全 文 ：收稿日期:2009-10-04
1)基金项目:安徽省高校省级自然科学基金重点项目(KJ2008A15ZD)
牡蒿组培快繁技术研究1)
张德华 ,邓辉 ,刘祥峰 ,张迪
(皖西学院化学与生命科学系 ,安徽 六安 237012)
摘　要:以牡蒿幼嫩茎段为外植体进行组培快速繁殖 ,选用MS 为基本培养基 ,添加不同种类及浓度的
激素 ,接种后进行对比试验。结果表明:牡蒿最佳初代培养基为 MS +6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L ,
继代培养以MS +6-BA1.0mg/L +NAA0.1mg/L组合增殖效果最好 ,生根的最佳培养基为 1/2MS +
IBA 0.5 mg/L
关键词:牡蒿;组织培养;愈伤组织;外植体
Study on Tissue Culture and Rapid Propagation
of Artemisia japonica
Zhang Dehua , Deng Hui , Liu Xiangfeng , Zhang Di
(Department of Chemistry and Life Science , West Anhui University , Lu an , 237012)
Abstract:Tissue culture and rapid propagation wi th Artemisia japonica young branches as explants were
cross-examined by using MS as basic cult ure medium and supplying various hormones at dif ferent concen-
trations.It was found that the initial culture medium MS+6-BA 0.5mg/L + NAA 0.5mg/L , together
with the sub-initial culture MS + 6-BA 1.0mg/L + NAA 0.1mg/L provided the best rat e of propaga-
tion , while the culture medium of 1/2MS + IBA 0.5 mg/L provided the best result of root formation.
Key words:Artemisia japonica Tumb.;Tissue Culture;Callus;Explant s
　　牡蒿(Artemisia japonica Tumb.), 又名齐头蒿 、
土柴胡 、胃痛灵 、熊掌蒿等 ,为菊科蒿属多年生草本植
物[ 1] 。牡蒿全草可入药 ,性温 、味苦微甘 ,具有清热凉
血 ,解暑之功效 ,用于感冒发热 ,中暑 ,疟疾 ,肺痨潮热 ,
高血压 ,创伤出血 ,疔疥肿毒。根用于风清痹痛 ,寒湿
浮肿[ 2] 。牡蒿幼嫩茎 、叶可供食用 ,凉拌 、炒食 、做汤或
火锅用料 ,很多地方流行“三月三”吃蒿子粑粑 ,营养丰
富 ,香味浓郁 ,深受人们喜爱。但天然牡蒿幼嫩茎叶的
采摘时间非常短暂 ,约 15d 左右 ,无法满足长年需要。
野生牡蒿种子营养少 ,难以成熟 ,主要靠地下根无性繁
殖 ,数量有限。又因该植物资源的过度开发和对生境
的特殊要求 ,已处于稀少状态。目前 ,末见有牡蒿人工
繁殖方法的报道。本试验旨在建立和优化牡蒿组培快
繁技术体系 ,为其产业化生产及食用 、药用和保健等深
层次的加工提供原料。
1　材料与方法
1.1　试验材料
3月份从六安市先生店丘陵地区采集。
1.2　材料处理
选择生长旺盛的牡蒿 ,取幼嫩茎段 ,用自来水冲洗
后 ,紫外线灭菌 30min。将茎剪成约 1cm 小段 , 75%酒
精浸泡 30s ,用 0.1%HgCl2 浸泡 6 ～ 8min ,再用无菌水
冲洗 3 ～ 4次 ,制成无菌材料备用[ 3-4] 。
