全 文 ：书不同浓度 3 种激素对花毛茛组培增殖率的影响
刘宾照1，高红梅2，陶 艳3
(1．曲靖市农业技术推广中心，云南曲靖 655000;2．云南省呈贡一中，云南呈贡 650500;3．云南省曲靖农校，云南曲靖 655000)
摘要 ［目的］研究不同浓度激素对花毛茛( Ranunculus asiaticus L． ) 组培增殖率的影响，为花毛茛组培苗的商业开发与应用提供参考依
据。［方法］花毛茛的杂交一代( F1 )种子通过无菌催芽得到无菌苗，无菌苗在基本培养基 +糠基嘌呤( 1 mg /L) 培养基上培养驯化 2 代
后，取增殖苗进行 3因素(萘乙酸、苄氨基嘌呤、糠基嘌呤) 3水平的正交试验，探索 3种不同激素及其浓度对花毛茛组培增殖率的影响。
［结果］花毛茛组培增殖率对萘乙酸和糠基嘌呤比较敏感，对苄氨基嘌呤反映不敏感，3 激素及其浓度的最佳组合是 MS +萘乙酸 0． 03
mg /L +苄氨基嘌呤 0． 20 mg /L +糠基嘌呤 2． 50 mg /L，增殖率达到 2． 93，超过生产需要最低增殖率 2． 00水平，能够较好地满足商业生产
的需要。［结论］MS +萘乙酸 0． 03 mg /L +苄氨基嘌呤 0． 20 mg /L +糠基嘌呤 2． 50 mg /L培养基适宜花毛茛组培增殖。
关键词 花毛茛; 组织培养; 增殖率
中图分类号 S682 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611( 2013) 08 －03350 －02
Effects of Different Concentration Three Hormones on the Proliferation Rate of Flower Buttercup( Ranunculus asiaticus L． ) Tissue
Culture
LIU Bin-zhao et al ( Qujing Agricultural Technology Popularization Center，Qujing，Yunnan 655000)
Abstract ［Objective］The aim was to study the effects of different concentration hormones on the proliferation rate of flower buttercup tissue
culture，and to provide a reference basis for its tissue culture seedlings’industrial development and application． ［Method］Aseptic seedlings was
obtained by using flower buttercup hybrid generation ( F1 ) seed through sterile germination，aseptic seedlings cultured in the basic medium + the
furfuryl purine ( 1 mg /L) medium was trained two generations to get proliferation seedlings which were tested three factors ( NAA，benzylamin-
opurine，furfuryl purine) three-level orthogonal experiment，to explore the impacts of three different hormones and their concentration on the rate
of proliferation of tissue culture of flower buttercup． ［Result］The results showed that: the flower buttercup tissue culture proliferation rate were
sensitive to NAA and furfuryl purine，not sensitive to benzylaminopurine; the best combination of the three hormones and their concentration was
MS + NAA 0． 03 + BA 0． 20 mg /L + KT 2． 50 mg /L，the proliferation rate was up to 2． 93，exceeded 2． 00 level of the lowest proliferation rate
