全 文 ：159※工艺技术 食品科学 2010, Vol. 31, No. 24
琐琐葡萄果实总黄酮提取工艺
祖丽皮亚·玉努斯
(新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046)
摘 要：研究琐琐葡萄果实总黄酮的醇法提取工艺。在考察各影响因素的基础上设计正交试验，得出各种因素对
提取效果影响的主次顺序为料液比＞提取时间＞提取温度＞乙醇体积分数，总黄酮提取最佳工艺条件为：提取温度
80℃、乙醇体积分数 60%、提取时间 120min、料液比 1:30(g/mL)。
关键词：琐琐葡萄；总黄酮；提取工艺
Extraction Processing of Total Flavonoids from Vitis vinifera L.
ZULFIYA Yunus
(College of Life Sciences and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, China)
Abstract ：The influence order of the factors on extraction efficiency was material-liquid ratio, extraction time, extraction
temperature and ethanol concentration. The optimal extraction processing parameters of total flavonoids from Vitis vinifera L.
were explored by single-factor and orthogonal experiments to be extraction temperature of 80℃, ethanol concentration of 60%,
extraction time of 120 min and material-liquid ratio of 1:30 (g/mL).
Key words：Vitis vinifera L.；total flavonoids；extraction processing
中图分类号：O623.54 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)24-0159-04
收稿日期：2010-01-25
作者简介：祖丽皮亚·玉努斯( 1 9 7 0 —)，女，副教授，硕士，研究方向为资源生物及微生物。
E-mail：zulfiya_yunus@126.com
琐琐葡萄是葡萄科(Vitaceae)葡萄属(Vitis)植物山葡
萄(Vitis vinifera L.)的果实，主产于新疆吐鲁番、鄯善、
和田等地。果实含果糖、葡萄糖、苹果酸、柠檬酸、
维生素类、氨基酸类及黄酮类等成分[ 1 ]。主治气血虚
弱、肺虚咳嗽、心悸盗风、湿痹痛、淋病、浮肿。
李时珍在《本草纲目拾遗》中详细论述了产自吐鲁番
的琐琐葡萄的药用价值，说它大若五味子，形如胡椒，
小儿食之，能解痘毒[ 2 ]。时至今日，琐琐葡萄仍是维
吾尔人用来治疗小儿麻疹的首选良药[3]。
本实验对琐琐葡萄总黄酮提取工艺进行研究，以期
获得最佳提取工艺，可为利用琐琐葡萄工业化生产黄酮
类药用成分提供一定参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
琐琐葡萄(Vitis vinifera L.)，采自中国科学院新疆
分院吐鲁番沙漠植物站。
芸香叶苷(芦丁，rutin) 中国医药集团上海化学试
剂公司；乙醇、石油醚、甲醇、硝酸铝、亚硝酸钠、
氢氧化钠等试剂均为分析纯。
1.2 仪器与设备
RE-52A型旋转蒸发仪、BT-23I型水浴锅 上海亚
荣生化仪器厂；LDZX-40BI型高压蒸汽灭菌锅 上海申
安医疗器械厂；THZ-82型恒温培养箱 金坛市国旺实
验仪器厂；752型分光光度计 上海元析仪器有限公司。
1.3 方法
1.3.1 标准溶液的制备[4]
精密称取在 120℃恒温干燥至质量恒定的芦丁标准
品 25mg置于 100mL容量瓶中，加 70%乙醇 50mL置水
浴上微热使溶解，放冷，加 70% 乙醇稀释至刻度，摇
匀，即得所需标准液(0.25mg/mL)。
1.3.2 样品溶液的制备[4]
取琐琐葡萄，置恒温箱中干燥 2 4 h，研碎，用石
油醚脱脂后在恒温箱里干燥 2h。精密称量 10g用过滤纸
包好置索氏提取仪中按一定的料液比加入乙醇溶液，在
80℃下加热回流一定时间，移去回流液，用少量 70%
乙醇洗涤容器，减压蒸馏回收乙醇，过滤回流液，移
. . ..
