全 文 ：琐琐葡萄多糖的提取及抗氧化能力研究＊
刘　涛1＊＊ , 马　龙1＊＊＊ , 赵　军2 , 闫　明2 , 郭　翠2
(1新疆医科大学公共卫生学院毒理学教研室 , 新疆　乌鲁木齐　830011;
2新疆药物研究所维吾尔药研究开发重点实验室 , 新疆　乌鲁木齐　830002)
摘要:目的:研究琐琐葡萄多糖(VVP)提取 、分离 、纯化的方法 ,探讨其抗氧化能力。方法:建立热水提取 、乙
醇沉淀 、Sevage法除蛋白及透析 、纯化 VVP的方法 , 采用苯酚-硫酸法测定其含量 , 并比较了不同浓度 VVP(200、
400 、600 、800 、1 000 μg/ ml)和抗坏血酸(Vc 50、100 、200、400 、600、800 、1 000 μg/ ml)的还原能力以及不同浓度
VVP 和 V C(均为 40 、80、160、320 、600 、800 μg/ ml)清除二苯代苦味酰基(DPPH)自由基的能力。结果:VVP的还
原能力及清除 DPPH 自由基的能力随其浓度的增加而增大 , 在 800μg/ ml时 , DPPH 自由基清除率达到 90%以上 ,
接近 VC 的清除率。结论:琐琐葡萄多糖具有较好的抗氧化能力。
关键词:琐琐葡萄多糖;提取;抗氧化能力
中图分类号:Q949.756.3;R34　　文献标识码:A　　文章编号:1009-5551(2007)11-1230-03
Extract polysaccharides from vitis vini f eral L.and study its antioxidant activity
LIU Tao , MA Long , ZHAO Jun , et al
(Department of Toxicolog y , College of Public Heal th , X inj iang Med ical Universi ty ,
Urumqi 830011 , China)
Abstract:Objective:To research the me thod of ex t ract , separation and puri ficat ion of the poly saccha rides
f rom viti s vinifera L .(VVP)and evaluate i ts antioxidant act ivity .Methods:Po lysaccharides w as ex t racted
wi th w ater , subsided w ith 95% ethano l , clea red pro tein wi th Sevage assay and then dialyzed and purified.
Content of VVP was assayed w ith pheno l-vi triolic co lorimetry.Dete rmination and comparing of deoxidiza-
tion activi ties of VVP (200 , 400 , 600 , 800 , 1000 μg/ml)and vitamin C (50 , 100 , 200 , 400 , 600 , 800 ,
1000 μg/ml)and clea ring DPPH free radical activit ies of VVP and vitam in C (40 , 80 , 160 , 320 , 600 , 800
μg/ml).Results:With augmentation of concentration , the deoxidization and scaveng ing DPPH free radical
capaci ty of VVP was increased continuously.VVP(800 μg/ml)could clear 90%DPPH free radical.That
w as close to Vc.Conclusion:VVP has relatively strong antiox idant activity .
Key words:vi ti s v ini fera L .;ext ract;antioxidant activi ties
　　琐琐葡萄中除含有大量的葡萄糖 、果糖 、维生