the production demands，was better able to meet the commercial production needs． ［Conclusion］MS + NAA 0． 03 mg /L + BA 0． 20 mg /L + KT
2． 50 mg /L culture medium is suitable for flower buttercup tissue culture．
Key words Flower buttercup; Tissue culture; Proliferation rate
作者简介 刘宾照( 1968 － ) ，男，云南沾益人，高级农艺师，从事农业技
术研究与推广应用工作，E-mail: badd111@ 163． com。
收稿日期 2013-03-15
花毛茛(Ranunculus asianticus L．) ，又称芹菜花、波斯毛
茛，昆明地区俗称“洋牡丹”，是毛茛科花毛茛属多年生宿根
草本花卉。原产于以土耳其为中心的亚洲西部和欧洲东南
部，性喜气候温和、空气清新湿润，生长环境疏阴，不耐严寒
冷冻，更怕酷暑烈日。经欧、美等国园艺学家多年驯化和杂
交选育，形成了丰富多样的园艺栽培品种，有盆栽种和切花
种之分。目前，法国、美国、以色列、日本等国家已广泛种植，
世界各国均有栽培。20 世纪 90 年代引入我国，目前栽培地
主要集中在昆明地区。
花毛茛株姿玲珑秀美，花大型美，品种多样，花色丰富艳
丽，有白、粉、黄、红、紫等色，重瓣或半重瓣，株高 20 ～ 40 cm，
块根纺锤形，常数个聚生于根颈部;茎单生，或少数分枝，有
毛;基生叶阔卵形，具长柄，茎生叶无柄，为羽状复叶;花单生
或数朵顶生，花径 3 ～4 cm;花期 4 ～5月。
花毛茛是一种极具增长潜力的花卉类型，近年来由于杂
交一代新品种的成功选育，进一步丰富了花色品种，提升了
其在花卉家族中的地位和影响力，花毛茛的生产消费得到了
空前发展，种苗需求量迅猛扩张。生产上，花毛茛主要是采
用块根分根繁殖，也可通过种子繁殖。分根繁殖繁殖系数
低，种子用量大、成本高，繁殖速度慢，且易带有母株上的病
原菌，极易因病害影响，导致种性退化，降低花卉质量，增大
投资风险;种子繁殖由于种子发芽率低(一般仅 20% ～
40%) ，种性不稳定、品种分离变异性大，生产技术操作难度
大，主要用于新品种培育。通常的繁殖方法高成本、低速度、
易退化、易杂化、质量不稳定等难以满足花毛茛标准化、高品
质、多数量的发展要求，严重制约了花毛茛的商业开发和应
用［1 －2］。相关研究表明，利用组培繁殖方法进行君子兰、康
乃馨、马铃薯等无性繁殖为主的植物的种苗繁殖，具有繁殖
系数高、速度快、质量高、能够较好地保持优良品种特性的优
点，目前，欧洲已经有少量的花毛茛组培苗的商业生产应
用［3 －5］，但我国起步较晚，研究的不多，报道很少，生产上仍
然局限于常规的分根繁殖方法，极大地限制了花毛茛的开发
应用。
为此，笔者应用组织培养技术，以国外进口的杂交一代
种子进行无菌播种发芽，获得无菌苗，进行不同激素及其浓
度对花毛茛增殖率影响的试验研究，探索促进花毛茛组培增
殖的 3种激素及其浓度的最佳组合，为花毛茛组培苗的商业
开发与应用提供参考依据。
1 材料与方法
1． 1 供试品种 富贵(红色) ，杂交一代种。
1． 2 培养无菌苗 种子消毒:75%乙醇消毒 1 min，再用
0． 1%氯化汞消毒 3 min，然后无菌水清洗 3次，滤纸吸干。
种子发芽培养基:基本培养基 +萘乙酸(0． 1 mg /L) ，蔗
糖 20 g /L，琼脂 4． 2 g /L，pH 5． 8。
培养温度(20 ±2)℃，光照强度 1 500 lx，光周期 12 h /d。
责任编辑 姜丽 责任校对 况玲玲安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41(8):3350 － 3351，3417
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.08.150
培养 30 d后获得无菌苗，转入增殖培养基(基本培养基
+ 糠基嘌呤 1． 0 mg /L + 蔗糖 30 g /L + 琼脂 4． 2 g /L，pH
5． 8)培养 2代后进入激素与增殖正交试验。
1． 3 激素与增殖正交试验 培养基:基本培养基 +处理激
素 +蔗糖 30 g /L +琼脂 4． 2 g /L，pH 5． 8。
培养环境:培养温度(20 ±2)℃，光照强度 1 500 lx，光周
期 12 h /d。
试验采用 3因素 3水平正交试验设计，具体见表 1。
表 1 试验所用激素及其浓度设计 mg /L
