］ Katsuhito S，Masao T，Yoshinori A. Phenanthrene Deriva-
tives from the Medullae of Juncus effusus L. ［J］. Phyto-
chemistry，1991，30(9) :3149-3151.
［3］ 单承莺，叶永浩，姜洪芳，等 . 灯心草化学成分研究
［J］.中药材，2008，31(3) :374-376.
［4］李红霞，邓铁忠，陈玉，等 . 灯心草酚性成分的分离与结
构鉴定［J］.药学学报，2007，42(2) :174-178.
［5］段琼，王杨，林婷婷，等 . HPLC 测定灯心草中去氢厄弗
酚含量［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17(20) :92-94.
［6］陈玉，杨光忠 . 灯心草属植物菲类化合物结构和生物活
性的研究进展［J］.天然产物研究与开发，2005，17(4) :
505-507.
·842· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 2 期 2013 年 2 月