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至 250mL容量瓶。用少量 70%乙醇洗涤容器，洗液并
入容量瓶中，用 7 0 % 乙醇定容，摇匀即得样品溶液。
1.3.3 最佳测定波长的选择[5]
取芦丁标准溶液 2.0mL置于 25mL容量瓶中，加入
5%亚硝酸钠溶液 1mL，摇匀，放置 10min。加入 1%
硝酸铝溶液 1mL，摇匀，放置 10min。加入 4%氢氧化
钠溶液 10 mL，加水定溶，摇匀，放置 15 mi n。以空
白作对照，用 752分光光度计在 450～550nm间扫描，确
定最佳测定波长。
1.3.4 标准曲线绘制
精确吸取标准溶液 0.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、
0.7mL分别置于 25mL容量瓶中，分别加入 5%亚硝酸钠
溶液 1mL摇匀，静置 10min，加入 1%硝酸铝溶液 1mL
摇匀，静置 10min，加入 4%氢氧化钠溶液 10mL，70%
乙醇定容至刻度静置 15min。在 500nm波长处测溶液的
吸光度，得到芦丁标准溶液的工作曲线，用最小二乘
法进行线性回归，得回归方程：C=0.0894A－ 0.0005，
相关系数 r=0.9989，表明有良好的线性关系，作为琐琐
葡萄中总黄酮含量的测定方法。
1.3.5 稳定性实验[5]
按照 1.3.4节标准曲线绘制方法，对标准品和样品
溶液放置一定时间后测定吸光度，考察其稳定性。
1.3.6 总黄酮提取工艺单因素试验[6-9]
分别研究提取剂种类、样品脱脂与不脱脂的区别、
提取时间、提取剂体积分数、提取温度、料液比等因
素对琐琐葡萄果实总黄酮含量的影响。
1.3.7 提取工艺条件的优化[10-12]
为了确定最佳工艺条件，参考有关资料，确定以
乙醇体积分数、提取时间、提取温度、料液比 4 种因
素进行正交试验设计及测定。
2 结果与分析
2.1 总黄酮含量的测定结果
2.1.1 最大吸光度的测定
如图 1所示，显示芦丁在 500nm处吸光度最大，即
最佳测定波长为 500nm。
时间 /min 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
标准溶液质量浓度 /(mg/mL) 0.242 0.243 0.245 0.244 0.246 0.247 0.245 0.246 0.244 0.245 0.246 0.247
样品溶液质量浓度 /(mg/mL) 0.072 0.069 0.071 0.072 0.073 0.071 0.072 0.069 0.072 0.070 0.069 0.068
表 1 稳定性实验结果
Table 1 Results of stability experiments
2.1.2 稳定性实验结果
取标准溶液和样品溶液各 2.0mL，按 1.3.4和1.3.5节
方法操作，每隔 5 m i n 测一次。结果如表 1 所示。
表 1结果显示：标准溶液在配制后的 2h内稳定性
良好。样品溶液在配制后的 1 h 内稳定性良好。
计算相对标准偏差(RSD)为：标准溶液的RSD0.62%，
样品溶液的RSD 2.5%。
2.2 单因素试验
2.2.1 黄酮提取剂的确定
在提取温度 80℃、提取时间 1h、琐琐葡萄 2g、溶
剂用量 20 mL 条件下，分别用甲醇、乙醇和水进行提
取，以分光光度计测定提取液的吸光度，选择最好的
提取溶剂。结果见图 2。
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0
吸
光
度
提取剂
乙醇 甲醇 水
图 2 不同提取溶剂的浸提效果比较
Fig.2 Effect of solvent type on extraction rate of total flavonoids
图 1 芦丁最大吸光度的测定
Fig.1 Determination of maximum absorbance wavelength for rutin
0.240
0.235
0.230
0.225
0.215
0.210
0.205
0.200
0.195
吸
光
度
波长 /nm
450 460 470 480 490 500 510520 530 540 550
由图 2 可知：采用水提取效果最差，原因是一些
大分子物质(蛋白质，糖类等)溶出而引入杂质，使得过
滤很难。甲醇提取效果好于水，但甲醇有毒性，而乙
醇的提取不易引入杂质，产品纯度高，所以选择乙醇
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水平
因素
A 乙醇体积分数/% B 提取时间 /min C 提取温度 /℃ D 料液比(g/mL)
1 50 60 60 1:10
2 60 90 70 1:20
3 70 120 80 1:30
表 3 正交试验因素水平
Table 3 Factors and levels of orthogonal experiments
作为最佳的提取溶剂。
2.2.2 样品脱脂与不脱脂的区别
在提取温度 8 0℃、提取 2 次、每次 1 h、琐琐葡
萄量 2g、乙醇溶液用量 20mL条件下。考察提取前对原
料进行脱脂和不脱脂对提取效果的影响。
图 3 结果显示，在相同乙醇体积分数条件下，用