素 、氨基酸等营养成分外 ,还有鞣质类 、黄酮 、萜类 、
甾类 、多糖等多种生物活性物质[ 1] 。琐琐葡萄中含
有大量的多糖类成分 ,多糖具有增强免疫 、抗氧化 、
抗肿瘤 、降血压 、降血脂 、降血糖 、抗衰老 、抗辐射等
多方面的药理作用 ,是近年来天然药物研究的热点
课题之一[ 2] 。本研究建立了热水提取 、乙醇沉淀 、
Sevage 法除蛋白及透析 、分离 、纯化提取琐琐葡萄
多糖(VVP)的方法 ,并采用苯酚-硫酸法测定其含
量 ,并比较了不同浓度 VVP 的还原能力和抗氧化
能力。
1　材料与方法
1.1　实验仪器与试药　UV-2501PC 型双光束紫外
分光光度计(日本岛津),电子分析天平 ,离心机 ,真
空干燥箱;二苯代苦味酰基(DPPH)自由基(Sigma
公司),半乳糖标准品(中国药品生物制品检定所),
1230 新疆医科大学学报　JOURNAL OF XINJIANG M EDICA L UNIVERSITY　2007 Nov., 30(11)
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基金项目:国家自然科学基金资助项目(30660157);新疆维吾尔自治区高校科研计划青年启动基金项目(XJEDU2006S21)
作者简介:刘　涛(1974-),女 ,副教授 ,在读博士,研究方向:新疆特色药食兼用植物开发应用基础研究。
通讯作者:马　龙 ,男(回族),教授 ,博士生导师 , E-mail:m l@xjmu.edu.cn。
抗坏血酸(Vc ,上海融禾医药科技发展有限公司)。
浓硫酸 、无水乙醇 、乙醚 、丙酮等均为国产分析纯试
剂。琐琐葡萄购自新疆维吾尔自治区吐鲁番维药市
场 ,经专家鉴定为 Vit is v ini f eral L.的果实 。
1.2　实验方法
1.2.1　VVP 的提取　琐琐葡萄药材 300 g ,粉碎 ,
过 40目筛 ,加 10倍体积的水回流提取 3次 ,每次 3
h ,提取液合并后减压浓缩至适量 ,再加入 5倍体积
的 95%乙醇 ,静置过夜 。抽滤后沉淀部分经无水乙
醇 、丙酮 、乙醚洗涤 ,置 60℃真空干燥箱中干燥 ,得
粗多糖 。将粗多糖溶于水 ,以 Sevage法除蛋白 ,透
析。透析液中加入 5 倍体积的 95%乙醇 ,静置过
夜 ,抽滤 ,所得沉淀用无水乙醇 、丙酮 、乙醚数次洗
涤 ,置 60 ℃真空干燥箱中干燥 ,即得精制多糖 。
1.2.2　VVP 的含量测定　以半乳糖为对照品 ,采
用苯酚-硫酸法测定 VVP 的含量[ 3] 。
1.2.2.1　溶液的配制　半乳糖对照品溶液的配制:
精密称取经 105℃干燥恒重的半乳糖对照品 30.00
mg ,置 100 ml容量瓶中 ,加水溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 ,备用 。苯酚液的配制:取苯酚 100 mg ,加入
0.10 g 铝片和 0.050 g 碳酸氢钠 ,加热蒸馏 , 收集
182℃馏分 ,称取 6.00 g 于 100 m l棕色容量瓶中 ,
加蒸馏水至刻度 ,摇匀 ,密封备用。VVP 样品溶液
的配制:精密称取 105℃干燥恒重的精制多糖 75.05
mg ,置 50 ml容量瓶中 ,加蒸馏水溶解定容至刻度 ,
摇匀 ,备用 。
1.2.2.2　标准曲线制备　取半乳糖对照品溶液及
VVP 供试品溶液 ,在 300 ～ 700 nm 范围内扫描 ,比
较显色前后的光谱图结果 ,确定 490 nm 为 VV P 定
量的检测波长 。分别吸取半乳糖标准溶液 0.20 、
0.40 、0.60 、0.80 、1.00 、1.20 m l ,置具塞试管中 ,分
别加水至 2.0 m l ,然后加入 6%的苯酚溶液 1.0 ml ,
浓硫酸 5.0 ml , 静止 10 min , 摇匀 , 室温放置 20
min ,以蒸馏水作空白 ,在 490 nm 处测定吸光度值 ,
以浓度对吸光度回归 ,得标准曲线Y =0.005 2X +
0.021 9 , r =0.994 9 ,说明半乳糖在 30 ～ 180μg/ml
范围内呈良好的线性关系 。
1.2.2.3　多糖换算因子的测定　精密吸取 VVP
供试液 0.6 ml ,加蒸馏水至 2.0 ml ,同标准曲线下
操作测定吸光度值 ,按 f=W/CD计算换算因子 f ,
