全 文 ：大花萱草组织培养研究
刘志洋1,李海涛2,朱祥春2,孟 婧2,高继国2*
(1.哈尔滨市农业科学院,哈尔滨 150070;2.东北农业大学生命科学学院,哈尔滨 150030)
摘 要:采取大花萱草茎尖为外植体接种在不同培养基上,研究了不同浓度的 NAA和 6-BA对于外植体生长
的影响,并探索了最适于产生愈伤组织和生根的培养基配方。结果表明,有利于外植体产生愈伤组织的培养基
配方是MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+30g糖+8g琼脂;适合愈伤组织诱导生芽培养基配方是 MS+6-BA
1.0mg·L-1+30g糖+8g琼脂;适合幼苗生根的培养基配方是 1/2MS+NAA0.5mg·L-1+30g糖+8g琼脂。
关键词:大花萱草;组织培养;愈伤组织
中图分类号:S682.1+9 文献标识码:A
收稿日期:2006-12-21
基金项目:东北农业大学开放实验室基金
作者简介:刘志洋(1979-),女,黑龙江人,硕士研究生,研
究方向为花卉育种。
*通讯作者 E-mail:gaojiguo1961@hotmail.com
萱草(Hemerocalismiddendorfi)又称金针花、
忘忧草,为百合科萱草属的多年生耐寒宿根草本
花卉。原产于我国,在我国栽培已有 2000多年的
历史,目前国内栽种缺少矮化品种[1-2]。大花萱草
(Hemerocalisfulva)是在萱草的基础上,经过处理
的多倍体矮生品种[3]。大花萱草植株矮、花期长,
适宜布置花坛、马路隔离带、疏林草坡等处,更
适宜做地被植物,融观叶与观花于一体,是优良
的园林绿地花卉,也可栽于庭院或居室。花蕾可
食用,根可入药,集观赏、食用、药用于一身,
是极为可贵的植物资源。其繁殖以分株为主,但
年增殖率仅 1~2倍。采用组织培养繁殖,不仅可
提高繁殖倍数,而且可以打破季节局限,加快繁
殖速度,实现工厂化育苗[4-6]。本试验探索了利用
组培技术繁育萱草的培养基配方,对社会化生产
实践有一定的指导意义。
1 材料与方法
1.1 材料
大花萱草茎尖。
1.2 方法
培养基:以MS为基础培养基,细胞分裂素采
用6-BA,生长素采用NAA,二者以不同浓度和比
例制成诱导愈伤、分化及生根培养基,探求基础
培养基MS和不同浓度激素及其配比对萱草诱导愈
伤、分化及生根培养基的效果。培养基添加琼脂
8g·L-1加3%蔗糖,在103kPa、121℃条件下灭菌
15min。
接种材料的表面灭菌:用蒸馏水清洗萱草茎
尖,再用70%酒精消毒30s后,用 0.1%升汞消毒
8~10min,然后用灭菌水清洗2~3次。
诱导愈伤组织:将大花萱草茎尖移到MS+6-BA
1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1、MS+6-BA3.0mg·L-1+
NAA0.05mg·L-1、MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2
mg·L-1愈伤培养基中[5-7]。
诱导出芽:将愈伤组织移到MS+6-BA1.0mg·L-1,
MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1琼脂的培养基
中[6-7]。
诱导生根:将出芽的幼苗转移至 1/2MS+NAA
0.1mg·L-1、1/2MS+NAA0.2mg·L-1、1/2MS+NAA
0.5mg·L-1生根培养。
培养条件:培养室温度(25±2)℃,相对湿度
60%~70%,光强1800~2500lx,光照每天12h。
2 结果与分析
2.1 诱导愈伤组织
外植体接种到愈伤培养基 MS+6-BA1.0
mg·L-1+NAA0.05mg·L-1上约 30d后,产生淡黄色
愈伤组织。生长一段时间后将老死褐化部分切除,
新生愈伤组织转入新鲜培养基上继续培养。将产生
第39卷 第1期 东 北 农 业 大 学 学 报 39(1):43~45
2008年 1月 JournalofNortheastAgriculturalUniversity Jan.2008
文章编号 1005-9369(2008)01-0043-03
钳崩
图1 大花萱草愈伤组织的诱导
Fig.1 CalusinductionofHemerocalisfulva
图2 大花萱草芽的产生