石油醚脱脂后的提取效果好于不脱脂的提取效果，这是
因为在提取过程中，提取溶剂对脂类物质的溶解，降
低了对黄酮类物质的溶解，所以提取前先用石油醚对原
料进行脱脂，可以提高总黄酮的得率。
2.2.3 提取时间的影响
2.2.5 提取温度的影响
在不同温度条件下进行最佳提取温度的选择，图 6
结果表明，8 0℃是最佳的提取温度。
图 6 提取温度对提取效果的影响
Fig.6 Effect of extraction temperature on extraction rate of total
flavonoids
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
吸
光
度
提取温度 /℃
50 60 70 80
2.2.6 料液比的影响
取 4 个料液比水平进行试验，表 2 结果表明，最
佳提取料液比为 1:30(g/mL)。
序号 1 2 3 4
料液比(g/mL) 1:10 1:20 1:30 1:40
吸光度 0.165 0.181 0.199 0.185
表 2 料液比对浸提效果的影响
Table 2 Effect of material-liquid ration on extraction rate of total
flavonoids图 4 提取时间对浸提效果的影响
Fig.4 Effect of extraction time on extraction rate of total flavonoids
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
吸
光
度
时间 /h
40 80 120 160 200
称取 5g琐琐葡萄，用 50mL 70%乙醇溶液在室温下
浸泡。检查提取时间对黄酮提取效果的影响。图 4结果
显示，0～120min期间溶液的吸光度增大，120min后吸
光度降低，原因是高温条件黄酮类物质会损坏，因此
最好的提取时间定为 120min。
2.2.4 乙醇体积分数的影响
黄酮类物质在不同体积分数的乙醇溶液中溶解度有
所不同，所以提取过程中所用的乙醇溶液的体积分数对
提取效果有一定的影响，用不同体积分数的乙醇溶液进
行提取，比较其结果，选择最佳乙醇体积分数。由图
5 可知，用 60 % 乙醇溶液提取效果最好。
2.3 提取工艺条件的优化
由表 3、4可知，各种因素对提取效果影响的主次
图 5 乙醇体积分数对提取效果的影响
Fig.5 Effect of ethanol concentration on extraction rate of total
flavonoids
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
吸
光
度
乙醇体积分数 /%
40 50 60 70
图 3 样品脱脂与不脱脂的区别
Fig.3 Effect of degreasing treatment on extraction rate of total
flavonoids
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
吸
光
度
乙醇体积分数 /%
40 50 60 70
脱脂
不脱脂
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试验 因素 总黄酮
号 A 乙醇体积分数/% B 提取时间 /min C 提取温度 /℃ D 料液比(g/mL) 含量/(mg/g)
1 50 60 60 1:10 3.15
2 50 90 70 1:20 3.86
3 50 120 80 1:30 4.51
4 60 60 70 1:20 4.06
5 60 90 60 1:10 3.35
6 60 120 80 1:30 5.94
7 70 60 80 1:20 3.43
8 70 90 60 1:30 4.68
9 70 120 70 1:10 3.22
k1 11.16 10.64 11.18 9.72
k2 13.35 11.89 11.14 11.35
k3 11.33 13.67 13.88 15.13
R 1 3.72 3.54 3.72 3.24
R 2 4.45 3.96 3.71 3.78
R 3 3.77 4.55 4.62 5.04
R 0.73 1.01 0.91 1.8
表 4 L9(34)的正交试验结果及分析
Table 4 Results and analysis of orthogonal experiments
波长为 500nm。从琐琐葡萄中提取黄酮类化合物的最佳
工艺：提取温度 80℃、乙醇体积分数 60%、提取时间
120min、料液比 1:30(g/mL)。
参 考 文 献 ：
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人民出版社, 1986: 365.
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顺序为料液比＞提取时间＞提取温度＞乙醇体积分数。
琐琐葡萄中黄酮的最佳提取工艺为 A2B3C4D3，即提取温
度 80℃、料液比 1:30(g/mL)、乙醇体积分数 60%、提
取时间 120min。
3 结 论
结果表明琐琐葡萄果实中黄酮类物质的最大吸光度