其中W 为样品重量 ,C 为多糖中相当于半乳糖的浓
度 ,D为稀释倍数 。做平行实验 6次 ,求其平均值为
0.532。求得 f=4.508。
1.2.2.4　VVP 含量测定　精密称取琐琐葡萄原料
粉末 5.00 g ,加入 10倍量的蒸馏水 50 ml ,置于 250
ml圆底烧瓶中 ,加热回流 1 h ,趁热过滤 ,得水提液 ,
提取 2次 ,合并水提液用 80%乙醇沉淀后 ,抽滤 ,所
得滤渣溶解于 100 ml容量瓶中 ,蒸馏水定容至刻
度 ,作为供试液备用 ,按此法平行做 5批样品。精密
吸取稀释 10 倍的上述供试液 1.0 ml 于具塞试管
中 ,按标准曲线下步骤操作 ,显色 ,在 490 nm 处测
定吸光度值 ,根据回归方程计算样品供试液中半乳
糖的含量 ,并按公式:多糖含量(%)=CDf/W×100
计算供试液中多糖的含量 ,式中 C 为供试液中半乳
糖的量(mg), D为供试液的稀释倍数(1 000倍), f
为换算因子(4.508),W为供试品的量(mg)。
1.2.3　VVP 的还原能力测定　分别吸取浓度为
200 、400 、600 、800 、1 000 μg/ml 的 VVP 溶液和浓
度为 50 、100 、200 、400 、600 、800 、1 000 μg/ml 的抗
坏血酸(Vc)溶液各 1.0 m l 置具塞试管中 , 加入
0.02 mol磷酸盐缓冲液 2.5 ml ,10 g/L 铁氰化钾溶
液2.5 ml , 混匀 ,50℃水浴 20 min 后 ,分别加入 100
g/L 三氯乙酸溶液 2.5 m l、蒸馏水 2.5 ml 、1g/L 三
氯化铁溶液 0.5 m l ,在 700 nm 处测定其吸光度值 。
1.2.4　VVP 清除 DPPH 自由基能力测定　分别
吸取浓度为 40 、80 、160 、320 、600 、800 μg/ml 的
VVP 溶液和 Vc溶液各 1.0 ml置具塞试管中 ,加入
6.5×10-5 mol的 DPPH 自由基溶液 2.0 m l ,混匀
后 ,在 490 nm 波长处测吸光度值(A),记为 Ae;加
入 50 mg/L 的 DPPH 自由基溶液的溶剂(95%的乙
醇溶液)2.0 ml和 1.0 m l待测试样溶液 ,测定值记
为 A r;加入 50 mg/L 的 DPPH 自由基溶液 2.0 m l
和 1.0 ml待测试样溶液 ,混匀后测 A 值 ,记为 As。
计算 DPPH 自由基清除率 Y=1-(A s-A r)/Ae 。
2　实验结果与分析
2.1　VV P的含量　5 份琐琐葡萄平行样品测定结
果显示 ,供试液中多糖平均含量为 8.19%, RSD =
4.21%(表 1)。
表 1　VVP 含量的测定
样品号 1 2 3 4 5 平均值
琐琐葡萄供试液吸光度值(A) 0.495 0.493 0.496 0.494 0.493 -
VVP 的含量(%) 8.22 8.16 8.23 8.18 8.16 8.19
2.2　VVP 的还原能力　VVP 和 V c的还原能力均
随样品浓度的增大而增加 , VVP 在 1 000 μg/ml
时 ,还原 Fe3+的能力接近于 Vc 的 50%,说明其具
有一定的还原能力(表 2)。
2.3　VVP 清除 DPPH 自由基的能力　在试验浓
度范围内 V c对 DPPH 自由基的清除率基本无变
化 ,均大于 90%,而 VVP 则随其浓度的增加清除率
逐渐增大 ,在 800 μg/mL 时 ,清除率达到 90%以上 ,
接近 Vc的清除率(表 3)。
1231新疆医科大学学报　JOURNAL OF XINJIANG M EDICA L UNIVERSITY　2007 Nov., 30(11)
表 2　VVP 和 Vc还原 Fe3+的能力
浓度(μg/m l) 吸光度值(A)
Vc VVP
50 0.219 -
100 0.716 -
200 0.912 0.035
400 1.050 0.096
600 1.174 0.268
800 1.191 0.436
1 000 1.258 0.516
表 3　VVP 和 Vc对 DPPH自由基的清除能力
浓度(μg/m l) 清除率(%)
Vc VVP
40 93.17 19.28
80 94.62 29.29
160 95.21 47.72
320 96.17 66.71
600 97.76 80.80
800 98.01 91.13