1.3　培养基配制
采用 MS 基本培养基 ,附加不同种类和浓度的激
素 、不同浓度的蔗糖 、加琼脂 6g/L[ 5] 。
初代培养基 :蔗糖 30g/L 。 ⑴MS + 2 , 4-D 1mg/
L + 6-BA0 .1mg/L + NAA0.1mg/L;⑵MS + 6-
BA0.2mg/L +NAA0.2mg/L;⑶MS+6-BA0 .5mg/L
+NAA0 .5m g/L;⑷ M S + 6-BA1mg/L + NAA
0.5mg/L;⑸ M S +6-BA1.5mg/L +NAA0 .5m g/
L;⑹MS + 6-BA2m g/L + NAA1mg/L 。
继代培养基:蔗糖 30g/L 。 ⑺MS +6-BA0.5mg/
L + NAA0.1mg/L;⑻ MS + 6-BA0.5mg/L +
NAA0 .5m g/L;⑼ MS + 6-BA1 .0mg/L +
NAA0 .1mg/L;⑽ M S + 6-BA1 .0mg/L +
NAA0 .5m g/L; ⑾ M S + 6-BA1.5mg/L +
NAA0 .1m g/L;⑿ MS + 6-BA1 .5mg/L +
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第 3期(总第 100) 中 国 林 副 特 产 No.3(GSNO.100)
2009年 6月 Fo rest By-Product and Speciali ty in China Jun.2009
DOI :10.13268/j.cnki.fbsic.2009.03.014
NAA0 .5mg/L 。
生根 培 养 基:蔗糖 1 5 g/L 。 ⒀ 1/2 M S +
IBA0 .0 m g/L ;⒁ 1/2 M S + IBA 0 .5 m g/L ;⒂
1/2 M S + IBA 1 .0 m g /L ;⒃ 1/2 M S + IBA 1 .
5m g/L ;⒄ 1 /2 M S +IBA 2 .0 m g/L[ 6-7] 。
1.4　培养条件
将接种了外植体的三角瓶置于光照培养室内 ,室
温 25℃左右 ,光照度 1000 ～ 2000 lx ,每天光照时间12h
条件下诱导愈伤组织形成。20d 后继代培养 , 40d后生
根培养[ 8-9] 。
1.5　观察记载
在组织培养的不同时期观测记录组织发育情况 、
幼苗长势及生根状况。
2　结果与分析
2.1　不同激素浓度配比对牡蒿愈伤组织形成的影响
由表 1可知 ,在不同培养基上牡蒿愈伤组织产生
的时间略有差异 ,大约在 15 ～ 20d切口处均产生愈伤
组织或不定芽。接种于编号⑴和⑶的外植体产生愈伤
组织最快 ,诱导率达 65%和 70%,愈伤组织生长旺盛
并且很快产生不定芽。
表 1　不同激素浓度配比对愈伤组织形成的影响
编号 激素浓度/(mg· L
-1)
2 , 4-D 6-BA NAA
接种
块数
形成愈伤
组织块数
诱导
率/ %
愈伤组织产
生时间/ d
1 1.0 0.1 0.1 20 13 65 16
2 0.0 0.2 0.2 20 7 35 17
3 0.0 0.5 0.5 20 14 70 15
4 0.0 1.0 0.5 20 10 50 18
5 0.0 1.5 0.5 20 8 40 19
6 0.0 2.0 1.0 20 9 45 20
　　注:诱导率 =形成愈伤组织块数 ÷ 接种块数 × 100%
2.2　不同激素浓度配比对牡蒿继代培养的影响
由表 2可知 ,在 6 种不同配比的培养基下继代培
养 ,幼苗分化结果差异很大。在编号 ⑼和⑽培养基中 ,
分化出芽数和成苗数最多 ,并且芽体鲜绿 、健壮。6-
BA 浓度过高或过低都对芽的生长分化不利。芽的生
长和分化是 6-BA 和 NAA共同作用的结果 ,只有两者
配比适当 ,才能使牡蒿无菌芽生长分化良好。
表 2　不同激素浓度配比对继代培养的影响
编
号
6-BA/
(mg· L-1)
NAA/