处理 萘乙酸 苄氨基嘌呤 糠基嘌呤
1 0． 01 0． 1 1． 0
2 0． 01 0． 2 2． 0
3 0． 01 0． 3 2． 5
4 0． 03 0． 1 2． 0
5 0． 03 0． 2 2． 5
6 0． 03 0． 3 1． 0
7 0． 05 0． 1 2． 5
8 0． 05 0． 2 1． 0
9 0． 05 0． 3 2． 0
取获得的无菌苗，分切成单芽，分别接入添加不同浓度
激素的培养基。每处理接 20 瓶，每瓶接 6 苗。培养 35 d后
统计增殖率，统计方式为排除污染后，每处理随机抽取 10
瓶，统计有效芽数(芽的高度大于 0． 5 cm为有效芽)。增殖
率 =处理后有效芽数 /［10瓶 ×(6苗 /瓶) ］。
2 结果与分析
2． 1 不同浓度 3种激素对花毛莨组培增殖率的影响 表 2
为描述性统计结果。从表 3 可以看出，萘乙酸极差最大，对
增殖率影响最大，糠基嘌呤次之，苄氨基嘌呤影响较小。误
表 2 不同浓度 3种激素对花毛茛组培增殖率的影响
处理 原始苗数∥棵 培养 35 d后苗数∥棵 增殖率
1 60 111 1． 85
2 60 125 2． 08
3 60 132 2． 20
4 60 147 2． 45
5 60 176 2． 93
6 60 132 2． 20
7 60 135 2． 25
8 60 100 1． 67
9 60 99 1． 65
表 3 增殖率直观分析结果
处理 萘乙酸 苄氨基嘌呤 糠基嘌呤 误差 增殖率
1 1 1 1 1 1． 85
2 1 2 2 2 2． 08
3 1 3 3 3 2． 20
4 2 1 2 3 2． 45
5 2 2 3 1 2． 93
6 2 3 1 2 2． 20
7 3 1 3 2 2． 25
8 3 2 1 3 1． 67
9 3 3 2 1 1． 65
k1 2． 043 2． 183 1． 907 2． 143
k2 2． 527 2． 227 2． 060 2． 177
k3 1． 857 2． 017 2． 460 2． 107
R 0． 670 0． 210 0． 553 0． 070
差较小，表明试验精度可以接受。
2． 2 不同浓度 3种激素对花毛莨增殖率影响的效应曲线分
析 从图 1可以看出，萘乙酸的效应呈正态分布，当其浓度
为0． 03 mg /L时最有利于增殖，苄氨基嘌呤效应近似正态分
布，当其浓度为 0． 2 mg /L时最有利于增殖;糠基嘌呤的效应
曲线呈线性增长，当其浓度为 2． 5 mg /L时最有利于增殖。
图 1 不同浓度 3种激素对花毛莨增殖率影响的效应曲线
进行方差分析可知，萘乙酸和糠基嘌呤的 F 值分别为
102． 429、70． 000，均显著大于 F临界值 19． 00，表明这 2 个因
素对花毛茛的增殖率的影响显著，苄氨基嘌呤的影响不
显著。
3 结论与讨论
3． 1 结论 3种激素对花毛茛增殖率的影响有一定差异，萘
乙酸对增殖率的影响最大，糠基嘌呤次之，苄氨基嘌呤较小。
萘乙酸和糠基嘌呤对花毛茛增殖率的影响显著，苄氨基嘌呤
的影响不显著。3种激素及其浓度对花毛茛增殖率影响的最
佳组合是萘乙酸0． 03 mg /L +苄氨基嘌呤0． 2 mg /L +糠基嘌
呤 2． 5 mg /L，既 MS +萘乙酸 0． 03 mg /L +苄氨基嘌呤 0． 2
mg /L +糠基嘌呤 2． 5 mg /L最有利于花毛茛组培增殖。这恰
好与组合 5重合，最高增殖率为 2． 93，超过生产需要最低增
殖率 2． 00水平，能够较好地满足生产需要。
3． 2 讨论 该试验效应曲线图表明，在该试验激素使用浓
度范围内，花毛茛的增殖对萘乙酸比较敏感，其最适宜浓度
在 0． 03 mg /L附近，下一步试验可在此基础上进行优化。
(1)该试验中激素使用浓度在0． 1 ～0． 3 mg /L，花毛茛的
增殖对苄氨基嘌呤不敏感。一般认为，苄氨基嘌呤对分化增
殖的作用强度是糠基嘌呤的 5 ～ 10倍，该试验未看到与此相
符的效应，这是苄氨基嘌呤使用浓度不够高还是植物类型差
异所导致，需要另外的试验验证。从该试验结果来看，在花
毛茛的增殖培养中可以考虑不使用苄氨基嘌呤。
(2)在该试验激素使用浓度范围内，花毛茛的增殖对糠
基嘌呤比较敏感，且呈线性相关趋势，因此增加糠基嘌呤可
能还有提高增殖率的空间，因此进一步进行糠基嘌呤的浓度
试验有一定的价值。
(3)因为内源激素的积累会影响长期培养的增殖率，因
此在长期培养的情况下可能需要考虑在试验基础上适度调
整，对此需要进行后续研究以获得更多信息。
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153341 卷 8 期 刘宾照等 不同浓度 3 种激素对花毛茛组培增殖率的影响