Fig.2 ShootregenerationofHemerocalisfulva
图3 大花萱草根的产生
Fig.3 RootproducedfromcalusofHemerocalisfulva
的愈伤组织块每隔2周转移1次,至有大量的愈伤
组织块产生(见图1)。
2.2 诱导出芽
将淡黄色的愈伤组织块切成小块转入继代培
养基 MS+6-BA1.0mg·L-1中。约 10d后,淡黄色
的愈伤组织逐渐变绿,开始产生许多新生芽点,
每隔 20~30d转接 1次新鲜培养基 ,以保证愈伤
组织和新生芽对营养的需求(见图2)。
2.3 诱导生根
将高度约2.0cm的无根再生苗从愈伤组织块上
切下来,在每棵幼苗基部留有一定的愈伤组织,以
利于营养物质的吸收和根的产生。试验结果表明,
1/2MS+NAA0.5mg·L-1诱导生根效果明显(见图3)。
3 讨 论
萱草常规上用播种或分株繁殖引进的品种自
然增殖率年仅一倍,而采用组织培养不但大幅提高
了大花萱草质量和产量,而且克服了常规繁殖方法
的不足,很有实际意义。萱草属植物组织培养以花
梗、花葶和花瓣等花器官为外植体的居多,许多研
究表明,萱草属植物组织培养中花器官的出愈率较
叶片高,但其取材却仅限于花季,有较大的局限
性,以茎尖为外植体进行大花萱草的组织培养,其
出愈率较高,能快速繁殖,取材不受季节限制,这
为快速繁殖良种或育种材料提供了一条可行的新
途径。
利用大花萱草茎尖为外植体在诱导培养中培
养 , 诱 导 产 生 愈 伤 组 织 , 筛 选 出 培 养 基 :
MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1;诱导生芽
培养基:MS+6-BA1.0mg·L-1;诱导生根培养基:
1/2MS+NAA0.5mg·L-1。
将诱导出的愈伤组织转接于分化培养基后,可
以很快形成致密型愈伤组织,并分化出芽丛,经继
代培养后,可以分化出大量健壮的小苗在培养基中
添加适量的6-BA,而不用或少用生长素类调节剂
是取得健壮不定芽苗的关键。
大花萱草的丛生苗,在含有适量萘乙酸的
1/2MS固体培养基中,容易生根。
[ 参 考 文 献 ]
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·44· 东 北 农 业 大 学 学 报 第39卷
StudyontissuecultureofHemerocalisfulva
LIUZhiyang1,LIHaitao2,ZHUXiangchun2,MENGJing2,GAOJiguo2
(1.HarbinAgriculturalResearchInstitute,Harbin150070,China;
2.ColegeofLifeSciences,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030,China)
Abstract:ThestemapexofHemerocalisfulvawastakenasexplantculturedinvitrotoinducecaluswith
diferentculturemedium.Theefectsofdiferentconcentration6-BAandNAAculturemediumonexplantgrowth
wasstudied.TheresultsshowedthatMS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+30gsugar+8gagaragarsolid
culturemediumwasadvantageoustoinducecalus;afterculturedinMS+6-BA1.0mg·L-1+30gsugar+8gagar-
agar,thecompactconstructioncaluswasformedanddiferentiation,theclampseedlingwasformed;and1/2MS+
NAA0.5mg·L-1+30gsugar+8gagaragarsolidculturemediumwasthebestmediumtoinduceroot.
Keywords:Hemerocalisfulva;tissueculture;calustissue
刘志洋等:大花萱草组织培养研究第1期 ·45·