(mg· L-1)
平均
分化出
芽数/个
平均成
苗数/个 植株生长势
7 0.5 0.1 3～ 4 1～ 2 苗较高 ,叶黄绿 ,后期略有黄化
8 0.5 0.5 4～ 5 2～ 3 苗小, 细弱 , 叶黄绿 ,后期黄化
9 1.0 0.1 7～ 8 3～ 4 苗高 ,叶鲜绿
10 1.0 0.5 7～ 8 2～ 3 苗高 ,叶鲜绿
11 1.5 0.1 2～ 3 1～ 2 苗较矮 ,叶暗绿
12 1.5 0.5 2～ 3 1～ 2 苗较矮,后期黄化
2.3　不同 IBA 浓度对牡蒿生根的影响
由表 3 可知 , 5 种不同 IBA 浓度对牡蒿生根效果
有明显的差异性 ,编号⒁的培养基生根效果最好 ,随着
培养基中 IBA浓度增高会产生大量的愈伤组织 ,生根
效果逐渐变差。
表 3　不同 IBA 浓度对牡蒿生根的影响
编号 IBA 浓度/(mg· L-1) 生根数
生根率
/ %
平均根
长/ cm 备注
13 0 5 16.7 0.9 生根慢 , 由基部直接生根。
14 0.5 24 80.0 1.9 根生长粗壮 , 且有大量须根。
15 1.0 17 56.7 1.2 生根较好 , 有愈伤组织产生。
16 1.5 17 56.7 0.8 生根较好 , 有愈伤组织产生。
17 2.0 16 53.3 0.6
根生长粗而短 ,
有较大愈伤组织
产生。
3　结论
试验结果表明 , M S +6-BA0 .5mg/L+NAA0 .
5m g/L 培养基有利于牡蒿外植体诱导产生愈伤组
织 ,诱导率可达 70 %;在继代培养基中 , M S + 6-
BA1 .0mg/L + NAA0.1m g/L 组合 ,分化出芽数
和成苗数最多 , 并且芽体鲜绿 、健壮 。 1/2MS +
IBA0 .5mg/L 培养基生根效果最好 , 生根率可达
80 %。
另实验中发现 ,作为外植体的牡蒿茎段越嫩越好 ,
茎段太老不易分化 ,且易被污染。
参 考 文 献
[ 1] 　中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志· 第
七十六卷(第二分册)[ M ] .北京:科学出版社 , 1991:
241-242
[ 2] 　张德华.牡蒿茶加工工艺[ J] .食品与发酵工业 , 2008 ,
34(1):168-171.
[ 3] 　黄白红 ,乔乃妮 ,龚逸 , 等.藜蒿离体培养再生体系的建
立[ J] .安徽农业科学 , 2007 , 35(22):6832-6834.
[ 4] 　包建平 ,秦勇 ,刘娟 , 等.野生蔬菜龙蒿的组织培养技术
研究[ J] .新疆农业大学学报 , 2005 , 28(3):82-85.
[ 5] 　李浚明.植物组织培养教程.2 版[ M] .北京:中国农业
大学出版社 , 2002:20-34.
[ 6] 　秦 勇 , 原丽华 ,日杰甫 ·库尔班 , 等.野生蔬菜椒蒿的
组织培养及植株再生研究[ J] .中国野生植物资源 ,
2007 , 26(3):54-55.
[ 7] 　于飞飞 , 廖宇静 , 贾秀山.青蒿离体快繁技术研究[ J] .
西南师范大学学报(自然科学版), 2008 , 33(1):116-
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[ 8] 　姜淑慧 ,管荣展 ,董海滨 , 等.播娘蒿愈伤组织原生质体
培养体系的研究[ J] .草业学报 , 2006 , 15(4):94-98.
[ 9] 　杨耀文 , 李保军 , 张廷襄.黄花蒿组织培养的初步研究
[ J] .云南中医学院报 , 2001 , 24(2):8.
作者简介:张德华(1957-)男 , 安徽六安人 , 教授 , 研究
方向:天然产物开发。 E-mail:zdhla@163.com
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2009年 中　国　林　副　特　产 第 3期