表 2 微尾鼩各月的性比
月份
样本数∥只
♀ ♂
卡方检验
性比
(♂ /♀)
差数(♀ －
♂)∥只
2005-03 16 17 χ2 = 0． 030，P =0． 862 1． 06 －1
2005-04 68 60 χ2 = 0． 500，P =0． 480 0． 88 8
2005-05 64 68 χ2 = 0． 121，P =0． 728 1． 06 －4
2005-06 66 66 χ2 = 0，P =1． 000 1． 00 0
2005-07 52 43 χ2 = 0． 853，P =0． 356 0． 83 9
2005-08 35 25 χ2 = 0． 667，P =0． 197 0． 71 10
2005-09 66 45 χ2 = 3． 973，P =0． 046* 0． 68 21
2005-10 78 71 χ2 = 0． 329，P =0． 566 0． 91 7
2005-11 35 23 χ2 = 2． 483，P =0． 115 0． 66 12
2005-12 11 7 χ2 = 0． 889，P =0． 346 0． 64 4
2006-01 0 4 －4
2006-02 3 6 χ2 = 1． 000，P =0． 317 2． 00 －3
月)以亚成体(I)占绝对优势，成体极少，无老体组(IV)个体。
该种年龄结构与蒋凡等的报道“11月至次年2月田间无老体
鼩出现，表明老体鼩难以越冬，说明该鼩的寿命最长不超过 1
年”基本一致［5］;与杨士剑等对臭鼩的研究结论“冬季和初春
种群年龄结构中多数为上年产的个体”类似［7］，冬季的低温
环境中鼩鼱类的体形和质量减小明显，鼩鼱冬季质量比夏季
减少 10% ～30%［8］。微尾鼩洞穴较浅，冬季常可发现冻死的
个体，越冬个体以胴体重标准划分多为亚成体组(Ⅰ) ，但部分
个体从毛色上分辨属于成体一组(Ⅱ) ，应为受冬季恶劣环境
影响体形和质量明显减小的成体一组个体。头一年 9、10 月
出生的微尾鼩幼体生长缓慢，长达 3 ～ 4 个月的时间内绝大
多数一直处于成体一组以前状态。同时，微尾鼩亚成体组
(Ⅰ)、成体一组(Ⅱ)对低温环境的耐受性、适应性强于成年以
后个体。
从年龄结构季节动态结果大致看出，南充市郊区微尾鼩
的生态寿命长短差异较大，寿命较长的为越冬的个体，它们
出生于头一年最后一个繁殖季节，大概为 9、10 月，到下一年
完成繁殖活动后种群更新而逐步死亡，最迟在 8 ～ 10 月种群
中老体组数量下降时先于当年老体组死亡，为 11 ～ 12 个月，
最长不会超过当年 12月初即种群中老年组(IV)个体完全消
失，最大存活期不会超过 15 个月。较短的一组为当年夏季
繁殖(6 ～ 8 月)出生的个体，在当年 12 月以前绝大部分死
亡，最长存活 6 个月。与其他小型兽的精确研究比较，如蒋
光藻指出大足鼠的生命期一般为 10 ～ 12 个月［9］，微尾鼩的
生态寿命在准确测定后可能会更短些。
动物种群的性比是种群特征之一，性比与婚配制度及其
适合度的关系十分密切。有研究报道，四川省彭山县四川短
尾鼩(微尾鼩)雌雄性比差异极显著，在 1 438 只四川短尾鼩
中雌、雄比为 1． 00∶ 1． 44;不同年龄阶段的雌、雄比有所不同，
幼体为 1． 00∶ 2． 42，成体为 1． 00∶ 1． 22，老体差异较大，为 1． 00
∶ 0． 05。该种随种群年龄的增长雄性明显减少的现象可能与
雄性个体对环境变化的适应能力较差有关［5］。廖文波等研
究南充城区微尾鼩时指出，各年龄组间性比差异显著，其种
群性比大小随年龄增加而增加，成体Ⅱ组(Ⅲ)雌性微尾鼩显
著多于雄性;成体 I组(Ⅱ)和未成体 I组(I)雌性和雄性微尾
鼩无显著差异［10］。上述研究都表明，随种群年龄的增长雄
性微尾鼩明显少于雌性。但他们的年龄组划分采用体重指
标，并未考虑雌雄性之间体重的差异，由于微尾鼩雌性大于
雄性(P ＜0． 01) ，导致越往后的大年龄组越少。该次捕获雌
性率略多于雄性(9月♀显著多于♂ ) ，原因可能是微尾鼩繁
殖期长，在繁殖期雌性怀孕、分娩和哺乳等消耗能量多，其夜
间觅食活动多于雄性，所以更易于被捕获。同时，微尾鼩雌
性比雄性大［6］，在频繁的自残打斗中雄性处于劣势［11］，可能
导致雄性个体死亡率增加而生存资源减少，适合度略低于
雌性。
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檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
449 －452．
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714341 卷 8 期 申跃武等 微尾鼩年龄分布与性比研究