3　结论
多糖广泛分布于多种生物体中 ,尤其是动物细
胞膜 、植物和微生物细胞壁中 ,是一类由醛糖或酮糖
通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物 ,是构成
生命的分子基础之一 。人们对多糖的认识首先是把
它看作食物中的能量来源 ,20 世纪 60 年代后作为
广谱免疫促进剂而引起人们极大的兴趣 。经过半个
多世纪的发展 ,发现了许多具有重要生物活性的植
物多糖 ,研究的广度和深度都在不断发展 ,且由于其
具有独特的药理活性和低毒效应而在临床应用中具
有极大的潜力。
本研究采用热水提取 、乙醇沉淀 , Sevage 法除
蛋白 、透析分离纯化提取了 VVP ,工艺操作简单 ,适
用于工业生产。利用多糖在浓硫酸作用下 ,先水解
成单糖 ,并迅速脱水生成糖醛衍生物 ,与苯酚反应生
成橙黄色溶液的性质 ,采用苯酚硫酸法测定了 VVP
的含量为 8.19%,其含量较高 ,具有开发应用价值。
经扫描确定在 490 nm处有 VVP 的特征吸收峰 ,测
定结果准确 ,重现性较好 。体外抗氧化研究结果显
示 ,琐琐葡萄多糖能有效清除 DPPH 自由基 ,具有
较强的抗氧化能力 ,这为进一步研究 VVP 的药理
活性及其作用机制提供了实验依据 ,也为开发利用
新疆丰富的葡萄资源提供了新的思路 。
参考文献:
[ 1] 　刘　涛 ,马　龙 ,赵　军,等.超声法提取琐琐葡萄中总三萜的
工艺研究[ J] .食品研究与开发 , 2007 , 28(4):8-11.
[ 2] 　邓小云 ,丁登峰 ,戴美红 ,等.植物多糖药理作用研究进展[ J] .
中医药导报 , 2006, 12(9):86.
[ 3] 　钟建平 ,钟春燕 ,赵道辉,等.苯酚-硫酸比色法测定保健食品多
糖的研究[ J] .中国卫生检验杂志 , 2001 ,11(6):675.
[ 收稿日期:2007-07-25]
葡萄籽提取物对小鼠急性化学性肝损伤保护
作用的实验研究＊
丁玉松1＊＊ , 马　龙1＊＊＊ ,王　忠2 , 刘　涛1
(新疆医科大学1公共卫生学院卫生毒理学教研室 , 2实验动物中心 , 新疆　乌鲁木齐　830011)
摘要:目的:研究葡萄籽提取物(GSE)对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性化学性肝损伤的保护作用 , 并探讨其可能
的作用机制 ,为进一步研究 GSE 的保健功能奠定基础。方法:雄性昆明种小鼠 60 只 ,随机分为正常对照组 、急性化
学性肝损伤模型组 、联苯双酯阳性对照组(150 mg/ kg)以及 GSE 低 、中 、高剂量组(50、250、500 mg/kg)共 6 组。测定
并比较各组小鼠肝脏和脾脏系数 ,采用赖氏法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活
性, 采用黄嘌呤氧化酶法测定肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性 ,采用硫代巴比妥酸法(TBA)测定肝组织中丙二醛
(MDA)含量 ,并对各组进行比较 ,观察肝脏病理组织学变化。结果:GSE 各剂量组均能升高急性化学性肝损伤小鼠
血清 ALT和 AST 活性(P <0.01), 升高肝组织 SOD活性(P <0.01), 降低 MDA 含量(P <0.01), 并能不同程度地
改善肝脏病理组织损伤。结论:葡萄籽提取物对 CCl4 所致急性化学性肝损伤具有保护作用。
关键词:葡萄籽提取物;化学性肝损伤;保护作用
中图分类号:Q949.756.3;R-332;R392.1;R575　　文献标识码:A　文章编号:1009-5551(2007)11-1232-04
1232 新疆医科大学学报　JOURNAL OF XINJIANG M EDICA L UNIVERSITY　2007 Nov., 30(11)
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基金项目:新疆维吾尔自治区高校科研计划重点项目(XJEDU2004I29)
作者简介:丁玉松(1979-),男 ,硕士 ,研究方向:特色药食兼用植物的开发应用基础研究。
通讯作者:马　龙 ,男(回族),教授 ,博士生导师 , E-mail:m l@xjmu.edu.cn。